检索结果-内蒙古大学图书馆

动物医学进展 2013年第7期34卷 53-56页

作者：王泽祥孙宏勇郭东春单丽玲原冬伟刘家森曲连东中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/实验动物研究室黑龙江哈尔滨150001

为表达兔视黄醇结合蛋白4(rRBP4),提取兔肝脏组织总RNA,采用RT-PCR技术扩增了rRBP4的基因,大小为606bp。将其克隆于原核表达载体pET-32a(+)获得表达重组质粒,并转化大肠埃希菌BL21(DE3)Plyss中进行表达,pET-32a-rRBP4以包涵体形式表达,... 详细信息

为表达兔视黄醇结合蛋白4(rRBP4),提取兔肝脏组织总RNA,采用RT-PCR技术扩增了rRBP4的基因,大小为606bp。将其克隆于原核表达载体pET-32a(+)获得表达重组质粒,并转化大肠埃希菌BL21(DE3)Plyss中进行表达,pET-32a-rRBP4以包涵体形式表达,包涵体经过洗涤、变性后,用镍离子亲和层析柱纯化,并利用尿素梯度透析法复性。SDS-PAGE分析表明,获得与预期分子质量一致的特异性目的蛋白;Western blot检测表明,重组蛋白与小鼠抗His标签单克隆抗体发生特异性反应。

关键词：兔视黄醇结合蛋白4 原核表达肝细胞

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单核细胞增生性李斯特菌感染ICR小鼠模型的建立

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中国畜牧兽医 2013年第9期40卷 131-135页

作者：尹海畅吕兴锋刘思国王伟王建超孟庆文中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室实验动物研究室黑龙江哈尔滨150001

单核细胞增生性李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)是一种人畜共患食源性致病菌,能引起人和动物较为严重的感染症状。现广泛使用具有免疫活性的小鼠模型测定半数致死量(LD50)来评价不同LM菌株的致病性。为建立LM的ICR小鼠模型,本研究... 详细信息

单核细胞增生性李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)是一种人畜共患食源性致病菌,能引起人和动物较为严重的感染症状。现广泛使用具有免疫活性的小鼠模型测定半数致死量(LD50)来评价不同LM菌株的致病性。为建立LM的ICR小鼠模型,本研究采用1/2a血清型的N21 LM菌株,分别以106、107、108、109和1010CFU的剂量口腔灌注感染6周龄ICR小鼠,每组10只;另取10只接种PBS作为对照组,测定LM对ICR小鼠的LD50;另取40只小鼠,平均分为2组,公母各半,以测定的LD50剂量接种LM,分别对各组小鼠临床症状、组织病理变化、体重变化及组织中细菌载量进行评价。结果发现,N21 LM菌株对ICR小鼠的LD50为109.25CFU;感染周期为10 d左右,感染小鼠出现被毛粗糙、精神萎靡、阴茎垂出及体重下降等临床症状。组织病理学分析结果显示,肝脏先后出现实质内灶状细菌团块、形成血栓、细胞坏死等;脾脏主要表现为白髓内淋巴细胞减少;肺脏主要表现为纤维素性肺炎。菌落计数和Real-time PCR的检测结果发现肝脏中细菌载量最高,脾脏次之。结果表明,ICR小鼠能作为单核细胞增生性李斯特菌的感染模型。本试验结果为研究LM的致病机制、疫苗研究及抗菌肽转基因小鼠抗LM的评价奠定了基础。

关键词：单核细胞增生性李斯特菌感染 ICR小鼠模型

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猪繁殖与呼吸综合征病毒N蛋白与BCCIP蛋白相互作用的鉴定

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中国预防兽医学报 2013年第5期35卷 341-345页

作者：尹曼曼郭东伟刘琴芳张枫张利杰李江南翁长江中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)核衣壳(N)蛋白在病毒粒子组装和释放过程中发挥重要的作用。为筛选N蛋白与宿主细胞相互作用的蛋白,本研究分离健康猪肺泡巨噬细胞(PAM),构建了PAM的酵母cDNA文库,利用酵母双杂交方法筛选其中与PRRSV N蛋... 详细信息

