检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2013年第3期35卷 181-184页

作者：吴珊珊王飞慈彦鹏刘丽玲田国彬曾显营陈化兰李雁冰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室/国家禽流感参考实验室黑龙江哈尔滨150001

2011年,对广西自治区进行禽流感流行病学调查时从野生哺乳动物果子狸体内分离到一株H5N1亚型禽流感病毒(AIV),命名为A/palm-civet/Guangxi/26/2011(H5N1)(PC/GX/26/11)。本研究对其全基因组序列进行测定及其对BALB/c鼠的致病性试验。全... 详细信息

2011年,对广西自治区进行禽流感流行病学调查时从野生哺乳动物果子狸体内分离到一株H5N1亚型禽流感病毒(AIV),命名为A/palm-civet/Guangxi/26/2011(H5N1)(PC/GX/26/11)。本研究对其全基因组序列进行测定及其对BALB/c鼠的致病性试验。全基因序列分析表明:该病毒属于Clade 2.3.2分支,其血凝素(HA)蛋白裂解位点存在多个连续的碱性氨基酸(-RRRR-),具有高致病性AIV(HPAIV)的典型分子特征,其HA、NA、PA、NS基因节段与A/muscovy duck/Vietnam/LBM57/2011(MD/VN/LBM57/11)(H5N1)有较高的同源性,为99.2%～99.6%;PB2、PB1、M、NP 4个基因节段与人源AIV A/Hubei/1/2010(HuB/1/10)(H5N1)的同源性最高,为99.0%～99.5%。动物试验显示:该病毒对小鼠的半数致死量为4.9 log EID50,对小鼠具有较高的致病性。在小鼠的肺和鼻甲骨中均能够进行良好的复制。以上结果表明,该分离株未经适应便具备感染哺乳动物并有较高致死的能力。

关键词：果子狸 H5N1亚型HPAIV 进化分析致病性

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结核分枝杆菌rv3668c基因的原核表达及多抗制备

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中国兽医科学 2013年第6期43卷 594-598页

作者：鄢秋龙陈利苹刘银冰曹俊倪宏波刘思国黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室黑龙江哈尔滨150001

以结核分枝杆菌强毒株H37Rv基因组DNA为模板,扩增rv3668c基因,将其连接于表达载体pET-30a(+),获得重组质粒p30a-68,并将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),用1mmol/L IPTG诱导表达组氨酸标签融合蛋白His-Rv3668c。用Ni-NTA His-Bind Resin亲和层析树脂纯化目的蛋白,利用抗6His标签抗体验证蛋白的纯化结果;通过Western-blot分析纯化蛋白与牛结核病阳性血清的反应情况。用重组蛋白纯化产物免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体。结果显示,重组质粒的双酶切鉴定和DNA序列测定均完全正确;SDS-PAGE和Western-blot分析结果表明,His-Rv3668c以可溶形式表达,蛋白质分子质量为26ku;纯化的蛋白能与牛结核病阳性血清发生反应,表明其具有很好的免疫原性。所制备的多克隆抗体也具有良好的特异性,可运用于对Rv3668c蛋白的功能特性研究。

关键词：结核分枝杆菌 rv3668c基因原核表达免疫原性

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MHC-B单倍型BW/G系鸡群同种异型抗血清的制备及应用

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中国家禽 2013年第14期35卷 14-18页

作者：杨柳高彩霞武永淑李海超杨超廉传江韩凌霞东北农业大学黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/实验动物中心黑龙江哈尔滨150001

BW/G(n)系鸡群是主要组织相容性复合体核心区纯合的SPF鸡群,包括BW/G1、BW/G2、BW/G3、BW/G5、BW/G6和BW/G76个亚系,分别属于B13、B15、B2、B5、B21、B19单倍型。本研究以BW/G(n)系鸡的外周血红细胞作为免疫原,静脉接种其它不同单倍型鸡... 详细信息

