检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2013年第2期35卷 91-94页

作者：孟沙沙乔传玲陈艳杨焕良刘丽萍尹航辛晓光陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

为建立H1N1亚型猪流感病毒A/swine/Jiangsu/40/2011(JS40)的反向遗传系统,本研究分别构建了JS40株8个基因节段的重组质粒,经转染293T和MDCK混合细胞,拯救出病毒R-JS40。序列测定结果表明,救获病毒与亲本病毒的核苷酸序列一致,无氨基酸变... 详细信息

为建立H1N1亚型猪流感病毒A/swine/Jiangsu/40/2011(JS40)的反向遗传系统,本研究分别构建了JS40株8个基因节段的重组质粒,经转染293T和MDCK混合细胞,拯救出病毒R-JS40。序列测定结果表明,救获病毒与亲本病毒的核苷酸序列一致,无氨基酸变异,可以稳定传代;抗原性未发生变化;对小鼠的致病性结果显示R-JS40与JS40对小鼠的组织嗜性以及在肺脏中复制的病毒滴度基本一致。以上结果表明R-JS40保持了亲本病毒JS40的生物学特性,该病毒反向遗传操作系统的建立,为进一步开展病毒的致病分子基础以及新型疫苗的研制提供有效的技术平台。

关键词：猪流感病毒类禽型 H1N1 反向遗传系统

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7.2分支H5N1亚型禽流感病毒反向遗传疫苗候选株的构建

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中国预防兽医学报 2013年第9期35卷 764-766页

作者：范俊李旭勇王金良郭晶邓国华施建忠陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

为应对clade7.2 H5N1亚型禽流感病毒(AIV)持续发生的抗原性改变及其引发的潜在AIV的地方性流行,需要根据流行监测的抗原分析结果挑选合适的供体株制备疫苗候选株。本研究采用反向遗传操作系统,以A/Puerto Rico/8/34(PR8)的内部基因为骨... 详细信息

为应对clade7.2 H5N1亚型禽流感病毒(AIV)持续发生的抗原性改变及其引发的潜在AIV的地方性流行,需要根据流行监测的抗原分析结果挑选合适的供体株制备疫苗候选株。本研究采用反向遗传操作系统,以A/Puerto Rico/8/34(PR8)的内部基因为骨架,以clade7.2 H5N1 AIV A/Chicken/Liao Ning/S4092/2011(CK/LN/S4092)基因组为模板经RT-PCR扩增其HA及NA基因,并对HA基因进行分子修饰,去除与H5亚型AIV致病力有关的HA蛋白裂解位点处的多个连续碱性氨基酸,使其获得低致病性AIV的分子特征(即将-PQIEGRRRKR-突变为-PQRETR-),从而构建出clade7.2 H5N1亚型AIV疫苗候选株rPR8-LN/S4092,为动物免疫试验奠定了基础。

关键词： clade 7 2 H5N1流感病毒反向遗传操作疫苗候选株

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H3亚型猪流感病毒抗原捕捉ELISA检测方法的建立

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中国预防兽医学报 2013年第7期35卷 566-569页

作者：陈艳乔传玲杨焕良孔维辛晓光陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

为快速检测H3亚型猪流感病毒(SIV),本研究将一株H3N2亚型SIV特异性单克隆抗体(MAb)进行纯化,建立了以多抗作为包被抗体,MAb作为检测抗体的H3亚型SIV抗原捕捉ELISA(AC-ELISA)方法。并对该方法的特异性和敏感性进行了分析,其敏感性是血凝... 详细信息

为快速检测H3亚型猪流感病毒(SIV),本研究将一株H3N2亚型SIV特异性单克隆抗体(MAb)进行纯化,建立了以多抗作为包被抗体,MAb作为检测抗体的H3亚型SIV抗原捕捉ELISA(AC-ELISA)方法。并对该方法的特异性和敏感性进行了分析,其敏感性是血凝试验的4倍,与猪繁殖与综合征病毒、猪圆环病毒、猪瘟病毒、猪细小病毒以及H1、H5、H9亚型SIV均没有明显的交叉性反应,批间和批内重复试验变异系数均小于10%。应用建立的AC-ELISA方法对84份H3亚型SIV实验室感染样品进行检测与鸡胚滴定病毒结果符合率达90.47%。本实验建立的AC-ELISA方法具有良好的特异性和敏感性,可用于H3亚型SIV的临床检测。