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)核衣壳(N)蛋白在病毒粒子组装和释放过程中发挥重要的作用。为筛选N蛋白与宿主细胞相互作用的蛋白,本研究分离健康猪肺泡巨噬细胞(PAM),构建了PAM的酵母cDNA文库,利用酵母双杂交方法筛选其中与PRRSV N蛋白相互作用的蛋白,结果获得3个阳性克隆。经测序并利用Blast方法比对GenBank数据库,筛选得到克隆插入的cDNA均与BCCIP(BRCA2 and CDKN1A interactingprotein)基因的1 bp～396 bp核酸序列一致。经酵母回返验证试验、GST-pulldown和免疫共沉淀试验验证了N蛋白与BCCIP之间的特异性相互作用,共定位试验显示N蛋白与BCCIP共定位于细胞核和细胞浆中。本研究鉴定了新的与PRRSV N蛋白相互作用的宿主蛋白BCCIP,BCCIP是否通过与N蛋白的相互作用参与PRRSV复制还有待深入研究。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒 N蛋白 BCCIP 相互作用

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高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒HuN4株GP3单克隆抗体的制备及其抗原表位的鉴定

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中国预防兽医学报 2013年第6期35卷 490-494页

作者：孙艳彭金美安同庆陈家锃冷超粮赵鸿远常丹童光志田志军中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪病研究室黑龙江哈尔滨150001 中国农业科学院上海兽医研究所上海200241

为制备抗高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(H P-PRRSV)G P3株的单克隆抗体(M A b),本研究将H P-PRRSV H uN 4株免疫BA LB/c小鼠,以该病毒感染的细胞及真核表达的G P3蛋白为检测抗原,经间接免疫荧光(IFA)筛选获得了一株稳定分泌M A b的细... 详细信息

为制备抗高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(H P-PRRSV)G P3株的单克隆抗体(M A b),本研究将H P-PRRSV H uN 4株免疫BA LB/c小鼠,以该病毒感染的细胞及真核表达的G P3蛋白为检测抗原,经间接免疫荧光(IFA)筛选获得了一株稳定分泌M A b的细胞株,命名为4G 5。抗体亚类鉴定重链类型为IgG 1,轻链类型为κ。该M A b细胞培养上清及腹水IFA效价分别为1∶256和1∶1 280。IFA结果显示,MAb4G5能够识别CH-1R、JXA1-R、HP-PRRSVHuN4株及其疫苗株HuN4-F112,而不识别RespPRRS M LV病毒株。Western blot结果显示,4G5与HP-PRRSVHuN4株及原核表达的GP3蛋白均可以反应,表明其针对的抗原表位为线性表位,中和试验结果显示该M A b无中和活性。通过截短表达GP3蛋白鉴定该M A b抗原表位识别序列为74W CRIGHD RCS83。本研究获得的M A b为进一步研究HP-PRRSV GP3蛋白的结构及功能奠定了基础。

关键词： HP-PRRSV GP3 单克隆抗体抗原表位

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猪外周血单个核细胞cDNA酵母表达文库的构建及与猪瘟病毒E2蛋白相互作用细胞蛋白的筛选

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中国预防兽医学报 2013年第9期35卷 707-710页

作者：廖亚金李素贺番何文瑞董泓冯烁孙元仇华吉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

为研究猪瘟病毒(CSFV)蛋白与宿主细胞蛋白之间的相互作用,本研究通过SMART技术合成猪外周血单个核细胞(PBMC)双链cDNA,以携带与载体pGADT7-Rec重组位点同源序列的特异引物经long-distance PCR扩增双链cDNA。纯化双链cDNA并与载体pGADT7-... 详细信息

为研究猪瘟病毒(CSFV)蛋白与宿主细胞蛋白之间的相互作用,本研究通过SMART技术合成猪外周血单个核细胞(PBMC)双链cDNA,以携带与载体pGADT7-Rec重组位点同源序列的特异引物经long-distance PCR扩增双链cDNA。纯化双链cDNA并与载体pGADT7-Rec共转化酵母菌株Y187,经同源重组构建PBMC cDNA酵母表达文库。以CSFV E2蛋白为诱饵进行酵母双杂交筛选,得到阳性克隆根据序列比对分析结果,进一步进行共转化验证。结果显示筛选到17个与CSFV E2蛋白相互作用的宿主细胞蛋白,基因注释(GO)分析表明这些蛋白分别参与免疫、代谢、细胞生长与增殖、生物调节等过程,为研究它们与CSFV E2的相互作用奠定了基础。