BW/G(n)系鸡群是主要组织相容性复合体核心区纯合的SPF鸡群,包括BW/G1、BW/G2、BW/G3、BW/G5、BW/G6和BW/G76个亚系,分别属于B13、B15、B2、B5、B21、B19单倍型。本研究以BW/G(n)系鸡的外周血红细胞作为免疫原,静脉接种其它不同单倍型鸡,制备了同种异型高免抗血清。参照经典的鸡血型鉴定方法,初步建立了单倍型鸡血型鉴定红细胞凝集方法,B13、B15、B5、B21、B2和B19的同种异型抗血清血凝效价分别为1∶80、1∶80、1∶40、1∶20、1∶16和1∶32,利用PCR对24只鸡的BF基因外显子2和3进行测序,确定其中22只为B5/B15杂合、2只为B15/B15纯合。利用制备的B15和B5抗血清分别对这24只鸡进行血凝试验,结果表明:B15抗血清与B5/B15个体的血凝效价为0～1∶160,与B15/B15个体的血凝效价分别为1∶80和1∶160;B5抗血清与B5/B15个体的血凝效价为1∶40～1∶80,与B15/B15个体的血凝效价分别为1∶10和1∶20。本研究制备的6种MHC单倍型鸡同种异型抗血清,为鸡的血型鉴定及免疫遗传基因纯合个体的筛选提供了物质基础。

关键词：鸡 MHC—B单倍型 B血型红细胞凝集试验

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检测兔出血症病毒荧光定量方法的建立与应用

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黑龙江畜牧兽医 2013年第2期 89-91页

作者：刘行波原东伟刘家森郭冬春姜骞林欢司昌德崔玉东曲连东黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室实验动物研究室哈尔滨150001

为了研究兔出血症病毒(Rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV)在实验动物兔和野兔中的发生情况并能更精确检测该病毒,试验采用建立的SYBR Green荧光定量方法对10只黑龙江省各单位送检的实验动物兔和5只哈尔滨郊县疑似病例的脏器样品... 详细信息

为了研究兔出血症病毒(Rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV)在实验动物兔和野兔中的发生情况并能更精确检测该病毒,试验采用建立的SYBR Green荧光定量方法对10只黑龙江省各单位送检的实验动物兔和5只哈尔滨郊县疑似病例的脏器样品进行了检测。结果表明:该方法有较好的灵敏度和特异性,能够用于兔出血症病毒的检测。

关键词：兔出血症病毒(RHDV) vp60 real-time PCR 隐性感染

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跨膜丝氨酸蛋白酶-4对2009甲型H1N1流感病毒HA的切割及其融合活性研究

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中国预防兽医学报 2013年第7期35卷 517-520页

作者：吴超温志远陈伟业施建忠葛金英步志高中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001 农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

流感病毒血凝素(HA)被宿主蛋白酶切割活化是流感病毒复制和扩散的关键步骤。2009甲型H1N1流感病毒HA的裂解位点为单碱性氨基酸,只能被宿主特定组织部位表达的某些蛋白酶所切割活化。本研究构建了主要存在于人呼吸道和肺脏的跨膜丝氨酸... 详细信息

流感病毒血凝素(HA)被宿主蛋白酶切割活化是流感病毒复制和扩散的关键步骤。2009甲型H1N1流感病毒HA的裂解位点为单碱性氨基酸,只能被宿主特定组织部位表达的某些蛋白酶所切割活化。本研究构建了主要存在于人呼吸道和肺脏的跨膜丝氨酸蛋白酶4(TMPRSS4)的真核表达重组质粒pCA-TMPRSS4-Flag与表达2009甲型H1N1流感病毒中国四川分离株HA的真核重组表达质粒pCA-SCHA共转染293T细胞,利用westernblot证明2009甲型H1N1流感病毒的HA蛋白能够被TMPRSS4切割;通过激光共聚焦确定TMPRSS4和HA在293T细胞膜上共定位;并进一步通过细胞融合试验证明经正确切割的HA具有在低pH条件下介导细胞膜发生融合的生物学功能。本实验为研究自然感染情况下参与活化流感病毒的宿主胰蛋白酶提供了实验依据。

