检索结果-内蒙古大学图书馆

第四届人畜共患病学术研讨会、2014年中国狂犬病年会、中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第四次学术研讨会

作者：郭焕平张守发高洋贾洪林贾立军延边大学农学院动物医学系吉林延吉 133002 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室-美国密西根州立大学天然免疫联合实验室黑龙江哈尔滨 150001

为构建犬新孢子虫AMA1基因重组猫疱疹病毒Ⅰ型(FHV-Ⅰ)转移质粒pBS-TK-AMA1,并在真核细胞中表达,本试验以pBS-TK重组质粒为载体,插入犬新孢子虫AMA1基因.其中pBS-TK重组质粒是含有FHV-1TK基因的5'(2000 bp)和3'(1700 bp)同源臂... 详细信息

为构建犬新孢子虫AMA1基因重组猫疱疹病毒Ⅰ型(FHV-Ⅰ)转移质粒pBS-TK-AMA1,并在真核细胞中表达,本试验以pBS-TK重组质粒为载体,插入犬新孢子虫AMA1基因.其中pBS-TK重组质粒是含有FHV-1TK基因的5'(2000 bp)和3'(1700 bp)同源臂、pCAGGs载体中含有启动子和终止信号的表达盒的pBluesciptⅡ-SK(-)载体.通过转染试剂PEI将pBS-TK-AMA1转移载体转染至293T细胞,以制备的鼠抗犬新孢子虫AMA1蛋白的特异性抗体为一抗,应用IFAT和western blot进行鉴定.结果显示,构建的病毒转移载体pBS-TK-AMA1可以在293T细胞内获得表达,表达蛋白分子量为68kDa.本试验为犬新孢子虫AMA1基因的猫重组疱疹病毒Ⅰ型载体疫苗的研制奠定了基础.

关键词：犬新孢子虫 AMA1基因猫疱疹病毒Ⅰ型(FHV-1)转移质粒表达

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ELISA验证兔铁蛋白重链与RHDV VP60相互作用

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中国预防兽医学报 2013年第9期35卷 770-772页

作者：孙宏勇刘家森王泽祥陈淑慧单丽玲郭冬春姜骞林欢曲连东中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/实验动物研究室黑龙江哈尔滨150001

为验证本实验室前期实验中初步鉴定的兔铁蛋白重链(FTH)与兔出血症病毒(RHDV)衣壳蛋白(VP60)具有相互作用关系,本研究采用RT-PCR技术从兔肝脏扩增编码FTH基因,并将其克隆至pET-32a(+)中转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS中进行表达。重组FTH蛋... 详细信息

为验证本实验室前期实验中初步鉴定的兔铁蛋白重链(FTH)与兔出血症病毒(RHDV)衣壳蛋白(VP60)具有相互作用关系,本研究采用RT-PCR技术从兔肝脏扩增编码FTH基因,并将其克隆至pET-32a(+)中转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS中进行表达。重组FTH蛋白(rFTH)经IPTG诱导获得表达,采用Ni-NTA Agarose纯化rFTH。利用纯化的VP60作为ELISA包被抗原检测FTH与VP60的相互作用。结果表明,ELISA检测的OD490nm值与FTH蛋白量呈正相关。本研究进一步验证了FTH与VP60具有相互作用关系。

关键词：铁蛋白重链兔出血症病毒 VP60 ELISA

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鸭RIG-1基因的组织表达及体外抗禽流感病毒活性研究

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中国预防兽医学报 2013年第12期35卷 955-959页

作者：张雅春胡卫杰王建超王伟邓瑞坡李越赵颖慧孟庆文中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/实验动物研究室黑龙江哈尔滨150001

视黄酸诱导基因蛋白1(RIG-1)是一类模式识别受体,在机体抗病毒天然免疫过程中发挥重要作用。为检测金定鸭RIG-1基因的组织特异性表达水平和体外抗禽流感病毒(AIV)活性,本研究采用RT-PCR方法扩增鸭RIG-1基因并克隆于pcDNA3.1(+)中构建重... 详细信息

