检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2015年第8期37卷 571-575页

作者：于桂梅周微微祖述龙王子龙陈曦葛金英步志高中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点实验室黑龙江哈尔滨150001 河北农业大学动物医学学院河北保定071000

为研究表达狂犬病病毒(RV)糖蛋白(G)重组新城疫病毒(r L-RVG)中RV G跨膜区(TM)及膜内区(CT)对RV G蛋白表达、病毒蚀斑的形成以及免疫原性的影响,本研究采用新城疫病毒(NDV)融合蛋白(F)的TM和CT替换G蛋白的相应部分,构建出表达RV嵌合G蛋... 详细信息

为研究表达狂犬病病毒(RV)糖蛋白(G)重组新城疫病毒(r L-RVG)中RV G跨膜区(TM)及膜内区(CT)对RV G蛋白表达、病毒蚀斑的形成以及免疫原性的影响,本研究采用新城疫病毒(NDV)融合蛋白(F)的TM和CT替换G蛋白的相应部分,构建出表达RV嵌合G蛋白(RVGTC)的重组NDV(r L-RVGTC)。激光共聚焦和western blot检测结果显示,r L-RVG和r L-RVGTC在BHK-21细胞中RVG表达量无显著差异;而且r L-RVG与r L-RVGTC在鸡胚中的病毒增殖滴度也无显著差异。但间接免疫荧光结果表明,r L-RVGTC在BHK-21细胞中丧失RV或r L-RVG形成病毒蚀斑的能力。并且以5×107半数鸡胚感染量(EID50)的r L-RVG和r L-RVGTC分别免疫小鼠后,r L-RVGTC诱导产生的RV中和抗体的滴度显著低于r L-RVG诱导的滴度。本实验结果显示TM和CT对RV G的病毒蚀斑形成及其免疫原性是必不可少的。

关键词：狂犬病病毒 G蛋白新城疫病毒 F蛋白跨膜区膜内区

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一株野鸟源H9N2亚型禽流感病毒的全基因组序列分析及致病性研究

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中国预防兽医学报 2015年第1期37卷 15-18页

作者：张芳王晶卢昆鹏肖丽彭志崔鹏飞关立峥邓国华陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001 湖南农业大学湖南长沙410128

为进一步了解2014年分离自我国南方野鸟粪便中的一株H9N2亚型禽流感病毒(AIV)Wide Bird/Hu N/SC1400/2014(H9N2)(WB/400/14)的生物学特性,本研究对其进行全基因组序列测定、进化分析及SPF鸡、SPF鸭和BALB/c小鼠的感染性试验。序列分析显... 详细信息

为进一步了解2014年分离自我国南方野鸟粪便中的一株H9N2亚型禽流感病毒(AIV)Wide Bird/Hu N/SC1400/2014(H9N2)(WB/400/14)的生物学特性,本研究对其进行全基因组序列测定、进化分析及SPF鸡、SPF鸭和BALB/c小鼠的感染性试验。序列分析显示:该分离株的HA裂解位点基序为333PAASDR↓GL340,其中不存在多个连续的碱性氨基酸,符合低致病性禽流感病毒(LPAIV)氨基酸序列特征。该分离株不同基因片段来源较复杂,分别与H9、H6、H4、H1、H11、H10、H3等多种亚型的LPAIV同源性较高,呈现明显的多样性。感染性试验显示,WB/400/14不能够在SPF鸡和小鼠体内有效复制,但病毒感染SPF鸭后能够在部分脏器中检测到病毒的存在,并且感染鸭能通够过咽喉和泄殖腔同时向外排毒,而同居感染鸭仅通过泄殖腔向外排毒,表明分离株在SPF鸭群中具有良好的水平传播能力。本研究为AIV的监测和防控提供实验依据。

关键词：野鸟禽流感病毒 H9N2亚型感染性

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表达禽网状内皮组织增生病病毒ggpp90蛋白的毕赤酵母基因工程菌发酵工艺优化研究

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中国家禽 2015年第9期37卷 16-20页

作者：李凯刘鹤赵宪成高宏雷王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 哈尔滨动物生物制品国家工程研究中心有限公司黑龙江哈尔滨150001

禽网状内皮组织增生病(RE)是危害养禽业的重要传染病,基因工程亚单位疫苗是防治该病的最佳选择。研究对表达REV主要保护性抗原基因gp90的重组毕赤酵母基因工程菌株进行了发酵工艺优化,以实现重组gp90蛋白的高效稳定表达。发酵培养基、... 详细信息

