检索结果-内蒙古大学图书馆

动物医学进展 2014年第1期35卷 111-115页

作者：刘建波张辉刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

自猪圆环病毒病(PCVAD)暴发以来,该病已成为全球养猪业危害较为严重的疾病之一,主要以断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)和猪呼吸道疾病综合征(PRDC)为主。2005年前从PMWS病例分离到的猪圆环病毒2型(PCV-2)流行毒株以PCV-2a基因亚型为主,... 详细信息

自猪圆环病毒病(PCVAD)暴发以来,该病已成为全球养猪业危害较为严重的疾病之一,主要以断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)和猪呼吸道疾病综合征(PRDC)为主。2005年前从PMWS病例分离到的猪圆环病毒2型(PCV-2)流行毒株以PCV-2a基因亚型为主,此后以PCV-2b基因亚型为优势,且流行毒株毒力有明显增强趋势。近年来,PCVAD的流行形式发生了一定变化,PMWS发生率降低,而PRDC发生率明显上升。PMWS症状与感染沙门菌、猪细小病毒、猪肺炎支原体等病原体有关。与PCV-2相关的PRDC主要由PCV-2与PRRSV、猪肺炎支原体混合感染造成。尽管当前通过疫苗免疫接种对本病得到了有效遏制,但PCVAD流行新特点应引起研究者关注。

关键词：猪圆环病毒2型猪圆环病毒病流行趋势防控对策

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抗鸭坦布苏病毒E蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

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中国兽医科学 2014年第8期44卷 833-837页

作者：白小飞刘红玉陈玉环殷秀辰刘明张云中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030

为了制备抗鸭坦布苏病毒(DTMUV)囊膜(E)蛋白的单克隆抗体,将鸭坦布苏病毒E基因进行原核表达,目的蛋白被纯化后免疫6周龄雌性BALB/c小鼠,按常规的单克隆抗体的制备技术,取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合,经间接ELISA方法筛选及3次连续克... 详细信息

为了制备抗鸭坦布苏病毒(DTMUV)囊膜(E)蛋白的单克隆抗体,将鸭坦布苏病毒E基因进行原核表达,目的蛋白被纯化后免疫6周龄雌性BALB/c小鼠,按常规的单克隆抗体的制备技术,取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合,经间接ELISA方法筛选及3次连续克隆化共获得6株能稳定分泌抗E蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞,它们分别被命名为1F3、1G2、1B11、2A5、3B6和4F9。Dot-ELISA及Western-blot分析结果表明,这6株单克隆抗体均能与原核表达的E蛋白特异性结合。经间接免疫荧光(IFA)试验验证,这6株单克隆抗体均能识别鸭坦布苏病毒感染的细胞,且荧光主要位于细胞质中。结果表明,本研究成功制备了6株抗鸭坦布苏病毒E蛋白的单克隆抗体。鸭坦布苏病毒E蛋白单克隆抗体的制备为今后鸭坦布苏病毒快速的病原学诊断以及E蛋白的结构和功能研究奠定了物质基础。

关键词：鸭坦布苏病毒 E蛋白原核表达单克隆抗体免疫印迹斑点杂交间接免疫荧光

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犬瘟热病毒TaqMan实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用

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中国兽医科学 2014年第6期44卷 589-592页

作者：全传松李博韬姜骞李连峰于作曲连东中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030

为建立快速检测犬瘟热病毒的诊断方法,根据GenBank中犬瘟热病毒核衣壳蛋白(NP)基因的保守序列设计1对特异性引物和1条特异性探针,通过对反应体系和反应条件的优化,建立了TaqMan实时荧光定量RT-PCR检测方法。结果显示,该方法对犬瘟热病... 详细信息