视黄酸诱导基因蛋白1(RIG-1)是一类模式识别受体,在机体抗病毒天然免疫过程中发挥重要作用。为检测金定鸭RIG-1基因的组织特异性表达水平和体外抗禽流感病毒(AIV)活性,本研究采用RT-PCR方法扩增鸭RIG-1基因并克隆于pcDNA3.1(+)中构建重组真核表达质粒pcDNA-RIG-1,应用荧光定量PCR方法检测该基因在鸭不同组织中的特异性表达水平;并将pcDNA-RIG-1转染DF-1细胞,通过病毒TCID50测定、间接免疫荧光、荧光定量PCR的方法检测RIG-1的抗AIV活性。结果显示,从金定鸭脾脏中扩增的RIG-1基因的CDS序列大小为2 802 bp,编码934个氨基酸;RIG-1基因在不同组织中的表达各不相同,在鸭的脾脏和肾脏中表达量较高,肝脏中度表达,心脏、肺脏和肌肉低度表达;pcDNA-RIG-1转染DF-1细胞组与pcDNA3.1(+)转染组相比,病毒TCID50及相对表达量显著降低,IFN-β及Mx的相对表达量显著升高,表明RIG-1产生了显著的抗AIV作用。本研究为禽类RIG-1蛋白功能和家禽的天然免疫研究奠定了基础。

关键词： RIG-1 组织表达抗病毒

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猪源肠球菌新外派泵多重耐药基因Isa(E)流行特点及传播方式分析

猪源肠球菌新外派泵多重耐药基因Isa(E)流行特点及传播方式分析

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十次学术研讨会

作者：张万江初胜波王秀梅刘琪牟迪刘思国中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室黑龙江哈尔滨150001 吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118 东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030

为了研究猪源肠球菌多重耐药外派泵耐药基因lsa(E)的流行病学及扩散机制，本研究对从广西某猪场分离的15株携带Isa(E)基因的肠球菌进行耐药表型和相关耐药基因型检测，通过脉冲凝胶电泳(Pulsed-Filed GelElectrophoresis, PFGE)和South... 详细信息

为了研究猪源肠球菌多重耐药外派泵耐药基因lsa(E)的流行病学及扩散机制，本研究对从广西某猪场分离的15株携带Isa(E)基因的肠球菌进行耐药表型和相关耐药基因型检测，通过脉冲凝胶电泳(Pulsed-Filed GelElectrophoresis, PFGE)和Southern杂交确定菌株间的同源关系和Isa(E)基因的传播方式。

关键词：猪源肠球菌外派泵多重耐药基因流行病学传播方式

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环介导等温扩增技术在兔出血症病毒检测中的应用

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中国兽医科学 2013年第4期43卷 390-395页

作者：原冬伟刘家森郭东春姜骞林欢司昌德曲连东中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室实验动物病研究室黑龙江哈尔滨151030

根据GenBank中的中国兔出血症病毒(RHDV)分离株VP60基因保守序列设计合成了内、外2对引物,在Bst DNA聚合酶的作用下完成等温核酸扩增反应,对反应条件逐一优化,并对临床样品进行检测。结果表明,该方法简便、快速、特异性好,灵敏性较常规... 详细信息

根据GenBank中的中国兔出血症病毒(RHDV)分离株VP60基因保守序列设计合成了内、外2对引物,在Bst DNA聚合酶的作用下完成等温核酸扩增反应,对反应条件逐一优化,并对临床样品进行检测。结果表明,该方法简便、快速、特异性好,灵敏性较常规反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)高100倍。该方法可同时扩增7株RHDV中国分离株,说明其对检测国内RHDV分离株的有效性。对15份临床样品的检测结果显示,环介导等温扩增(LAMP)阳性检出率达80%,RT-PCR检测阳性率为60%。该LAMP方法具有灵敏度高、特异性强、操作简便快速、不需要复杂仪器设备、便于肉眼观察等优点,可作为临床检测RHDV的新方法,适合国内基层和实验室对RHDV的快速检测,具有广泛的推广应用价值。

