检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医科学 2013年第1期43卷 60-64页

作者：王伟刘春国刘明张超林刘飞刘彦云王寿山王丹吕让相文华中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院上海兽医研究所上海200241 黑龙江省医院黑龙江哈尔滨150001

为建立H3N8亚型马流感血清学诊断方法,将H3N8亚型马流感病毒A/equine/Xinjiang/3/2007(H3N8)M1基因插入到杆状病毒转移载体pFastBac Dual中,构建重组转移质粒pFastBac Dual-M1;将pFastBac Dual-M1转化到DH10Bac感受态细胞中,通过蓝白斑筛选重组穿梭质粒rBD-M1;在脂质体转染试剂介导下将rBD-M1转染对数生长期的Sf9昆虫细胞,拯救重组杆状病毒rBV-M1;rBV-M1感染Sf9细胞后,通过Western-blotting和免疫组织化学染色进行蛋白表达分析。结果表明,获得了分子质量为27ku的特异性M1蛋白,而且该蛋白具有良好的免疫活性。M1蛋白的成功表达为以M1蛋白作为诊断抗原的研究奠定了基础。

关键词：马流感病毒 H3N8亚型 M1基因杆状病毒表达

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猪圆环病毒2型Rep'蛋白单克隆抗体制备及其抗原表位鉴定

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中国预防兽医学报 2013年第5期35卷 405-409页

作者：刘丹刘建波吴洪丽王一平危艳武唐青海李胜斌魏萍刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨1500301

为制备猪圆环病毒2型Rep'蛋白单克隆抗体(MAb),本研究采用淋巴细胞瘤杂交技术制备其MAb,获得了1株能够稳定分泌抗PCV2-Rep'蛋白的杂交瘤细胞株,命名为3D1株。MAb亚类鉴定为IgG1/κ型,腹水效价达1∶819 200。Western blot分析表... 详细信息

为制备猪圆环病毒2型Rep'蛋白单克隆抗体(MAb),本研究采用淋巴细胞瘤杂交技术制备其MAb,获得了1株能够稳定分泌抗PCV2-Rep'蛋白的杂交瘤细胞株,命名为3D1株。MAb亚类鉴定为IgG1/κ型,腹水效价达1∶819 200。Western blot分析表明,该MAb可与重组杆状病毒表达的PCV2-rRep'和PCV2-rRep蛋白发生特异性反应,具有良好的特异性和反应原性。采用MAb对PCV2感染细胞中Rep'蛋白抗原性进行了鉴定,证明该MAb能够与病毒Rep'蛋白产生特异性反应。采用合成肽扫描法对MAb对应的抗原表位鉴定,其核心序列为61FANFVKKQTFNKV73,位于PCV2-Rep'蛋白的N末端。制备的MAb及其抗原表位鉴定,为该病毒分子生物学及诊断技术的研究奠定了基础。

关键词：猪圆环病毒2型重组Rep’蛋白单克隆抗体抗原表位

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表达H5N1亚型禽流感病毒HA基因重组腺病毒的构建及鉴定

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中国预防兽医学报 2013年第6期35卷 436-439页

作者：王伟刘春国王寿山张超林刘彦云吕让刘明东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部禽流感参考实验室黑龙江哈尔滨150001

为构建表达H 5N 1亚型clade 2.3.4禽流感病毒(AIV)HA基因的重组腺病毒,本研究通过RT-PCR扩增A/wild duck/Shandong/628/2011(H 5N 1)的H A基因,克隆于腺病毒穿梭质粒pShuttle-CMV中,构建重组腺病毒穿梭质粒pShuttle-CMV-HA。采用A d-Easy技术,制备表达AIVHA基因的复制缺陷型重组腺病毒rAd-H A。将rA d-HA感染Ad293细胞,可产生明显的细胞病变。通过细胞超薄切片观察到完整的腺病毒颗粒。经RT-PCR、间接免疫荧光及western blot证明HA基因在A d293细胞中成功转录和表达,并且表达的蛋白具有良好的生物学活性。本研究为新型H5N1亚型AIV活载体疫苗的研发奠定了基础。

关键词：禽流感病毒 H5N1亚型 HA基因重组腺病毒

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猪圆环病毒2型Rep/Rep'和Cap蛋白亚单位疫苗免疫保护性试验

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中国预防兽医学报 2013年第11期35卷 916-919页

作者：刘丹王一平吴洪丽危艳武刘建波李胜斌魏萍刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030

猪圆环病毒2型(PCV2)ORF1基因编码的Rep/Rep'蛋白与病毒复制酶相关,ORF2编码的Cap蛋白为病毒核衣壳,是病毒保护性抗原。为比较这3种蛋白作为亚单位疫苗的免疫保护性,本研究以重组杆状病毒表达的PCV2-rRep、-rRep'和-rCap蛋白制... 详细信息