为建立快速检测犬瘟热病毒的诊断方法,根据GenBank中犬瘟热病毒核衣壳蛋白(NP)基因的保守序列设计1对特异性引物和1条特异性探针,通过对反应体系和反应条件的优化,建立了TaqMan实时荧光定量RT-PCR检测方法。结果显示,该方法对犬瘟热病毒最低检出量为80copies/μL,是常规RT-PCR的100倍;与其他犬类病毒不发生交叉反应;组内、组间变异系数均小于5%。对收集的67份临床样品进行检测,阳性检出率为64.2%,而常规RT-PCR的阳性检出率为44.8%。研究结果表明,建立的TaqMan实时荧光定量RT-PCR具有良好的敏感性、特异性和稳定性,为犬瘟热的早期诊断提供了技术手段。

关键词：犬瘟热病毒 TaqMan 实时荧光定量RT-PCR

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不同毒力传染性法氏囊病病毒衣壳蛋白酵母双杂交诱饵载体的构建及鉴定

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中国畜牧兽医 2014年第1期41卷 30-34页

作者：陈玉明张礼洲任宪刚高立秦立廷高玉龙王永强高宏雷王笑梅祁小乐中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

传染性法氏囊病病毒(infectious bursal disease virus,IBDV)毒株Gx(超强毒株)、F9(中等毒力毒株)、Gt(弱毒株)遗传背景高度相似,但生物学性状差异显著。为研究不同毒力毒株与宿主细胞相互作用的分子细节,本研究将IBDV Gx、F9、Gt毒株... 详细信息

传染性法氏囊病病毒(infectious bursal disease virus,IBDV)毒株Gx(超强毒株)、F9(中等毒力毒株)、Gt(弱毒株)遗传背景高度相似,但生物学性状差异显著。为研究不同毒力毒株与宿主细胞相互作用的分子细节,本研究将IBDV Gx、F9、Gt毒株的衣壳蛋白VP2基因克隆入pGBKT7载体,分别构建了诱饵载体pGBGxVP2、pGBF9VP2和pGBGtVP2。经Matchmaker Gold Yeast Two-hybrid System验证,结果显示所构建的3个诱饵载体均无自激活作用,对酵母细胞无毒性作用。本研究为利用酵母双杂交系统深入研究IBDV与宿主相互作用奠定了基础。

关键词：传染性法氏囊病病毒衣壳蛋白酵母双杂交诱饵载体自激活作用毒性作用

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鸡传染性喉气管炎病毒gG蛋白多克隆抗体的制备及初步应用

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中国兽医科学 2014年第2期44卷 165-170页

作者：孙永珍赵妍孔聪聪崔红玉王云峰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽呼吸道病创新团队黑龙江哈尔滨150001 哈尔滨动物生物制品国家工程研究中心有限公司黑龙江哈尔滨150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽呼吸道病创新团队黑龙江哈尔滨150001

以鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)LJS09株基因组为模板,应用PCR方法扩增gG基因的主要抗原性片段,并克隆至原核表达载体pET-30a(+)构建pET-30a-gG-gG串联质粒,转化Rosetta(DE3),经IPTG诱导表达及纯化,获得His-gG-gG重组蛋白,免疫新西兰大白... 详细信息

以鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)LJS09株基因组为模板,应用PCR方法扩增gG基因的主要抗原性片段,并克隆至原核表达载体pET-30a(+)构建pET-30a-gG-gG串联质粒,转化Rosetta(DE3),经IPTG诱导表达及纯化,获得His-gG-gG重组蛋白,免疫新西兰大白兔制备抗血清。用ELISA检测抗体效价为1∶104。Western-blot分析结果表明,制备的家兔抗-ILTV gG抗体能与纯化的gG蛋白发生特异性反应,且能检测到内源性gG蛋白。间接免疫荧光试验结果表明,制备的家兔抗ILTV-LJS09gG蛋白的多克隆抗体分别能与ILTV LJS09、HLJ0507、MDJ0442、SD0203、Zhj1298株反应,特异性良好。

关键词：传染性喉气管炎病毒 gG蛋白原核表达多克隆抗体间接免疫荧光试验

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猪流行性腹泻病毒野毒株/疫苗株RT-PCR鉴别诊断方法的建立