关键词：猪瘟病毒 PBMC cDNA文库酵母双杂交 E2蛋白

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猪伪狂犬病病毒新流行株的分离鉴定及抗原差异性分析

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中国预防兽医学报 2013年第1期35卷 1-4页

作者：彭金美安同庆赵鸿远刘益民陈家锃冷超粮孙艳常丹田志军童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪病研究室黑龙江哈尔滨150001 中国农业科学院上海兽医研究所上海200241

2011年以来我国多个省份的规模化猪场发生了新生仔猪出现神经症状和死亡的现象,为确定其是否为猪伪狂犬病病毒(PRV)感染所引发,我们利用PCR方法从死亡的新生仔猪脑组织中扩增PRV的gE基因,发现被检猪场均存在PRV野毒感染。gE基因序列分... 详细信息

2011年以来我国多个省份的规模化猪场发生了新生仔猪出现神经症状和死亡的现象,为确定其是否为猪伪狂犬病病毒(PRV)感染所引发,我们利用PCR方法从死亡的新生仔猪脑组织中扩增PRV的gE基因,发现被检猪场均存在PRV野毒感染。gE基因序列分析表明,从5个省14个猪场的病料中扩增的gE基因高度同源,与以往发表的相关序列比对显示,这些分离株均属于一个相对独立的分支。病料接种Vero细胞能够产生典型的细胞病变,将命名为PRV HeN1分离株接种小鼠能够引起瘙痒、死亡等伪狂犬病症状,并且对小鼠的LD50(102.37TCID50)显著低于经典强毒PRV双城株(103.83TCID50)。此外,中和试验结果显示,PRV Bartha k61活疫苗免疫猪仅能诱导对HeN1分离株低水平的中和抗体,而HeN1分离株能够诱导较高水平的中和抗体,并具有更强的交叉中和能力。根据本实验结果推测,近期各猪场流行的PRV可能存在一定的抗原变异。

关键词：伪狂犬病病毒鉴定抗原差异

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J亚群禽白血病病毒分离株HLJ09SH01株感染性克隆的构建及其致病性研究

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中国预防兽医学报 2013年第1期35卷 15-18页

作者：纪晓琳王琦高玉龙王永强秦立廷祁小乐高宏雷王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

为构建J亚群禽白血病病毒(ALV-J)分离株的感染性克隆并鉴定其对蛋鸡和肉鸡致病力的差异,本研究从黑龙江地区分离鉴定一株ALV-J分离株HLJ09SH01,以其核酸为模板,采用PCR方法分3段扩增其前病毒cDNA,PCR产物经克隆酶切后依次连接,获得一个... 详细信息

为构建J亚群禽白血病病毒(ALV-J)分离株的感染性克隆并鉴定其对蛋鸡和肉鸡致病力的差异,本研究从黑龙江地区分离鉴定一株ALV-J分离株HLJ09SH01,以其核酸为模板,采用PCR方法分3段扩增其前病毒cDNA,PCR产物经克隆酶切后依次连接,获得一个含有完整ALV-J前病毒cDNA的重组质粒,命名为pBlue-HLJ09SH01。将其转染DF-1细胞,进行病毒拯救。通过间接免疫荧光、禽白血病抗原试剂盒检测及反转录酶活性试剂盒检验,表明拯救的病毒为ALV-J,命名为rHLJ09SH01。将其分别人工接种11日龄蛋鸡和肉鸡鸡胚,孵育出壳后隔离饲养32周。致瘤性试验结果表明,rHLJ09SH01可以导致57.9%的蛋鸡发生肿瘤,83.3%的肉鸡发生肿瘤。表明该感染性克隆具有亲本病毒的致病性。

关键词： J亚群禽白血病病毒感染性分子克隆致病性

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猪圆环病毒2型Cap蛋白与猪O型口蹄疫病毒VP1蛋白在杆状病毒中共表达及鉴定

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中国预防兽医学报 2013年第1期35卷 44-47页

作者：王一平郭龙军唐青海刘丹危艳武李胜斌刘建波黄立平吴洪丽刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

为在真核细胞中共表达猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白与猪O型口蹄疫病毒(FMDV)VP1蛋白,本研究将其各自编码基因克隆于杆状病毒双表达载体(pFastBacTMDual)中构建重组转移质粒(pFBD-Cap-VP1),转化至DH10BacTM感受态细胞中制备重组杆粒(rBacm... 详细信息