关键词：兔出血症病毒环介导等温扩增病毒检测

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牛轮状病毒基因重配二价减毒疫苗接种怀孕母牛的免疫原性评价

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中国预防兽医学报 2013年第6期35卷 481-484页

作者：常继涛于力中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物病研究室黑龙江哈尔滨150001

为评价牛轮状病毒(BRV)基因重组二价减毒疫苗(LLR-85和R191株)对怀孕母牛的免疫反应,本研究将RVLLR-85(G10)和R191(G6)株等比例混合后进行乳化,肌肉途径接种怀孕7个～8个月的母牛。采用间接ELISA和病毒中和(V N)试验对接种牛血清抗BRV的... 详细信息

为评价牛轮状病毒(BRV)基因重组二价减毒疫苗(LLR-85和R191株)对怀孕母牛的免疫反应,本研究将RVLLR-85(G10)和R191(G6)株等比例混合后进行乳化,肌肉途径接种怀孕7个～8个月的母牛。采用间接ELISA和病毒中和(V N)试验对接种牛血清抗BRV的IgG、IgA以及V N抗体进行检测。结果显示,接种2周后抗体水平达到峰值,可以使原有的抗体滴度升高4倍～32倍,高滴度抗体可持续约2个月,接种母牛均未发生流产等副反应。犊牛通过饲喂初乳,可以在出生后1 d内获得最高水平的血清和肠道粘膜抗体。结果表明,BRV基因重组二价减毒疫苗对孕牛不但具有良好的安全性、而且其高滴度抗体可以通过初乳使新生犊牛获得有效的被动免疫。这些研究结果为该疫苗的临床应用提供了实验依据。

关键词：牛轮状病毒基因重配二价减毒疫苗怀孕母牛

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重组牛源荚膜A型多杀性巴氏杆菌脂蛋白E的免疫保护性研究

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中国预防兽医学报 2013年第5期35卷 401-404页

作者：牛思博姜志刚德艳艳于力中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物病研究室黑龙江哈尔滨150001

为鉴定多杀性巴氏杆菌脂蛋白E的免疫保护性,本研究从牛源荚膜A型多杀性巴氏杆菌PM-HLJ株的基因组DNA中扩增出大小为1 011 bp的脂蛋白E编码基因(PlpE),经序列测定显示,其氨基酸序列与A型多杀性巴氏杆菌参考株PlpE序列一致性为95.83%。将P... 详细信息

为鉴定多杀性巴氏杆菌脂蛋白E的免疫保护性,本研究从牛源荚膜A型多杀性巴氏杆菌PM-HLJ株的基因组DNA中扩增出大小为1 011 bp的脂蛋白E编码基因(PlpE),经序列测定显示,其氨基酸序列与A型多杀性巴氏杆菌参考株PlpE序列一致性为95.83%。将PM-HLJ的PlpE基因克隆于表达质粒pET-30a(+)并诱导表达,将表达的重组脂蛋白E纯化后经腹腔免疫小鼠,间接ELISA检测结果显示各免疫组均产生了针对重组脂蛋白E的IgG抗体,免疫保护试验显示,当小鼠免疫剂量为20μg、30μg、40μg和60μg时,保护率分别达到20%、40%、80%和100%。结果表明,牛源荚膜A型多杀性巴氏杆菌重组脂蛋白E具有良好的免疫保护作用。

关键词：牛源荚膜A型多杀性巴氏杆菌重组脂蛋白E 免疫保护

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与猪圆环病毒2型基因组茎环结构相互作用的宿主细胞蛋白的筛选

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中国兽医科学 2013年第12期43卷 1211-1216页

作者：张辉唐青海危艳武黄立平张志慧刘建波吴洪丽刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

利用酵母单杂交技术对猪圆环病毒2型(PCV2)基因组复制起始处茎环结构序列与PK-15细胞中的互作蛋白进行了筛选和鉴定。首先将合成的PCV2复制起始处的茎环结构序列整合到酵母染色体中构建诱饵酵母菌株;采用SMART技术合成PK-15细胞cDNA文库... 详细信息