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中国兽医杂志 2014年第6期50卷 6-8页

作者：李长龙陈建飞张鑫时洪艳冯力中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

开放阅读框3（Open reading frame 3,ORF3）是猪流行性腹泻病毒（PEDV）基因组中的惟一辅助基因。前期研究表明,PEDV疫苗株的ORF3在245~293位缺失49个核苷酸。在ORF3缺失区域两端设计合成引物建立反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）可以对P... 详细信息

开放阅读框3（Open reading frame 3,ORF3）是猪流行性腹泻病毒（PEDV）基因组中的惟一辅助基因。前期研究表明,PEDV疫苗株的ORF3在245~293位缺失49个核苷酸。在ORF3缺失区域两端设计合成引物建立反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）可以对PEDV野毒株和疫苗株进行鉴别诊断,野毒株扩增产物为319 bp,疫苗株扩增产物为270 bp。用该鉴别诊断方法对猪传染性胃肠炎病毒、猪轮状病毒、猪瘟病毒、猪伪狂犬病病毒和猪繁殖和呼吸综合征病毒的cDNA进行扩增均无特异性条带,说明该方法特异性强。现地病料的检测结果表明,该鉴别诊断方法能够区分PEDV野毒和疫苗株,而且可以排除其他病毒的影响,有助于减少免疫猪被淘汰的可能,降低经济损失。

关键词：猪流行性腹泻病毒 ORF3 RT-PCR 鉴别诊断

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雀形目野生鸟类REV感染状况的调查及分离株gp90基因序列分析

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中国兽医学报 2014年第7期34卷 1078-1082,1113页

作者：郝瑞军庄艳娜燕超么帅高宏雷秦立廷高玉龙曾祥伟王笑梅东北林业大学野生动物资源学院黑龙江哈尔滨150040 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

为了解雀形目野生鸟类感染禽内皮组织增生症病毒（Reticuloendotheliosis virus,REV）的情况,采集了352份样品,应用PCR方法进行了初筛。然后将阳性样品适当处理后接种CEF细胞,利用IFA等方法进一步鉴定。结果分离到2株病毒WB11042和WB110... 详细信息

为了解雀形目野生鸟类感染禽内皮组织增生症病毒（Reticuloendotheliosis virus,REV）的情况,采集了352份样品,应用PCR方法进行了初筛。然后将阳性样品适当处理后接种CEF细胞,利用IFA等方法进一步鉴定。结果分离到2株病毒WB11042和WB11043,分别来自黄喉鹀和燕雀。对2株REV分离株的gp90基因进行扩增、测序和序列分析。结果显示,其gp90序列与REV亚型Ⅲ的代表毒株（CSV、APC-566）亲缘关系最近,高达99%以上;与亚型Ⅱ代表株（SNV）和亚型Ⅰ代表株（HA9901）的亲缘关系相对较远,在95.5%~97.1%之间。遗传进化树分析也表明这2株野生鸟类分离株属于REV亚型Ⅲ。结果表明,雀形目野生鸟类也可以感染REV。

关键词：野生鸟类 REV gp90 序列分析

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波形蛋白与猪瘟病毒衣壳蛋白定位分析

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中国预防兽医学报 2014年第9期36卷 740-742页

作者：张鑫时洪艳徐佳赵鑫中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 黑龙江省动物卫生监督所黑龙江哈尔滨150069

为了解波形蛋白在ST细胞中的定位及其与猪瘟病毒(CSFV)衣壳蛋白(C)的共定位关系,本研究采用抗体对波形蛋白的细胞定位进行检测,并将CSFV C蛋白真核表达重组质粒转染于ST细胞中,转染12 h和24 h后利用激光共聚焦显微镜观察波形蛋白和CSFV ... 详细信息