关键词：猪流感病毒 H3亚型单克隆抗体抗原捕捉ELISA

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H6N2亚型禽流感病毒全基因组的序列分析及其致病性研究

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中国预防兽医学报 2013年第11期35卷 870-873页

作者：刘丽玲胡守萍段振华李雁冰施建忠田国彬曾显营陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

2008年对我国南方活禽市场进行流行病学监测时从鸭体内分离鉴定出1株H6N2亚型禽流感病毒(AIV)。为了解该病毒DK/GD/S6/08(H6N2)的生物学特征,本研究对其全基因序列进行分析并对SPF鸡和SPF鸭进行致病性试验。结果表明DK/GD/S6/08(H6N2)... 详细信息

2008年对我国南方活禽市场进行流行病学监测时从鸭体内分离鉴定出1株H6N2亚型禽流感病毒(AIV)。为了解该病毒DK/GD/S6/08(H6N2)的生物学特征,本研究对其全基因序列进行分析并对SPF鸡和SPF鸭进行致病性试验。结果表明DK/GD/S6/08(H6N2)的HA裂解位点附近的氨基酸序列为340QIETR↓GLF347,符合低致病力AIV的特征。其HA基因与A/duck/Shantou/8365/2005(H6N6)同源性最高;NA基因在颈部无缺失;除M基因外,其他5个内部基因均来源于H6亚型AIV。鸭致病性试验表明DK/GD/S6/08(H6N2)可以感染SPF鸭,并通过泄殖腔排毒,法氏囊等脏器中可以检测到病毒,肺脏、肾脏、法氏囊和脑组织中可见病理变化。鸡致病性试验显示鸡的脑、肺脏、脾脏、法氏囊、肾脏、十二指肠和胰腺均未检测到病毒,咽喉拭子和泄殖腔拭子中未检测到病毒,表明该病毒不能感染SPF鸡。

关键词：禽流感病毒 H6N2亚型序列分析致病性

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两株H6N8亚型禽流感病毒分离株的分离与鉴定

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中国预防兽医学报 2013年第3期35卷 177-180页

作者：张曦崔鹏飞朱占松谭丹李文辉关立峥邓国华陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

为了解禽流感病毒(AIV)在我国华南地区的流行情况,我们对活禽市场中分离得到的两株鸭源H6N8亚型AIV[A/duck/Fujian/S2191/2011(H6N8)(FJ/191/11)和A/duck/Guizhou/S4035/2011(H6N8)(GZ/035/11)]进行全基因序列测定,并进行其对SPF鸡和BALB/c小鼠的致病性试验。序列分析显示:HA裂解位点基序为339PQIETR↓GLFG348,为低致病性AIV特征。内部基因分别源于两个国内流行的H6亚型病毒家系(ST339-like和HuN573-like)。序列分析表明FJ/191/11和GZ/035/11为H6亚型病毒与其他亚型AIV的N8NA基因发生重组,呈现明显的异源性。两分离株的感染性试验显示,它们对鸡和小鼠均呈低致病性;而且不能在鸡体内有效复制;对小鼠的感染性实验结果显示,小鼠肺脏和鼻甲病毒分离结果为阳性,其他脏器病毒滴定结果为阴性。

关键词：禽流感病毒 H6N8亚型抗原分析致病性

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gga-miR-21过表达细胞株对传染性法氏囊病病毒复制的影响

gga-miR-21过表达细胞株对传染性法氏囊病病毒复制的影响

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十次学术研讨会

作者：欧阳伟朱向东王永山王永强潘群兴毕振威王笑梅江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京 210014 江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京 210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

为了探讨gga-miR-21对传染性法氏囊病病毒(IBDV)复制的影响,用PCR方法从鸡的肝细胞基因组中扩增细胞pri-gga-miR-21,定向克隆于慢病毒表达质粒pL-EGFP中,获得重组慢病毒表达质粒pL-miR-21.将pL-miR-21和3个包装质粒pLP1、pLP2和pLP/VSV... 详细信息