为在真核细胞中共表达猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白与猪O型口蹄疫病毒(FMDV)VP1蛋白,本研究将其各自编码基因克隆于杆状病毒双表达载体(pFastBacTMDual)中构建重组转移质粒(pFBD-Cap-VP1),转化至DH10BacTM感受态细胞中制备重组杆粒(rBacmid-Cap-VP1),并转染Sf21昆虫细胞,拯救出能够共表达PCV2-Cap和FMDV-VP1蛋白的重组杆状病毒(rBac-Cap-VP1)。SDS-PAGE和western blot检测结果表明,共表达的重组PCV2-Cap和FMDV-VP1蛋白产物的分子量分别为28 ku和30 ku,各占总蛋白含量的11.6%和3.4%,能够分别与PCV2和FMDV抗体发生特异性反应,表明共表达蛋白具有良好的反应原性。本研究为PCV2和FMDV基因工程二联亚单位疫苗的研制奠定了基础。

关键词：猪圆环病毒2型猪O型口蹄疫病毒 Cap蛋白 VP1蛋白共表达

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鸭疫里默氏菌的分离鉴定及其对SPF鸭的致病性研究

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中国预防兽医学报 2013年第2期35卷 117-120页

作者：帕提古丽.吾马尔郭东春张爱芹刘家森原冬伟姜骞林欢曲连东中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/实验动物研究室黑龙江哈尔滨150001 黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆160091

为研究鸭疫里默氏菌(RA)对SPF鸭的致病性,本实验室从不同省份疑似RA感染鸭场分离到4株细菌,经菌落形态观察、染色镜检、生化鉴定确定为RA。药敏试验表明这4个分离株对嗯诺沙星、氧氟沙星和先锋霉素V相对敏感,但对卡那霉素和庆大霉素均... 详细信息

为研究鸭疫里默氏菌(RA)对SPF鸭的致病性,本实验室从不同省份疑似RA感染鸭场分离到4株细菌,经菌落形态观察、染色镜检、生化鉴定确定为RA。药敏试验表明这4个分离株对嗯诺沙星、氧氟沙星和先锋霉素V相对敏感,但对卡那霉素和庆大霉素均耐药。外膜蛋白A(OmpA)基因的克隆测序结果显示,4个RA分离株的ompA基因全长均为1 164 bp,编码387个氨基酸;核苷酸同源性为89%～100%。将5×108cfu的HLG1分离株经颈部皮下接种SPF鸭,病死SPF鸭的心、肝、脾、肺、脑和肾具有典型的病变。RA的分离鉴定技术为SPF鸭群RA的检测和监测以及为培育和净化SPF鸭作为RA的致病机理和疫苗研究中的实验动物模型奠定了基础。

关键词：鸭疫里默氏杆菌分离鉴定 ompA基因致病性

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鸭疫里氏杆菌外膜脂蛋白的表达及其免疫原性的分析

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中国兽医科学 2013年第6期43卷 578-582页

作者：帕提古丽.吾马尔郭东春张爱芹刘家森原冬伟姜骞林欢司昌德曲连东中国农业科学院哈尔滨兽医研究所实验动物研究室兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319

为掌握鸭疫里氏杆菌Riean1110基因表达产物的免疫原性,根据GenBank上公布的鸭疫里氏杆菌DSM15868株(登录号为NC014738)的基因序列设计1对特异性引物,扩增了血清1型鸭疫里氏杆菌HLG1株的Riean1110基因。将其克隆到表达载体pPRO-EX-Htb中... 详细信息

为掌握鸭疫里氏杆菌Riean1110基因表达产物的免疫原性,根据GenBank上公布的鸭疫里氏杆菌DSM15868株(登录号为NC014738)的基因序列设计1对特异性引物,扩增了血清1型鸭疫里氏杆菌HLG1株的Riean1110基因。将其克隆到表达载体pPRO-EX-Htb中,构建重组表达质粒pHtb-RA1110,转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS,用IPTG诱导重组蛋白的表达。SDS-PAGE分析表明,诱导表达的目的蛋白的分子质量大约为56ku,与预期大小相符,以包涵体形式存在。Western-blot分析表明,诱导的重组蛋白能特异性地识别鸭疫里氏杆菌阳性血清,具有良好的抗原性。用纯化的Riean1110蛋白免疫SPF鸭,经ELISA检测,可产生高水平的抗体。结果表明,制备的重组Riean1110蛋白为建立鸭疫里氏杆菌的血清学检测方法奠定了基础。

关键词：鸭疫里氏杆菌外膜脂蛋白原核表达免疫原性

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