禽网状内皮组织增生病(RE)是危害养禽业的重要传染病,基因工程亚单位疫苗是防治该病的最佳选择。研究对表达REV主要保护性抗原基因gp90的重组毕赤酵母基因工程菌株进行了发酵工艺优化,以实现重组gp90蛋白的高效稳定表达。发酵培养基、诱导温度和诱导酸碱度的优化结果表明,当诱导温度为28℃,诱导pH6.0,基础盐培养基中CaSO4、MgSO4、K2SO43种硫酸盐的使用量降低至常用浓度的50%时,目的蛋白获得高水平稳定表达,表达的重组蛋白具有良好生物活性和稳定性。本系列优化试验为重组gp90蛋白制备基因工程亚单位疫苗的产业化奠定了基础。

关键词：禽网状内皮组织增生病 gp90蛋白毕赤酵母发酵工艺优化

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H5亚型禽流感病毒HA蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

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中国兽医科学 2015年第5期45卷 453-457页

作者：卢昆鹏崔鹏飞张芳王晶肖红波邓国华陈化兰湖南农业大学动物医学学院湖南长沙410128 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所国家禽流感参考实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

为制备Clade 2.3.2分支H5亚型禽流感病毒HA蛋白的单克隆抗体,以灭活的超速离心浓缩纯化的H5N1亚型禽流感病毒A/duck/Guangdong/S1322/2010(DK/GD/S1322/2010)免疫6~8周龄的雌性BALB/c小鼠。取免疫后小鼠脾细胞,使其与骨髓瘤细胞(SP2/0)... 详细信息

为制备Clade 2.3.2分支H5亚型禽流感病毒HA蛋白的单克隆抗体,以灭活的超速离心浓缩纯化的H5N1亚型禽流感病毒A/duck/Guangdong/S1322/2010(DK/GD/S1322/2010)免疫6~8周龄的雌性BALB/c小鼠。取免疫后小鼠脾细胞,使其与骨髓瘤细胞(SP2/0)融合,通过血凝抑制(HI)和ELISA方法筛选,共获得2株能够稳定分泌HA蛋白特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株A4和D11。2株单克隆抗体的重链均为IgG1,轻链均为κ链。经HI检测,A4和D11的细胞培养上清和腹水的抗体效价分别为23、22和211、211。HI和中和试验结果显示,这2株单克隆抗体与Clade 2.3.2.B分支和Clade 2.3.2.C分支的病毒反应性良好,而与Clade 2.3.4和Clade 7分支的病毒均不反应。间接免疫荧光试验结果表明,这2株单克隆抗体能够识别MDCK细胞内感染的H5亚型禽流感病毒DK/GD/S1322/2010。结果表明,本研究制备的2株单克隆抗体为H5亚型禽流感病毒的检测和诊断奠定了物质基础。

关键词：禽流感病毒单克隆抗体血凝素

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中国首株H13N6亚型禽流感病毒遗传进化分析及致病性和传播性评估

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中国预防兽医学报 2015年第3期37卷 172-176页

作者：高晓龙范胜涛李胜楠国娇王爱荣孙伟洋李雪虞一聪王铁成李元果桑晓宇于志君张坤高玉伟夏咸柱中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点实验室黑龙江哈尔滨150001 军事医学科学院军事兽医研究所吉林省人兽共患病预防与控制重点实验室吉林长春130062

为了解我国首次分离的H13N6亚型禽流感病毒(AIV)生物学特性,本研究对该分离株进行全基因序列测定和分析,并对其进行BALB/c小鼠和SPF鸡致病性试验以及豚鼠传播试验。序列分析表明HA碱性裂解位点序列为PAISNR↓G,为低致病性AIV。遗传进化... 详细信息

为了解我国首次分离的H13N6亚型禽流感病毒(AIV)生物学特性,本研究对该分离株进行全基因序列测定和分析,并对其进行BALB/c小鼠和SPF鸡致病性试验以及豚鼠传播试验。序列分析表明HA碱性裂解位点序列为PAISNR↓G,为低致病性AIV。遗传进化分析表明NA基因属于北美谱系,其余7个基因均属于欧亚谱系;其中NA、NP、M、NS基因来源于鸥类,而HA、PB2、PB1、PA基因来源于野鸭类。动物致病性和传播试验结果显示,该病毒株在鸡和小鼠体内不能进行有效复制,在豚鼠和鸡体内也不能进行排毒和有效传播。基因序列分析结合致病性和传播性试验表明H13N6亚型AIV分离株可能是通过候鸟迁徙而传入我国的新型重组AIV,但该病毒株仍只能感染野生水禽尚未获得跨越种间屏障感染陆生家禽和人的能力,尚不具备哺乳动物间和家禽间的传播能力。

