检索结果-内蒙古大学图书馆

养猪 2014年第5期 100-104页

作者：马兴杰仇铮崔宇超王晓玲张晶朱宝孔苗苗罗亚坤崔尚金中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

试验建立了鉴别猪伪狂犬病病毒（PRV）强弱毒高效纳米PCR检测方法，并对相关条件进行优化，组装了试剂盒。根据PRV保守序列设计3对引物分别扩增PRV基因组的gB（431 bp）、gE（316 bp）和gG（202 bp）3个基因，用于区分PRV强毒与基因缺... 详细信息

试验建立了鉴别猪伪狂犬病病毒（PRV）强弱毒高效纳米PCR检测方法，并对相关条件进行优化，组装了试剂盒。根据PRV保守序列设计3对引物分别扩增PRV基因组的gB（431 bp）、gE（316 bp）和gG（202 bp）3个基因，用于区分PRV强毒与基因缺失毒株，优化反应条件后建立了纳米PCR检测PRV强弱毒的方法并组装试剂盒，对试剂盒进行了特异性、敏感性、批内批间可重复性及保存期评估试验，并对临床样品进行检测。特异性试验表明，此试剂盒对于PRV能够扩增出431（gB）、316（gE）和202 bp（gG）的目的片段，对于PRV-Bartha-K61能够扩增出431和202 bp的目的片段，对于猪捷申病毒、非洲猪瘟病毒、猪圆环病毒2型、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪细小病毒及大肠杆菌等DNA或cDNA均未扩增出条带。敏感性试验表明，此试剂盒的方法比常规PCR方法敏感100-1000倍，最低核酸拷贝数检出量可以达到101 copy/μL数量级。试剂盒的批内、批间检测结果无明显差异，稳定性良好。-20℃至少可保存12个月。在对中国黑龙江、吉林等7个省市的临床送检的117份样品进行检测，结果显示，PRV强毒阳性率为51%，阴性率为49%，未发现有弱毒感染。鉴别PRV强弱毒纳米PCR试剂盒的研制，对PRV感染的早期检测、野毒株和疫苗株的鉴别、疾病控制等都有重要意义，而且也可以用于其他动物PRV感染的检测和早期诊断。

关键词：检测猪伪狂犬病病毒

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马传染性贫血病毒弱毒疫苗gp90多样性及其对病毒体外增殖的影响

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中国预防兽医学报 2014年第3期36卷 182-186页

作者：秦玉寅王雪峰韦华冕王帅林跃智杜承王晓钧周建华胡建军塔里木大学生命科学学院塔里木盆地生物资源保护利用省部共建重点实验室新疆阿拉尔843300 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 塔里木大学动物科学学院兵团塔里木畜牧科技重点实验室新疆阿拉尔843300

为研究马传染性贫血病毒(EIAV)弱毒疫苗gp90基因多样性的生物学意义,本研究对EIAV驴胎皮肤细胞弱毒疫苗(EIAVFDDV13)gp90基因进行测序,在随机获得的15个克隆中,不同克隆推导的氨基酸平均差异率为2.7%(0~5.8%),其中克隆F13-15与感染性克... 详细信息

为研究马传染性贫血病毒(EIAV)弱毒疫苗gp90基因多样性的生物学意义,本研究对EIAV驴胎皮肤细胞弱毒疫苗(EIAVFDDV13)gp90基因进行测序,在随机获得的15个克隆中,不同克隆推导的氨基酸平均差异率为2.7%(0~5.8%),其中克隆F13-15与感染性克隆pLGFD3-8的gp90之间的差异率均为4.8%。以pLGFD3-8为骨架,通过对gp90基因的替换方法构建了感染性克隆pLGFD13-15。将pLGFD13-15转染驴胎皮肤细胞后,拯救出一株衍生病毒vpLGFD13-15。比较vpLGFD13-15和vpLGFD3-8在驴胎皮肤细胞和马单核细胞来源的巨噬细胞中的复制特性显示,vpLGFD13-15在感染驴胎皮肤细胞后4 d^6 d内,上清液中的病毒含量明显高于vpLGFD3-8。但vpLGFD13-15在巨噬细胞中的复制较vpLGFD3-8明显延迟。结果表明,EIAV疫苗株中不同gp90基因的病毒克隆在体外复制特性存在差异。该研究结果为进一步分析EIAV弱毒疫苗基因多样性的生物学意义,特别是对其诱导免疫保护作用的研究奠定了基础。