猪圆环病毒2型(PCV2)ORF1基因编码的Rep/Rep'蛋白与病毒复制酶相关,ORF2编码的Cap蛋白为病毒核衣壳,是病毒保护性抗原。为比较这3种蛋白作为亚单位疫苗的免疫保护性,本研究以重组杆状病毒表达的PCV2-rRep、-rRep'和-rCap蛋白制备亚单位疫苗及PCV2灭活苗,分组免疫BALB/c鼠进行攻毒,以评价疫苗的免疫保护力。对PCV2-rRep和-rRep'亚单位疫苗免疫鼠血清ELISA抗体检测表明,于免疫后第14 d抗体全部转阳,第35 d抗体效价分别达到1∶42 667和1∶51 200。PCV2-rCap亚单位疫苗和PCV2灭活苗免疫组于第21 d抗体转阳,第35 d抗体效价分别达1∶2 133和1∶333。攻毒试验表明,PCV2-rCap亚单位疫苗和PCV2灭活苗免疫鼠获得完全保护;而PCV2-rRep和-rRep'蛋白亚单位疫苗免疫组无保护作用。血清中和试验表明,PCV2-rCap蛋白亚单位疫苗和PCV2灭活苗免疫鼠血清中和抗体效价达1∶1 600和1∶800;而PCV2-rRep和-rRep'蛋白亚单位疫苗免疫鼠血清无中和病毒能力。该研究表明,PCV2-Cap蛋白亚单位疫苗具有良好的免疫保护力,可以与PCV2自然感染猪产生的抗Rep蛋白抗体相鉴别,具有良好的开发前景。

关键词：猪圆环病毒2型 Rep Rep’和Cap蛋白亚单位疫苗免疫保护性

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狂犬病病毒囊膜糖蛋白基因DNA免疫研究

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中国预防兽医学报 2013年第9期35卷 752-755页

作者：蒋伟王喜军帅磊葛金英任家琰步志高山西农业大学动物科技学院山西太谷030801 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

狂犬病病毒(RV)囊膜糖蛋白(G)是该病毒诱导保护性免疫反应的主要抗原。为研究G蛋白基因的DNA免疫效果,本研究构建了表达哺乳动物密码子优化的RV G基因的重组真核表达质粒pCAGG-RVG,间接免疫荧光试验及western blot结果表明,重组RV G基因... 详细信息

狂犬病病毒(RV)囊膜糖蛋白(G)是该病毒诱导保护性免疫反应的主要抗原。为研究G蛋白基因的DNA免疫效果,本研究构建了表达哺乳动物密码子优化的RV G基因的重组真核表达质粒pCAGG-RVG,间接免疫荧光试验及western blot结果表明,重组RV G基因在pCAGG-RVG转染的BHK-21细胞中获得正确表达。将pCAGG-RVG按500μg剂量经肌肉注射途径免疫比格犬,间隔4周以相同剂量、途径加强免疫一次,并于初次免疫前、后不同时间检测血清RV的中和抗体。结果显示,pCAGG-RVG一次免疫即可诱导产生显著的中和抗体反应,二次免疫中和抗体滴度表现出显著地增强效果。二次免疫后,中和抗体滴度缓慢下降,保持持续平稳,至初次免疫后第54周,7只免疫犬病毒中和抗体滴度平均为2.88 IU/mL,并且全部高于0.5 IU/mL,即全部高于对强毒攻击保护的最低中和抗体滴度要求。因此,本研究构建的pCAGG-RVG具有预防狂犬病的潜力,是一种有希望的狂犬病候选疫苗。

关键词：狂犬病病毒 DNA疫苗 G蛋白

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多杀性巴氏杆菌PurF蛋白的原核表达及多克隆抗体制备

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动物医学进展 2013年第1期34卷 6-10页

作者：张爱芹郭东春刘家森原冬伟姜骞林欢崔玉东曲连东黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室实验动物研究室黑龙江哈尔滨150001

为了获得多杀性巴氏杆菌PurF蛋白及其多克隆抗体,通过PCR扩增了多杀性巴氏杆菌C51-17株purF基因,将其克隆到表达载体pPROEX-HTa中,构建重组表达质粒pHT-PurF,转化至大肠埃希菌BL21(DE3)感受态细胞中,经IPTG诱导表达。SDS-PAGE检测表明,... 详细信息