为了探讨gga-miR-21对传染性法氏囊病病毒(IBDV)复制的影响,用PCR方法从鸡的肝细胞基因组中扩增细胞pri-gga-miR-21,定向克隆于慢病毒表达质粒pL-EGFP中,获得重组慢病毒表达质粒pL-miR-21.将pL-miR-21和3个包装质粒pLP1、pLP2和pLP/VSVG混合物共转染293FT细胞,获得含gga-miR-21基因的重组慢病毒VL+miR-21.用VL+miR-21感染DF-1细胞,经杀稻瘟菌素筛选获得了过表达gga-m iR-21的细胞株DF-miR-21,用qRT-PCR检测gga-miR-21的表达量比正常DF-1细胞提高了60％.将IBDV接种到DF-miR-21细胞,在96 h后,病毒滴度为10475 TCID50/0.1 mL,而正常DF-1细胞的病毒滴度为108.75 TCID50/0.1mL.用生物信息学方法和双荧光素酶报告系统分析验证,在IBDV基因组B片段上具有gga-miR-21的结合靶点.将IBDV感染的DF-miR-21细胞,用western-blot分析,VP1蛋白的表达量较正常DF-1细胞显著降低;用qRT-PCR分析,VP1 mRNA水平与正常DF-1细胞没有明显差异.本实验结果表明:细胞gga-miR-21可抑制IBDV的复制,其分子作用机理是在VP1基因翻译水平上(VP1蛋白的合成)而不是在转录水平上(VP1mRNA的转录)实现的.

关键词：鸡传染病法氏囊病病毒小分子核糖核酸表达系统病毒复制

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一株鸭源H5N2禽流感病毒全基因组序列分析及对鸡的致病性研究

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中国预防兽医学报 2013年第10期35卷 783-786页

作者：朱占松张曦崔鹏飞谭丹关立峥李文辉邓国华陈化兰东北农业大学黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点实验室黑龙江哈尔滨150001

2012年在我国重庆市活禽交易市场进行流行病学调查时,从鸭体内分离到1株H5N2亚型禽流感病毒(AIV),DK/CQ036/12(H5N2)。为了解该株H5N2亚型AIV的生物学特性,本研究对其进行了全基因组分析及对SPF鸡和BALB/c小鼠的致病性试验。序列分析显... 详细信息

2012年在我国重庆市活禽交易市场进行流行病学调查时,从鸭体内分离到1株H5N2亚型禽流感病毒(AIV),DK/CQ036/12(H5N2)。为了解该株H5N2亚型AIV的生物学特性,本研究对其进行了全基因组分析及对SPF鸡和BALB/c小鼠的致病性试验。序列分析显示:HA裂解位点序列为341R-----346TRGLF350,为低致病性AIV特征。内部基因来源较复杂,与KD/CQ/036/12分离株的M基因NP基因同源性最高的病毒株均来自H4、H7等亚型分离株,呈明显的异源性。分离株的感染性试验显示,该分离株在鸡体内可以通过呼吸道和消化道向外排毒,但并不能在鸡体内有效的复制。对小鼠的感染性试验结果显示,仅在鼻甲和肺能检测到病毒存在,其他脏器病毒滴定结果为阴性,表明病毒对鸡和小鼠均呈低致病性。

关键词：禽流感病毒 H5亚型基因组分析致病性

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非洲马瘟病毒VP7蛋白的原核表达及其间接ELISA方法的建立

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中国兽医科学 2013年第3期43卷 256-260页

作者：潘佳亮高利相文华戚亭郭巍东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物病研究室黑龙江哈尔滨150001

为了建立可特异性地检测血清中非洲马瘟病毒抗体的方法,优化并合成非洲马瘟病毒VP7蛋白基因,将其插入原核表达载体pET-30a(+)中,转化大肠杆菌Rosetta(DE3)中进行表达。SDS-PAGE和Western-blot分析结果显示,目的蛋白获得了高效表达,且有... 详细信息