关键词：马传染性贫血病毒弱毒疫苗 gp90 基因多样性

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蓝舌病病毒VP7蛋白竞争抑制群特异性构象抗原表位的初步鉴定

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中国预防兽医学报 2014年第1期36卷 63-66页

作者：魏天徐青元耿宏伟冯瑜菲杨涛孙恩成席娜刘二战钱爱东邸英华吴东来吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130000 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001 吉林省长春皓月清真肉业股份有限公司吉林长春130000

为鉴定蓝舌病病毒（BTV）的单克隆抗体（MAb）所识别的VP7蛋白竞争抑制群特异性构象抗原表位，本研究采用噬菌体展示技术对BTVVP7蛋白构象抗原表位氨基酸进行筛选，通过质粒定点突变技术对编码筛选获得的氨基酸区域的基因进行突变，同... 详细信息

为鉴定蓝舌病病毒（BTV）的单克隆抗体（MAb）所识别的VP7蛋白竞争抑制群特异性构象抗原表位，本研究采用噬菌体展示技术对BTVVP7蛋白构象抗原表位氨基酸进行筛选，通过质粒定点突变技术对编码筛选获得的氨基酸区域的基因进行突变，同时利用ELISA法验证该氨基酸区域突变后对BTVvP7蛋白抗原性的影响。结果表明被BTVMAb4H7所识别的BTVVP7蛋白竞争抑制群特异性构象抗原表位由175FQG177、185YL186和278WH279组成，其中aal75～aal77和aal85～aal86为该抗原表位的关键性氨基酸，本研究初步阐明了BTvVP7蛋白竞争抑制特异性的分子基础，对VP7蛋白功能研究和建立BTV群特异性检测方法具有重要意义。

关键词：蓝舌病病毒 VP7蛋白构象表位

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鸡传染性法氏囊病病毒细胞嗜性及受体研究现状

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中国家禽 2014年第20期36卷 2-5页

作者：张礼洲祁小乐王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽免疫抑制病研究创新团队黑龙江哈尔滨150001 江苏省动物重要疫病与人畜共患病协同创新中心江苏扬州225009

鸡传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)强、弱毒株在侵染宿主细胞上存在着明显的细胞嗜性差异,普遍认为,这种细胞嗜性差异主要由宿主细胞的不同受体所介导。迄今为止,已报道4种IBDV受体相关分子:SIg M免疫球蛋白... 详细信息

鸡传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)强、弱毒株在侵染宿主细胞上存在着明显的细胞嗜性差异,普遍认为,这种细胞嗜性差异主要由宿主细胞的不同受体所介导。迄今为止,已报道4种IBDV受体相关分子:SIg M免疫球蛋白、热休克蛋白90(c Hsp90)、整合素α4β1、Toll样受体(TLR)。本文对IBDV细胞嗜性及细胞受体相关研究进行了综述。

关键词：鸡传染性法氏囊病病毒细胞嗜性受体

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弓形虫酵母双杂交cDNA文库构建及与AMA1羧基端相互作用蛋白的筛选

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中国预防兽医学报 2014年第3期36卷 201-204页

作者：程子英高洋王铭郑君贾洪林赵权吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室-美国密西根州立大学天然免疫联合实验室黑龙江哈尔滨150001 延边大学农学院动物医学系吉林延吉133000 东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030

为筛选弓形虫AMA1基因羧基端(AMA1c)在弓形虫中的相互作用分子,本研究采用MatchmakerTM Gold酵母双杂交系统,构建了弓形虫RH株酵母双杂交cDNA文库,文库滴度达到4.26×107cfu/mL。以构建的pGBKT7-AMA1c诱饵质粒,使用PEG/LiAc法转化... 详细信息

为筛选弓形虫AMA1基因羧基端(AMA1c)在弓形虫中的相互作用分子,本研究采用MatchmakerTM Gold酵母双杂交系统,构建了弓形虫RH株酵母双杂交cDNA文库,文库滴度达到4.26×107cfu/mL。以构建的pGBKT7-AMA1c诱饵质粒,使用PEG/LiAc法转化酵母菌株Y2H,利用表型筛选法检测AMA1c的自激活作用并进行酵母双杂交筛选,得到阳性克隆,根据序列比对分析结果,进一步进行共转化验证。结果表明,诱饵蛋白在酵母双杂交系统中具有无毒性和自激活作用,而且通过酵母双杂交筛选共得到13个与AMA1c蛋白相互作用的虫体蛋白。本研究结果为进一步研究AMA1c的功能奠定了基础。

