检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2014年第9期36卷 704-707页

作者：吕让王丹宋彩玲齐宾宾刘明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 黑龙江省医院黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030

为建立稳定表达跨膜丝氨酸蛋白酶2(TMPRSS2)基因的MDCK细胞系,本研究采用RT-PCR扩增TMPRSS2基因,克隆于逆转录病毒载体pLXSN中,构建重组质粒pLXSN-TMPRSS2。采用脂质体转染的方式将重组质粒pLXSN-TMPRSS2、pGP和pE-ampho共转染293T细胞... 详细信息

为建立稳定表达跨膜丝氨酸蛋白酶2(TMPRSS2)基因的MDCK细胞系,本研究采用RT-PCR扩增TMPRSS2基因,克隆于逆转录病毒载体pLXSN中,构建重组质粒pLXSN-TMPRSS2。采用脂质体转染的方式将重组质粒pLXSN-TMPRSS2、pGP和pE-ampho共转染293T细胞,获得逆转录病毒样颗粒。将逆转录病毒样颗粒感染MDCK细胞,经G418加压筛选和有限稀释法克隆及RT-PCR和间接免疫荧光(IFA)等试验的鉴定,建立了稳定表达TMPRSS2基因的MDCK细胞系。此外,红细胞凝集试验和IFA结果还显示,流感病毒可以在无外源胰酶存在的条件下在该细胞系中增殖,从而为流感细胞培养型病毒株的大规模生产奠定了基础。

关键词：跨膜丝氨酸蛋白酶2 逆转录病毒 MDCK细胞系 TMPRSS2

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猪圆环病毒2型Cap蛋白单克隆抗体制备及线性抗原表位鉴定

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中国预防兽医学报 2014年第4期36卷 310-313页

作者：张璐王延群郝立沙高明明李爱东陶冶李莉涂亚斌蔡雪辉路义鑫东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物疫病诊断中心黑龙江哈尔滨150001

为制备猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白单克隆抗体(MAb)及鉴定其抗原表位,本研究采用PCV2去核定位信号Cap蛋白(dCap),通过杂交瘤技术制备1株杂交瘤细胞株(4E2),制备小鼠腹水效价达1∶64 000,亚类鉴定为IgG1/κ链。Western blot分析显示,该株... 详细信息

为制备猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白单克隆抗体(MAb)及鉴定其抗原表位,本研究采用PCV2去核定位信号Cap蛋白(dCap),通过杂交瘤技术制备1株杂交瘤细胞株(4E2),制备小鼠腹水效价达1∶64 000,亚类鉴定为IgG1/κ链。Western blot分析显示,该株MAb与毕赤酵母表达的dCap和原核表达的Cap蛋白均可以发生特异性免疫反应。采用肽扫描法对MAb的非核定位信号区进行抗原表位鉴定,结果表明该MAb可以识别的线性表位区域为131TKATALTYDPYVNYSS146。本实验结果为进一步研究Cap蛋白的结构和PCV2临床检测方法的建立奠定基础。

关键词：猪圆环病毒2型 dCap 单克隆抗体表位

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猪圆环病毒2型重组病毒分离株的鉴定

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动物医学进展 2014年第6期35卷 26-31页

作者：李海超韩凌霞东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所实验动物与比较医学团队兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

为了解某猪场猪圆环病毒2型（PCV-2）的流行及毒株基因组变异情况，应用 PCR 方法从6个疑似断奶仔猪多系统衰竭综合征（PMWS）病死猪的心脏、淋巴结、脾脏和肺脏等病料中进行猪圆环2型病毒的检测，并对阳性病料进行 PCV-2全基因组的扩... 详细信息