关键词： H13N6 传播致病力鸡小鼠豚鼠

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应用酵母双杂交系统筛选与流感病毒NS2蛋白相互作用的宿主蛋白

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中国预防兽医学报 2015年第8期37卷 576-580页

作者：邵信媛朱鹏阳罗维玉赵玉辉梁立滨姜丽陈化兰胡永浩李克生李呈军甘肃农业大学动物医学学院甘肃兰州730070 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点实验室黑龙江哈尔滨150001

流感病毒的NS2蛋白能够介导病毒核糖核蛋白复合体(v RNP)的核输出过程,而且可以调控病毒聚合酶的活性,参与禽流感病毒在哺乳动物宿主体内的适应过程。为鉴定与NS2相互作用的宿主蛋白,本研究利用流感病毒NS2蛋白作为"诱饵"蛋白... 详细信息

流感病毒的NS2蛋白能够介导病毒核糖核蛋白复合体(v RNP)的核输出过程,而且可以调控病毒聚合酶的活性,参与禽流感病毒在哺乳动物宿主体内的适应过程。为鉴定与NS2相互作用的宿主蛋白,本研究利用流感病毒NS2蛋白作为"诱饵"蛋白,通过经典酵母双杂交系统筛选与其相互作用的宿主蛋白,并利用免疫共沉淀(Co-IP)和GST pull-down方法进一步验证其相互作用关系。结果表明,通过酵母双杂交系统筛选含有Calu-3、A549、THP-1和U251 4种细胞的c DNA文库,共筛选到7种蛋白,分别为HGS、EXOSC4、ZWINT、PRDX3、IRF3、NDUFB9和RMND5B,根据Gene Ontology分析结果表明,这些蛋白分别参与细胞生长发育、细胞代谢和细胞定位等过程。其中对过氧化物氧还酶3(PRDX3)进行了Co-IP和GST pull-down试验证实重组表达的NS2蛋白和PRDX3蛋白在293T细胞中存在特异性的相互作用。本研究为进一步研究两者之间相互作用如何影响NS2蛋白功能以及病毒的复制周期奠定了基础。

关键词：禽流感病毒 NS2蛋白酵母双杂交免疫共沉淀宿主蛋白

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TK基因缺失对鸭肠炎病毒在鸡胚成纤维细胞中复制影响的评价

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中国预防兽医学报 2015年第5期37卷 339-343页

作者：王玉龙李慧昕李冰胡永浩刘胜旺甘肃农业大学动物医学学院甘肃兰州730070 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

为鉴定鸭肠炎病毒(DEV)的非必需基因,本研究利用增强型绿色蛋白(EGFP)基因为报告基因,通过在转染的鸡胚成纤维细胞(CEF)中同源重组,将其插入DEV基因组的TK基因中,经筛选和纯化绿色荧光病毒蚀斑,获得表达EGFP的重组DEV,命名为r DEVTK-EGF... 详细信息

为鉴定鸭肠炎病毒(DEV)的非必需基因,本研究利用增强型绿色蛋白(EGFP)基因为报告基因,通过在转染的鸡胚成纤维细胞(CEF)中同源重组,将其插入DEV基因组的TK基因中,经筛选和纯化绿色荧光病毒蚀斑,获得表达EGFP的重组DEV,命名为r DEVTK-EGFP。对重组病毒与亲本病毒DEV Clone-03复制动力学比较结果显示,重组病毒滴度显著低于亲本病毒(p<0.01)。对重组病毒在复制过程中感染细胞能力和荧光表达时相检测结果表明,在感染后48 h^72 h表达荧光信号细胞明显增多,该结果与重组病毒复制动力学一致。将重组病毒在CEF中连续传代至20代,仍具有遗传稳定性。该研究结果表明,TK基因为DEV复制非必需基因,可以作为外源基因插入位点,用于禽用新型基因工程疫苗的研制。

关键词：鸭肠炎病毒 TK基因重组病毒病毒复制

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应用酵母双杂交方法筛选与马传染性贫血病毒Rev蛋白相互作用的蛋白

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中国预防兽医学报 2015年第4期37卷 315-317页

作者：苏朝尹鑫马建王晓钧中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/马传染病与慢病毒团队黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030