关键词：弓形虫 AMA1羧基端酵母双杂交自激活

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新孢子虫cDNAT7噬菌体展示文库的构建及筛选

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中国预防兽医学报 2014年第4期36卷 277-280页

作者：王铭高洋程子英郑君贾洪林宋铭忻东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室一美国密西根州立大学天然免疫联合实验室黑龙江哈尔滨150001 延边大学农学院动物医学系吉林延吉133000 吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118

为筛选犬新孢子虫相关抗原,本研究利用T7噬菌体展示技术构建犬新孢子虫cDNA文库,并利用阳性血清筛选新型犬新孢子虫抗原蛋白。所构建的新孢子虫cDNA文库的原始文库重组克隆数为6×106pfu,扩增后文库滴度为3×1010pfu/mL。分别... 详细信息

为筛选犬新孢子虫相关抗原,本研究利用T7噬菌体展示技术构建犬新孢子虫cDNA文库,并利用阳性血清筛选新型犬新孢子虫抗原蛋白。所构建的新孢子虫cDNA文库的原始文库重组克隆数为6×106pfu,扩增后文库滴度为3×1010pfu/mL。分别提取犬新孢子虫免疫小鼠血清和感染小鼠血清中的IgG,并利用纯化的IgG对构建的新孢子虫cDNA文库进行筛选。经过3轮筛选,共鉴定出14个不同的犬新孢子虫基因插入片段。经过分析,有7个基因编码的是功能未知蛋白,其它为蛋白质合成相关蛋白、核苷酸代谢相关蛋白、核糖体蛋白、微线体蛋白、棒状体蛋白和致密颗粒蛋白。对这些蛋白的进一步研究将有助于开发新孢子虫病的诊断试剂和疫苗。

关键词：新孢子虫病 T7噬菌体展示文库抗原候选基因

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猪细小病毒流行与防治进展

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饲料与畜牧·规模养猪 2014年第4期 68-73页

作者：崔宇超崔尚金黑龙江八一农垦大学动物科技学院，黑龙江大庆 163319 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所，兽医生物技术国家重点实验室，黑龙江哈尔滨 150001

猪细小病毒(Porcine parvovirus，PPV)是引起母猪繁殖障碍的主要病原体之一。PPV感染呈世界分布，在许多地方甚至已经成为地方性疾病，给养猪业造成严重的经济损失。文章对猪细小病毒流行、防治、疫苗研究进展进行了简述。

关键词：猪细小病毒母猪繁殖障碍地方性疾病疫苗研究经济损失养猪业病原体感染分布防治

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表达抗流感Mx-RNAis基因转基因鸡研究

表达抗流感Mx-RNAis基因转基因鸡研究

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十次学术研讨会

作者：孟庆文王伟田进王建超邓瑞坡陈洪岩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室实验动物与比较医学团队黑龙江哈尔滨150001

本研究采用赤道开窗法将同时表达Mx、RNAis双基因重组慢病毒注射入新生种蛋胚盘下腔，制备转基因(TG)鸡，通过PCR,RT-PCR,Southern blot,Western blot及Tail-PCR方法等方法检测FO代TG鸡，结果表明外源基因整合到鸡基因组2号染色体上，... 详细信息

本研究采用赤道开窗法将同时表达Mx、RNAis双基因重组慢病毒注射入新生种蛋胚盘下腔，制备转基因(TG)鸡，通过PCR,RT-PCR,Southern blot,Western blot及Tail-PCR方法等方法检测FO代TG鸡，结果表明外源基因整合到鸡基因组2号染色体上，并能检测到外源基因的表达;TG鸡与野生型(WT)鸡交配繁育F1代，经鉴定再用F1代TG鸡与WT鸡繁育F2代，现已繁育至F3代，建立微核心群单元，在每代TG鸡的血液与组织中均能够检测到外源基因的整合、表达，表明外源基因能稳定遗传;H5N1感染4周龄TG鸡与WT鸡，攻毒后观察到TG感染组鸡比WT感染组鸡的死亡时间延长;TG感染组咽拭子、肺组织病毒滴度显著低于WT感染组;对感染后各组鸡细胞因子进行检测，IFN-α与TNFα在TG组的表达量显著低于WT组，表明TG组鸡与WT组鸡相比病毒感染程度低，证明转基因鸡有抗禽流感病毒的作用。