为了解波形蛋白在ST细胞中的定位及其与猪瘟病毒(CSFV)衣壳蛋白(C)的共定位关系,本研究采用抗体对波形蛋白的细胞定位进行检测,并将CSFV C蛋白真核表达重组质粒转染于ST细胞中,转染12 h和24 h后利用激光共聚焦显微镜观察波形蛋白和CSFV C蛋白在细胞中的定位情况。结果表明,波形蛋白在细胞核周围定位,并且与CSFV C蛋白在细胞中存在共定位现象。本研究为进一步研究波形蛋白在病毒复制过程中的机制奠定基础。

关键词：波形蛋白猪瘟病毒衣壳蛋白共定位

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基于单核细胞增生李斯特菌prfA基因新型原核温控表达载体的构建

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中国预防兽医学报 2014年第9期36卷 688-691页

作者：田秋丰于申业衣菲倪宏波吕雪莲刘思国黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室黑龙江哈尔滨150001

单核细胞增生李斯特菌的prfA基因编码一个温度控制启动蛋白,具有在37℃条件下启动下游基因表达的功能。为构建新型原核温控诱导表达载体,本研究利用PCR方法扩增prfA基因,并将其与绿色荧光蛋白(GFP)或红色荧光蛋白(DsRed)基因分别插入到p... 详细信息

单核细胞增生李斯特菌的prfA基因编码一个温度控制启动蛋白,具有在37℃条件下启动下游基因表达的功能。为构建新型原核温控诱导表达载体,本研究利用PCR方法扩增prfA基因,并将其与绿色荧光蛋白(GFP)或红色荧光蛋白(DsRed)基因分别插入到pET-28a和pUC19载体中,构建重组质粒pET-prfA-EGFP和pUC-prfA-DsRed。将重组质粒转化大肠杆菌DH5α,在37℃条件下培养,利用激光共聚焦显微镜观测细菌中荧光蛋白的表达情况。结果表明,构建的两种重组质粒的荧光蛋白基因于37℃条件下,在受体菌中均获得有效表达,而30℃时则仅有微弱的本底荧光蛋白表达。本研究构建了以最适生理温度为单一诱导条件的温控表达的新型原核细胞表达载体,为蛋白的表达与功能研究提供了新的平台。

关键词：单核细胞增生李斯特菌 prfA基因温控表达荧光蛋白

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通过改进Red重组方法快速构建肠炎沙门菌毒力岛SPI-1缺失株

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中国预防兽医学报 2014年第11期36卷 852-855页

作者：吕雪莲于申业倪宏波衣菲田秋丰刘思国黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室黑龙江哈尔滨150001

沙门菌依赖毒力岛SPI-1编码的Ⅲ型分泌系统在侵染宿主肠道上皮细胞中起重要作用。为制备沙门菌毒力岛SPI-1缺失株,本研究利用PCR扩增毒力岛SPI-1上下游同源臂和含有氯霉素抗性基因片段,连接p ET-28a构建打靶质粒,采用电击法将其转入含有... 详细信息

沙门菌依赖毒力岛SPI-1编码的Ⅲ型分泌系统在侵染宿主肠道上皮细胞中起重要作用。为制备沙门菌毒力岛SPI-1缺失株,本研究利用PCR扩增毒力岛SPI-1上下游同源臂和含有氯霉素抗性基因片段,连接p ET-28a构建打靶质粒,采用电击法将其转入含有p KD46a质粒的肠炎沙门菌中。经L-阿拉伯糖诱导同源重组后,鉴定阳性重组子,转化诱导产生重组酶FLp的p CP20质粒,从而删除氯霉素抗性基因,通过PCR方法鉴定缺失株,命名为SM6ΔSPI-1。连续培养鉴定表明缺失株具有良好的遗传稳定性。生长特性研究显示缺失株生长速率高于野生菌株。本研究利用改进的Red重组系统通过一步法构建了肠炎沙门菌毒力岛SPI-1缺失株,为沙门菌毒力岛的功能研究与基因工程减毒疫苗研制奠定了基础。

关键词：毒力岛SPI-1 Red同源重组缺失株

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