利用酵母单杂交技术对猪圆环病毒2型(PCV2)基因组复制起始处茎环结构序列与PK-15细胞中的互作蛋白进行了筛选和鉴定。首先将合成的PCV2复制起始处的茎环结构序列整合到酵母染色体中构建诱饵酵母菌株;采用SMART技术合成PK-15细胞cDNA文库,将总cDNA与pGADT7-Rec表达载体共同转化酵母诱饵菌株,通过同源重组在酵母细胞内同步进行cDNA文库的构建,以药物筛选阳性克隆;通过酵母菌落PCR得到阳性克隆中的cDNA插入片段,通过序列分析对此予以确认。本试验成功地构建了酵母单杂交文库,筛选出1.01×106个酵母克隆,其中196个为阳性克隆。经PCR产物测序,并通过NCBI Blast法进行序列比对,确定有4种蛋白可与PCV2基因组茎环序列发生作用。本研究从宿主细胞cDNA文库中筛选到4种可与PCV2基因组茎环序列发生作用的蛋白,为下一步阐明这些宿主蛋白对PCV2复制的调节作用奠定了基础。

关键词：猪圆环病毒2型茎环结构宿主细胞互作蛋白

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兽医工作在“同一健康”实践中的作用与地位

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中国动物检疫 2014年第4期31卷 37-40页

作者：崔基贤王靖飞王幼明谷志大辽宁省动物疫病预防控制中心辽宁省动物医学研究院辽宁沈阳110164 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/疫病诊断中心黑龙江哈尔滨150001 中国动物卫生与流行病学中心山东青岛266032

"同一健康"理念和方法着眼于人类、动物和环境健康的联系,强调跨学科、跨领域、跨部门、跨区域的共同协作,考虑的是通过改善环境来降低人和动物传染病或慢性病的发病和传播扩散风险。该理念已经被联合国粮农组织(FAO)、世界... 详细信息

"同一健康"理念和方法着眼于人类、动物和环境健康的联系,强调跨学科、跨领域、跨部门、跨区域的共同协作,考虑的是通过改善环境来降低人和动物传染病或慢性病的发病和传播扩散风险。该理念已经被联合国粮农组织(FAO)、世界动物卫生组织(OIE)和世界卫生组织(WHO)等国际组织以及部分国家机构和跨学科专业团体看作疫病预防控制策略的主要构成元素。本文以国际化视野,从兽医的角度阐释"同一健康"理念,分析兽医工作在"同一健康"实践中的作用与地位。

关键词：同一健康兽医工作作用地位

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鸡肠炎沙门氏菌转座突变体库的构建及减毒菌株的筛选

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中国预防兽医学报 2013年第3期35卷 210-213页

作者：吕爽朱婷王秀梅刘慧芳司微于申业陈利苹刘思国中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室黑龙江哈尔滨150001

为筛选减毒肠炎沙门氏菌(***)菌株,本研究以含有Mini-Tn5转座子的重组自杀质粒pUT对*** SM6株进行转座诱变,利用双亲本滤膜杂交方法与供体菌***β2155进行接合转移,构建并优化接合转移体系,利用卡那抗性和DAP营养缺陷培养平板筛选法构建... 详细信息

为筛选减毒肠炎沙门氏菌(***)菌株,本研究以含有Mini-Tn5转座子的重组自杀质粒pUT对*** SM6株进行转座诱变,利用双亲本滤膜杂交方法与供体菌***β2155进行接合转移,构建并优化接合转移体系,利用卡那抗性和DAP营养缺陷培养平板筛选法构建了SM6的随机转座突变体库。其中包含5个子库,共计获得364株突变体,经PCR鉴定表明转座子均插入SM6株的基因组中。通过Caco-2细胞侵袭试验筛选***侵袭力减弱并在细胞内增殖受到抑制的减毒突变株,经初筛及验证最终获得3株稳定减毒菌株,为进一步研究减毒菌株突变毒力基因的定位及SM6株的侵袭及感染机制奠定了基础。

关键词：肠炎沙门氏菌转座子突变体库减毒菌株

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