为了解某猪场猪圆环病毒2型（PCV-2）的流行及毒株基因组变异情况，应用 PCR 方法从6个疑似断奶仔猪多系统衰竭综合征（PMWS）病死猪的心脏、淋巴结、脾脏和肺脏等病料中进行猪圆环2型病毒的检测，并对阳性病料进行 PCV-2全基因组的扩增，将成功扩增到的6株 PCV-2全基因组克隆到 pMD-18T Simple Vector，构建重组质粒。对全基因组进行测序，然后对全基因组进行同源性、遗传进化、重组以及毒力分析。结果表明，6株 PCV-2基因组长度均为1767 bp，与参考序列的同源性在88．1％～99．6％之间，并且 LNF3、HEBF5和 HEN65为 PCV-2b1C 基因型，LN51为 PCV-2b1B 基因型，HEN60株为 PCV-2b1A 基因型，HEBF7属于 PCV-2a，但不属于任何亚型，可能为 PCV-2a 向 PCV-2b 的过渡株。利用重组分析软件RDP4．25和 SIMPLOT3．5．1分析，表明 LN51株可能来自 PCV-2a2A 和 PCV-2b1A 基因型的重组。根据PCV-2 Cap 的76位和131位氨基酸残基，有5株符合强毒特征（76I、131T），而 HEBF7株存在强、弱毒的特征。本研究为我国 PCV-2流行株的分子特征研究提供了参考。

关键词：猪圆环病毒2型毒力重组基因型

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口蹄疫病毒TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立

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中国预防兽医学报 2014年第12期36卷 948-951页

作者：胡晓亮姜骞仇铮郭东春刘家森林欢刘培新田进李志杰刘大飞刘春国曲娟娟曲连东中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/实验动物研究室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学生命科学学院黑龙江哈尔滨150030 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030

为建立检测口蹄疫病毒(FMDV)的方法,本研究根据Gen Bank中FMDV的2B基因序列,设计合成一对引物和一条Taq Man探针,将2B基因克隆到p Blue Script SK(-)载体中,利用T7体外转录试剂盒制备标准品,通过优化反应条件,建立了Taq Man荧光定量PCR... 详细信息

为建立检测口蹄疫病毒(FMDV)的方法,本研究根据Gen Bank中FMDV的2B基因序列,设计合成一对引物和一条Taq Man探针,将2B基因克隆到p Blue Script SK(-)载体中,利用T7体外转录试剂盒制备标准品,通过优化反应条件,建立了Taq Man荧光定量PCR检测方法。结果表明,该检测方法的敏感性达到102拷贝/μL;与其它主要相关病毒均不发生交叉反应,批内和批间试验重复性的变异系数(CV)均小于3%。本研究建立的FMDV Taq Man荧光定量PCR方法对FMDV的快速检测具有重要意义。

关键词：口蹄疫病毒 TaqMan探针荧光定量PCR

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腺病毒/甲病毒复制子嵌合载体猪瘟疫苗rAdV-SFV-E2最早提供完全攻毒保护时间的研究

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中国预防兽医学报 2014年第10期36卷 792-796页

作者：袁晋孙元王春花秦华洋丛鑫李素罗玉子刘磊仇华吉甘肃农业大学动物医学学院甘肃兰州730000 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

本实验室前期构建了腺病毒/甲病毒复制子嵌合载体猪瘟疫苗rAdV-SFV-E2,其免疫效力与商品化猪瘟C株疫苗相同,并具有鉴别检测特性。为进一步确定该嵌合载体猪瘟疫苗最早提供完全攻毒保护的时间,本研究将rAdV-SFV-E2免疫健康仔猪(n=5),免... 详细信息

本实验室前期构建了腺病毒/甲病毒复制子嵌合载体猪瘟疫苗rAdV-SFV-E2,其免疫效力与商品化猪瘟C株疫苗相同,并具有鉴别检测特性。为进一步确定该嵌合载体猪瘟疫苗最早提供完全攻毒保护的时间,本研究将rAdV-SFV-E2免疫健康仔猪(n=5),免疫后于不同时间点采用猪瘟病毒(CSFV)强毒石门株进行攻毒,并检测其抗体应答、临床症状、病毒血症、病理学及组织病理学变化等。结果显示,rAdV-SFV-E2免疫后1周和2周,分别能对致死性CSFV强毒的攻击提供部分保护(3/5存活)和不完全保护(全部存活,但出现了短暂的发热和低水平的病毒血症);免疫后3周和4周,能够完全抵抗致死性CSFV强毒的攻击,表现为无病毒血症,无临床症状,无病理变化和组织病理学变化。该研究进一步证实rAdV-SFV-E2能够作为一种新型猪瘟标记疫苗,在猪瘟的紧急防控中能够起到一定的作用。