为研究马传染性贫血病毒(EIAV)蛋白与马巨噬细胞蛋白之间的相互作用,本研究利用SMART技术构建了马巨噬细胞的酵母双杂交c DNA文库,并利用该文库调取与EIAV Rev蛋白相互作用的细胞蛋白,构建诱饵质粒p GBKT7-rev,通过表型检测Rev的自激活... 详细信息

为研究马传染性贫血病毒(EIAV)蛋白与马巨噬细胞蛋白之间的相互作用,本研究利用SMART技术构建了马巨噬细胞的酵母双杂交c DNA文库,并利用该文库调取与EIAV Rev蛋白相互作用的细胞蛋白,构建诱饵质粒p GBKT7-rev,通过表型检测Rev的自激活和细胞毒性作用,并与构建的文库进行杂交筛选。对获得阳性克隆进行序列测定和比对分析,根据分析结果进行共转化验证。结果显示,文库的容量为3×108 cfu/m L。Rev蛋白在酵母双杂交系统中无自激活现象和细胞毒性作用。此外,本实验共筛选得到5个与EIAV Rev相互作用的宿主细胞蛋白。本研究为进一步研究Rev蛋白的生物学新功能奠定了基础。

关键词：马传染性贫血病毒 Rev蛋白酵母双杂交cDNA文库马巨噬细胞

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支气管败血波氏杆菌Δhfq突变株构建及生物学特性分析

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中国预防兽医学报 2015年第2期37卷 101-105页

作者：翟莹郭东春王林柏刘家森田进刘春国刘大飞姜骞曲连东东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/自然疫源性人兽共患病创新团队黑龙江哈尔滨150001

为研究Hfq蛋白在支气管败血波氏杆菌(Bb)的致病作用,本研究采用同源重组技术,将卡那霉素抗性基因替换Bb122株的hfq基因,构建BbΔhfq突变株。将其连续传20代,Δhfq突变株具有良好的遗传稳定性。生化检测试验表明,突变株与亲本株未发生明... 详细信息

为研究Hfq蛋白在支气管败血波氏杆菌(Bb)的致病作用,本研究采用同源重组技术,将卡那霉素抗性基因替换Bb122株的hfq基因,构建BbΔhfq突变株。将其连续传20代,Δhfq突变株具有良好的遗传稳定性。生化检测试验表明,突变株与亲本株未发生明显改变。此外,在37℃培养时,突变株与亲本株生长曲线无明显差异,但在42℃培养时,突变株的生长曲线略低于亲本株。抗逆性试验表明,突变株与亲本株在紫外线照射和50℃条件下,亲本株的耐受能力均显著高于突变株(p<0.05)。然而,将亲本株与突变株分别以2×109cfu/只腹腔接种小鼠时,亲本株接种小鼠全部死亡,而突变株接种小鼠则全部存活,表明Hfq蛋白与该菌的致病性有关。本研究为进一步研究Hfq蛋白的功能及其在Bb致病机制中的作用奠定了基础。

关键词：支气管败血波氏杆菌 hfq基因突变株致病性

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结核分枝杆菌rv3295基因的原核表达及单克隆抗体的制备

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中国兽医科学 2015年第2期45卷 172-176页

作者：崔莹莹宋宁宁党光辉曹俊李华芳于申业刘思国吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130000 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室黑龙江哈尔滨150001

以结核分枝杆菌H37Rv标准株基因组DNA为模板,通过PCR扩增了rv3295基因;将其克隆至表达载体pET-22b中,构建了重组质粒pET-22b-Rv3295;将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达出了Rv3295蛋白。通过亲和层析纯化,以该重组蛋... 详细信息

以结核分枝杆菌H37Rv标准株基因组DNA为模板,通过PCR扩增了rv3295基因;将其克隆至表达载体pET-22b中,构建了重组质粒pET-22b-Rv3295;将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达出了Rv3295蛋白。通过亲和层析纯化,以该重组蛋白为免疫原免疫BALB/c小鼠,利用细胞融合筛选制备抗该重组蛋白的单克隆抗体;采用Western-blot验证单克隆抗体的特异性;通过亚型鉴定试剂盒鉴定单克隆抗体的亚型。结果显示,Rv3295蛋白以可溶形式表达,蛋白质的分子质量大小为25ku。获得1株抗该重组蛋白的单克隆抗体1F7,其亚型为IgG1/κ;Western-blot结果显示,该抗体具有较好的特异性。本研究制备的Rv3295蛋白的单克隆抗体对于研究Rv3295蛋白的功能及其与DNA之间的互作奠定了基础。

关键词：结核分枝杆菌 rv3295基因原核表达单克隆抗体

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