关键词： 2009甲型H1N1流感病毒跨膜丝氨酸蛋白酶-4 血凝素细胞融合

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鸭RIG－1基因的组织表达及体外抗禽流感病毒活性研究

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中国畜牧兽医文摘 2014年第10期30卷 192-192页

作者：张雅春中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/实验动物研究室黑龙江哈尔滨150001

视黄酸诱导基因蛋白1（RIG-1）是一类模式识别受体，在机体抗病毒天然免疫过程中发挥重要作用。为检测金定鸭RIG-1基因的组织特异性表达水平和体外抗禽流感病毒（AIV）活性，本研究采用RT—PCR方法扩增鸭RIG-1基因并克隆于pcDNA3．1（... 详细信息

视黄酸诱导基因蛋白1（RIG-1）是一类模式识别受体，在机体抗病毒天然免疫过程中发挥重要作用。为检测金定鸭RIG-1基因的组织特异性表达水平和体外抗禽流感病毒（AIV）活性，本研究采用RT—PCR方法扩增鸭RIG-1基因并克隆于pcDNA3．1（＋）中构建重组真核表达质粒pcDNA-RIG—1，应用荧光定量PCR方法检测该基因在鸭不同组织中的特异性表达水平；并将pcDNA—RIG-1转染DF-1细胞，通过病毒TCID50测定、间接免疫荧光、荧光定量PCR的方法检测RIG-1的抗AIV活性。

关键词：禽流感病毒基因蛋白组织表达金定鸭活性 pcDNA3.1(+) 体外组织特异性表达

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鸡抗病毒免疫相关的TLR信号途径研究进展

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动物医学进展 2013年第8期34卷 93-96页

作者：李海超韩凌霞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/实验动物中心黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学黑龙江哈尔滨150030

Toll样受体(TLR)是进化保守的模式识别受体家族之一,在启动和调节宿主对病原体的免疫应答中起重要的作用。已经报道在鸡体中发现了10种TLR,与哺乳动物的同源物相比,在进化中高度保守,能识别病原体中保守的组成成分,其中TLR3、TLR7和TLR... 详细信息

Toll样受体(TLR)是进化保守的模式识别受体家族之一,在启动和调节宿主对病原体的免疫应答中起重要的作用。已经报道在鸡体中发现了10种TLR,与哺乳动物的同源物相比,在进化中高度保守,能识别病原体中保守的组成成分,其中TLR3、TLR7和TLR 21主要识别核酸配体,在细胞内体上分布,在抗病毒免疫中尤为重要。论文主要对鸡TLR3、7和21在抗病毒免疫中的作用及信号途径进行综述。

关键词： Toll样受体抗病毒免疫信号途径鸡

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14匹马经典MHC-Ⅰ类分子多态性分析

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中国预防兽医学报 2013年第10期35卷 852-854页

作者：刘建东孙留克林跃智那雷王雪峰杜承周建华曲娟娟东北农业大学生命科学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室、大动物病研究室黑龙江哈尔滨150001

为分析马经典MHC-I类分子的多态性，本研究从马外周血单个核细胞提取总RNA，并采用RT—PCR方法对14匹马经典MHC-I类分子（包括编码肽结合区的大部分区域、α3区、穿膜区以及胞浆区）进行扩增和序列分析。结果显示，14匹实验马各自具有2... 详细信息

为分析马经典MHC-I类分子的多态性，本研究从马外周血单个核细胞提取总RNA，并采用RT—PCR方法对14匹马经典MHC-I类分子（包括编码肽结合区的大部分区域、α3区、穿膜区以及胞浆区）进行扩增和序列分析。结果显示，14匹实验马各自具有2个～4个MHC-I等位基因，其在不同马匹之间的表达呈现明显的差异性，主要分布在2个分支。尽管如此，各马匹间均表达具有1个或1个以上相同或高度同源的对应经典MHC-I类分子的mRNA。该研究结果为正在开展的针对马传染性贫血病毒减毒疫苗核心蛋白（p26）以及其他免疫原的CTL表位的筛选提供基础数据。