关键词：转基因鸡抗禽流感病毒基因表达

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鸭圆环病毒双拷贝串联基因组感染性克隆的构建

鸭圆环病毒双拷贝串联基因组感染性克隆的构建

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十次学术研讨会

作者：文辉强武永淑张晓娜廉传江赵丽丽韩凌霞陈洪岩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室实验动物与比较医学团队黑龙江哈尔滨 150001

以鸭圆环病毒(Duck circovirus,DuCV)FJ/2011分离株基因组为模板,构建带遗传标记的双拷贝串联基因组感染性克隆(pEGFP-2DuCV).应用分子生物学技术,以GenBank数据库中本实验室测得的DuCV全基因组序列(登录号KF726087)为模板,以DuCV ORF1... 详细信息

以鸭圆环病毒(Duck circovirus,DuCV)FJ/2011分离株基因组为模板,构建带遗传标记的双拷贝串联基因组感染性克隆(pEGFP-2DuCV).应用分子生物学技术,以GenBank数据库中本实验室测得的DuCV全基因组序列(登录号KF726087)为模板,以DuCV ORF1中的EcoRI酶切位点(GAATTC代替GAGTTC)为上下游引物5'端,经PCR反应得到DuCV全基因组,克隆构建于pMD 18-T载体中得到pMD-DuCV.以pMD-DuCV为模板,分别设计两对引物(引物位置不变,引物一的上下游分别含有XhoI和EcoRI位点,引物二的上下游分别含EcoRI和HindⅢ位点),分别经PCR反应得到两个DuCV全基因组,PCR产物分别用自带酶切、pEGFP-C1载体由XhoI和HindⅢ酶切后,三片段回收连接后得到双拷贝DuCV串联基因组感染性克隆pEGFP-2DuCV.经鸡胚成纤维细胞系(DF-1)与鸡马立克病毒肿瘤淋巴细胞系(MDCC-MSB1)体外转染试验验证,转染后12h均可观察到EGFP发出较强的绿色荧光.体外转染后验证病毒蛋白的表达、病毒传代以及超微形态学观察等是下一步进行病毒拯救研究重点.

关键词：鸭圆环病毒双拷贝串联基因组感染性克隆

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抗流感病毒候选基因的筛选:单链抗体

抗流感病毒候选基因的筛选:单链抗体

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十次学术研讨会

作者：王伟李越赵颖慧臧凤霞周长良孟庆文陈洪岩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室实验动物与比较医学团队黑龙江哈尔滨150001

本研究用9日龄鸡胚大量繁殖H1N1流感病毒，甲醛灭活处理后，超速离心的方法制备灭活全病毒抗原。用上述抗原对5周龄Babl/c小鼠进行免疫，经脾细胞与骨髓瘤细胞融合、克隆化共筛选获得7株单克隆抗体。病毒中和滴定试验初步筛选出了3株与... 详细信息

本研究用9日龄鸡胚大量繁殖H1N1流感病毒，甲醛灭活处理后，超速离心的方法制备灭活全病毒抗原。用上述抗原对5周龄Babl/c小鼠进行免疫，经脾细胞与骨髓瘤细胞融合、克隆化共筛选获得7株单克隆抗体。病毒中和滴定试验初步筛选出了3株与流感病毒中和效果较好的单克隆抗体。以单抗杂交瘤细胞RNA反转录产物为模板，PCR成功扩增了轻(321 bp)、重链(360 bp)基因。选用(Gly4Ser),15肽序列的Linker序列，以重叠延伸拼接法成功组建了3条单链抗体基因，构建真核表达载体pCDNA31-ScFvo Lipoinfectamine2000转染MDCK细胞，在细胞水平上对3条单链抗体抗流感病毒活性进行了检测，间接免疫荧光实验结果表明单链抗体Q1-B1-BB具有一定的抑制流感病毒复制的能力，为以后小鼠模型验证其抗流感病毒活性奠定了基础，为抗流感转基因动物研究提供候选基因。

关键词：鸡流感病毒抗病毒基因单链抗体

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