关键词：猪瘟嵌合载体疫苗最早保护时间

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HA 226/228双位点突变对H5N1禽流感病毒受体结合特异性和致病性的影响

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中国预防兽医学报 2014年第8期36卷 590-592页

作者：谷春阳张乾义孔晖晖张莹姜永萍关云涛胡永浩陈化兰甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

禽流感病毒(AIV)主要识别SAα2,3Gal受体,而人源流感病毒主要识别SAα2,6Gal受体。本研究利用糖链受体结合特性检测方法检测表明,H5N1 AIV A/duck/Guangxi/35/2001(DK/35)可以同时识别SAα2,3Gal和SAα2,6Gal受体,然而HA 226位谷氨酸(Q... 详细信息

禽流感病毒(AIV)主要识别SAα2,3Gal受体,而人源流感病毒主要识别SAα2,6Gal受体。本研究利用糖链受体结合特性检测方法检测表明,H5N1 AIV A/duck/Guangxi/35/2001(DK/35)可以同时识别SAα2,3Gal和SAα2,6Gal受体,然而HA 226位谷氨酸(Q)到亮氨酸(L)和228位甘氨酸(G)到丝氨酸(S)的双突变,可以导致DK/35更倾向于识别SAα2,6Gal受体。对BALB/c小鼠致病性试验显示,突变病毒株(rDK/35(Q226L/G228S))对小鼠的致病力比野毒株弱,其MLD50为4.7 log10EID50,而DK/35为1.8 log log10EID50。本研究表明H5N1 AIV通过突变可以获得优先与SAα2,6Gal受体特异性结合的能力,为H5N1 AIV的监测预防和对公共卫生风险评估提供一定的参考依据。

关键词： H5N1亚型禽流感病毒受体结合特异性致病性

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应用酵母双杂交方法筛选与猪瘟病毒N^(pro)蛋白相互作用的宿主蛋白

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中国预防兽医学报 2014年第10期36卷 755-758页

作者：董泓李素贺番廖亚金何文瑞孙元罗玉子胡永浩仇华吉甘肃农业大学动物医学学院甘肃兰州730000 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

为研究猪瘟病毒(CSFV)与宿主细胞间的相互作用,本研究采用酵母双杂交方法以猪瘟病毒Npro蛋白为诱饵,从猪外周血单个核细胞(PBMC)cDNA表达文库中筛选与之相互作用的蛋白,经共转化试验表明,共筛选到12个与Npro蛋白相互作用的宿主蛋白,应用... 详细信息

为研究猪瘟病毒(CSFV)与宿主细胞间的相互作用,本研究采用酵母双杂交方法以猪瘟病毒Npro蛋白为诱饵,从猪外周血单个核细胞(PBMC)cDNA表达文库中筛选与之相互作用的蛋白,经共转化试验表明,共筛选到12个与Npro蛋白相互作用的宿主蛋白,应用Cytoscape 2.8.2软件绘制了蛋白质间相互作用关系图,根据GO分析结果,这些蛋白分别参与细胞代谢、细胞生长、免疫等过程,经双分子荧光互补(BiFC)试验表明筛得的部分宿主蛋白与CSFV Npro具有相互作用。本研究中筛选得到的蛋白质对CSFV复制的影响有待进一步深入研究。

关键词：猪瘟病毒 Npro蛋白酵母双杂交试验双分子荧光互补试验

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重组新城疫病毒表达猪圆环病毒2型Cap蛋白的研究

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中国预防兽医学报 2014年第12期36卷 979-981页

作者：王子龙葛金英王云鹤于桂梅孙继国步志高河北农业大学动物医学学院河北保定071000 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

为构建表达猪圆环病毒2型(PCV2)衣壳蛋白(Cap)的重组新城疫病毒(NDV),本研究利用NDV La Sota弱毒疫苗株为活病毒载体,通过反向遗传操作系统构建出表达PCV2 Cap的重组病毒(r La-PCV2/Cap),以及表达删除核定位信号(NLS)的Cap(CapΔ41)的... 详细信息