为了建立可特异性地检测血清中非洲马瘟病毒抗体的方法,优化并合成非洲马瘟病毒VP7蛋白基因,将其插入原核表达载体pET-30a(+)中,转化大肠杆菌Rosetta(DE3)中进行表达。SDS-PAGE和Western-blot分析结果显示,目的蛋白获得了高效表达,且有特异的免疫学活性。用纯化的重组蛋白作为检测抗原,建立了检测血清中非洲马瘟病毒抗体的间接ELISA方法,并对该间接ELISA的抗原包被量、血清稀释度、封闭液的选择等反应条件进行了优化。所建立的间接ELISA方法可以鉴别血清中的非洲马瘟病毒抗体,具有良好的特异性和灵敏性,与标准竞争ELISA试剂盒的符合率达100%。表明本研究建立的检测血清中非洲马瘟病毒抗体的间接ELISA方法具有良好的特异性和灵敏性。

关键词：非洲马瘟病毒 VP7蛋白间接酶联免疫吸附试验

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猪流行性腹泻病毒N蛋白核仁定位信号对宿主细胞周期的影响

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中国预防兽医学报 2013年第3期35卷 173-176页

作者：刘随新石达陈建飞张鑫时洪艳刘孝珍张莎王璐冯力中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学黑龙江哈尔滨150030

为研究猪流行性腹泻病毒(PEDV)核衣壳蛋白(N)与宿主细胞相互作用,本研究根据前期已经鉴定的PEDV N蛋白核仁定位信号序列,利用重叠延伸PCR(SOE-PCR)方法扩增出核仁定位信号序列缺失的PEDV N基因(dN),并将其与真核表达载体pAc-GFP-C1连接... 详细信息

为研究猪流行性腹泻病毒(PEDV)核衣壳蛋白(N)与宿主细胞相互作用,本研究根据前期已经鉴定的PEDV N蛋白核仁定位信号序列,利用重叠延伸PCR(SOE-PCR)方法扩增出核仁定位信号序列缺失的PEDV N基因(dN),并将其与真核表达载体pAc-GFP-C1连接,构建重组质粒pAc-GFP-dN。将pAc-GFP-dN转染于Vero E6细胞中,利用激光共聚焦显微镜分析重组质粒pAc-GFP-dN表达蛋白的定位情况,并利用流式细胞仪检测转染细胞的周期变化。实验结果表明:与完整的N蛋白相比,缺失核仁定位信号的N蛋白不能定位于细胞核仁,同时丧失了使宿主细胞周期在G2/M期停滞的能力,从而揭示了N蛋白核仁定位信号对宿主细胞具有重要的影响。

关键词：猪流行性腹泻病毒核衣壳蛋白核仁定位信号流式细胞术宿主细胞周期

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猪源凋亡相关基因SYBR Green Ⅰ荧光定量RT-PCR方法的建立

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中国预防兽医学报 2013年第5期35卷 369-373页

作者：李玉明王刚汪志艳刘永刚涂亚斌王淑杰姜成刚王延群蔡雪辉东北农业大学黑龙江哈尔滨150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物疫病诊断中心黑龙江哈尔滨150001

为检测高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染的猪胸腺中凋亡相关因子的变化,本研究针对猪TNF-α、TNFR1、FasL、Fas、Bax、Bcl-2、caspase-3基因及内参β-actin基因设计特异性引物,构建含有各自引物扩增序列的重组质粒作为阳性标... 详细信息

为检测高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染的猪胸腺中凋亡相关因子的变化,本研究针对猪TNF-α、TNFR1、FasL、Fas、Bax、Bcl-2、caspase-3基因及内参β-actin基因设计特异性引物,构建含有各自引物扩增序列的重组质粒作为阳性标准品,建立了检测TNF-α、TNFR1、FasL、Fas、Bax、Bcl-2、caspase-3基因的SYBR Green I qRT-PCR方法。结果显示,该方法线性关系好(R2≥0.998),敏感性高,初始模板的检出下限为10拷贝/μL;特异性强,扩增产物形成单一的特异性熔解峰;重复性好,批内、批间重复试验的变异系数均小于3%,具有良好的重复性。本研究为细胞凋亡相关因子变化趋势的研究提供方法。

关键词：猪凋亡相关基因荧光定量PCR SYBR Green Ⅰ

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