关键词：马主要组织相容性复合物多态性 RT-PCR

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抗马动脉炎病毒N蛋白单克隆抗体的制备及B细胞抗原表位的鉴定

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中国兽医科学 2013年第10期43卷 1035-1039页

作者：赵世华戚亭郭巍田志革朱超相文华中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物研究室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学生命科学学院黑龙江哈尔滨150030

为鉴定马动脉炎病毒(EAV)N蛋白的抗原表位,利用原核表达系统表达N蛋白,用其免疫6周龄BALB/c小鼠,将小鼠脾细胞与骨髓瘤SP2/0细胞融合获得杂交瘤细胞,通过以重组N蛋白为包被抗原的间接ELISA方法筛选出2株能稳定分泌抗N蛋白的单克隆抗体(M... 详细信息

为鉴定马动脉炎病毒(EAV)N蛋白的抗原表位,利用原核表达系统表达N蛋白,用其免疫6周龄BALB/c小鼠,将小鼠脾细胞与骨髓瘤SP2/0细胞融合获得杂交瘤细胞,通过以重组N蛋白为包被抗原的间接ELISA方法筛选出2株能稳定分泌抗N蛋白的单克隆抗体(MAb),分别将其命名为2B3和2B9,其重链属于IgG1,轻链属于κ链。Western-blot证明,2株MAbs均能识别重组N蛋白。间接免疫荧光(IFA)试验证明,2株MAbs均与EAV呈阳性反应。用肽扫描法将N基因截短为具有相互部分重叠的11段,表达带HIS标签的重组蛋白,与MAb 2B3和MAb 2B9进行Western-blot和ELISA反应后,针对表位序列11 ASFRNGRRRQPTSYND26,进一步通过合成短肽对2株MAbs进行精确定位;结果表明,2B3识别的抗原表位为18 RRQPTSYND26,2B9针对的抗原表位为18 RRQPTSYND26。本研究结果为建立EVA的血清学检测方法及研究N蛋白的结构和功能奠定了基础。

关键词：马动脉炎病毒单克隆抗体肽扫描表位

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抗禽流感病毒NS1蛋白单克隆抗体的制备及其抗原表位的初步分析

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中国预防兽医学报 2013年第5期35卷 414-418页

作者：文雪霞包红梅孙佳善赵玉辉王云鹤姜永萍陈化兰王秀荣中国农业科学院哈尔滨兽医研究所国家禽流感参考实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030

为制备抗禽流感病毒(AIV)NS1蛋白的单克隆抗体(MAb)及鉴定其抗原表位鉴定,本研究以原核表达并纯化的NS1重组蛋白免疫BALB/c小鼠,采用淋巴细胞杂交瘤技术制备杂交瘤细胞,通过间接ELISA进行筛选,制备的D7和D9 2株能够稳定分泌抗NS1蛋白MA... 详细信息

为制备抗禽流感病毒(AIV)NS1蛋白的单克隆抗体(MAb)及鉴定其抗原表位鉴定,本研究以原核表达并纯化的NS1重组蛋白免疫BALB/c小鼠,采用淋巴细胞杂交瘤技术制备杂交瘤细胞,通过间接ELISA进行筛选,制备的D7和D9 2株能够稳定分泌抗NS1蛋白MAb的杂交瘤细胞,亚型鉴定均为IgG1型,轻链均为κ链。Western blot鉴定表明,这2株MAbs均能够识别NS1重组蛋白。间接免疫荧光鉴定表明,这2株MAbs均能够识别真核表达的NS1蛋白。利用噬菌体展示技术得到D9对应的短肽WNLNTV,与NS1蛋白aa 182～aa 187基本匹配,提示182WNDNTV187为NS1蛋白的一个线性表位。该结果为进一步研究NS1蛋白的结构和功能以及建立诊断方法奠定了基础。

关键词：禽流感 NS1蛋白单克隆抗体抗原表位

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