为构建表达猪圆环病毒2型(PCV2)衣壳蛋白(Cap)的重组新城疫病毒(NDV),本研究利用NDV La Sota弱毒疫苗株为活病毒载体,通过反向遗传操作系统构建出表达PCV2 Cap的重组病毒(r La-PCV2/Cap),以及表达删除核定位信号(NLS)的Cap(CapΔ41)的重组病毒(r La-PCV2/CapΔ41),并对外源蛋白的表达效果进行了检测。通过间接免疫荧光试验证明,两种重组病毒感染的BHK-21细胞中,PCV2 Cap蛋白以及删除NLS的CapΔ41蛋白均获得正确表达;其中,完整的Cap蛋白定位于核内,而删除NLS的CapΔ41蛋白则定位于胞浆中,本研究结果为研究新型PCV2疫苗奠定基础。

关键词：猪圆环病毒2型重组新城疫病毒 Cap蛋白核定位信号

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猪伪狂犬病病毒变异株的分离鉴定及其gE基因的分子特征

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中国预防兽医学报 2014年第7期36卷 506-509页

作者：赵鸿远彭金美安同庆李琳冷超粮陈家锃王倩常丹张秋月蔡雪辉童光志田志军中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物分子病原学与分子流行病学团队黑龙江哈尔滨150001 中国农业科学院上海兽医研究所上海200241

2014年猪伪狂犬病(PR)在我国规模化猪场大范围发生,本实验室在吉林和黑龙江省发病猪场分离到2株PRV,命名为PRV-JL1和PRV-HLJ1。病毒在Vero细胞中能够产生典型的PRV细胞病变,将PRV-JL1以103LD50的剂量感染3只6月龄绵羊,接种羊在5 d^8 d... 详细信息

2014年猪伪狂犬病(PR)在我国规模化猪场大范围发生,本实验室在吉林和黑龙江省发病猪场分离到2株PRV,命名为PRV-JL1和PRV-HLJ1。病毒在Vero细胞中能够产生典型的PRV细胞病变,将PRV-JL1以103LD50的剂量感染3只6月龄绵羊,接种羊在5 d^8 d内全部死亡,均出现典型的PR症状及组织病理学变化。将PRV-JL1及PRV-HLJ1与近3年来本实验室分离鉴定的及GenBank中登录的来源于国内10多个省份的32个PRV株和17个经典PRV株的gE核苷酸序列进行比对分析,结果表明:近3年分离的PRVs与本实验室之前分离的变异株PRV-HeN1的同源性在97.1%~99.5%,而与经典株PRV双城株(PRV-S)的同源性在96.6%~99.1%。以gE氨基酸序列建立的进化树分析结果显示,近3年分离的PRVs形成一个相对独立于经典株的新分支。以上结果表明变异株已成为我国主要流行的病毒株,而且变异株均在gE蛋白的第48位和第492位各存在1个天冬氨酸的插入。该插入突变可以作为鉴定PRV变异株的分子特征,其生物学意义有待于进一步研究。

关键词：伪狂犬病病毒变异鉴定 gE 分子特征

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猪链球菌的分型鉴定及其体外形成生物被膜的研究

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中国兽医杂志 2014年第12期50卷 3-5页

作者：周永辉王淑杰黄全勇陈俭清李艳华东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

通过生化试验及PCR等方法对13株猪链球菌进行鉴定分型,用结晶紫染色(CV)和扫描电镜(SEM)的方法对其形成生物被膜的能力进行研究,并对形成的生物被膜进行形态观察。结果显示:经鉴定的13株猪链球菌中1株为1型,4株为9型,2株为7型,另2株为2... 详细信息

通过生化试验及PCR等方法对13株猪链球菌进行鉴定分型,用结晶紫染色(CV)和扫描电镜(SEM)的方法对其形成生物被膜的能力进行研究,并对形成的生物被膜进行形态观察。结果显示:经鉴定的13株猪链球菌中1株为1型,4株为9型,2株为7型,另2株为2型,其他菌株为未知;13株菌均能形成生物被膜,其中1号、2号、3号、4号、7号、9号、10号、12号、13号菌形成生物被膜能力较弱,5号、6号、8号、11号菌形成生物被膜能力中等。这些结果为研究猪链球菌致病性及为生物被膜研究提供物质基础。

关键词：猪链球菌分型鉴定生物被膜形成能力

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