为了获得多杀性巴氏杆菌PurF蛋白及其多克隆抗体,通过PCR扩增了多杀性巴氏杆菌C51-17株purF基因,将其克隆到表达载体pPROEX-HTa中,构建重组表达质粒pHT-PurF,转化至大肠埃希菌BL21(DE3)感受态细胞中,经IPTG诱导表达。SDS-PAGE检测表明,获得重组蛋白分子质量约56.5ku,主要以包涵体形式存在;Western blot检测表明,表达的蛋白可与多杀性巴氏杆菌制备的高免血清发生特异性反应。将制备的重组蛋白免疫Balb/c小鼠制备多克隆抗体,ELISA检测血清抗体效价,结果显示制备的多克隆抗体滴度达到1∶128 000,Western blot表明可与多杀性巴氏杆菌PurF蛋白发生反应。本研究制备了多杀性巴氏杆菌的PurF蛋白及其多克隆抗体,为进一步研究PurF蛋白在多杀性巴氏杆菌致病中的作用奠定了基础。

关键词：多杀性巴氏杆菌 purF基因原核表达多克隆抗体

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布鲁氏菌Cu/Zn-SOD基因的原核表达及其免疫原性分析

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中国预防兽医学报 2013年第4期35卷 317-320页

作者：覃晓琳乔祖健胡森刘文兴赵云李继昌步志高东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

为分析布鲁氏菌超氧化物歧化酶(Cu/Zn-SOD)蛋白的免疫原性,本研究将布鲁氏菌强毒株M28的Cu/Zn-SOD基因经PCR扩增并克隆至pET-32a(+)中进行重组表达和纯化。经western blot分析表明,重组蛋白SOD(rSOD)可以与布鲁氏菌自然感染血清发生特... 详细信息

为分析布鲁氏菌超氧化物歧化酶(Cu/Zn-SOD)蛋白的免疫原性,本研究将布鲁氏菌强毒株M28的Cu/Zn-SOD基因经PCR扩增并克隆至pET-32a(+)中进行重组表达和纯化。经western blot分析表明,重组蛋白SOD(rSOD)可以与布鲁氏菌自然感染血清发生特异性反应。同时,以rSOD免疫BALB/c小鼠制备的多抗血清可以与布鲁氏菌疫苗株M5-90发生特异性反应;以rSOD为包被抗原进行间接ELISA检测,结果显示rSOD能够区分布鲁氏菌阳性血清和阴性血清。因此,rSOD蛋白具有良好的免疫原性和ELISA反应原性,为利用rSOD蛋白建立布鲁氏菌检测方法奠定基础。

关键词：布鲁氏菌 Cu Zn SOD基因原核表达免疫原性

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布鲁氏菌M28强毒株O抗原聚合酶基因缺失株的构建及其毒力评价

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中国预防兽医学报 2013年第3期35卷 197-201页

作者：赵云胡森乔祖建刘文兴覃晓琳步志高中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030

为构建布鲁氏菌O抗原聚合酶缺失突变株,本研究以布鲁氏菌M28株为亲本株,利用同源重组方法,以编码O抗原聚合酶靶基因M28_B0107基因ORF外侧序列作为同源臂构建重组质粒pSP-B0107-K,将其电转化至M28感受态细胞中,以卡那霉素抗性基因(Kanr)... 详细信息

为构建布鲁氏菌O抗原聚合酶缺失突变株,本研究以布鲁氏菌M28株为亲本株,利用同源重组方法,以编码O抗原聚合酶靶基因M28_B0107基因ORF外侧序列作为同源臂构建重组质粒pSP-B0107-K,将其电转化至M28感受态细胞中,以卡那霉素抗性基因(Kanr)作为标记,筛选缺失突变株(M28-ΔB0107)。M28-ΔB0107经过20余代传代培养,Kanr表达稳定。将M28-ΔB0107与M28以106cfu剂量腹腔接种小鼠,进行体内致病性试验。结果显示,M28-ΔB0107感染组小鼠脾脏荷菌量显著低于亲本M28株感染组,感染6周时,前者低于后者近10倍(p<0.05);而且M28-ΔB0107感染组脾脏重量也显著低于M28强毒株组(p<0.05);小鼠腹腔巨噬细胞系(RAW264.7)感染能力试验结果表明,突变株与亲本株无明显差异(p>0.05)。

关键词：布鲁氏菌 O抗原聚合酶 B0107

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黑龙江散养鸡中一株乳酸菌的分离鉴定及益生特性和抗病毒特性研究

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中国预防兽医学报 2013年第6期35卷 444-448页

作者：杨红亚崔红玉闫帅赵妍李巧玲王云峰何高明石河子大学动物科技学院新疆石河子832000 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

为筛选具有优良益生及抗菌及抗病毒特性的禽源乳酸菌,本研究在黑龙江散养鸡新鲜粪便中分离出一株乳酸菌,经过菌落形态观察、革兰氏染色和菌体形态观察、API碳水化合物发酵试验鉴定以及16S rDNA序列的Mega Blast和LinnaeusBlast分析,鉴... 详细信息

为筛选具有优良益生及抗菌及抗病毒特性的禽源乳酸菌,本研究在黑龙江散养鸡新鲜粪便中分离出一株乳酸菌,经过菌落形态观察、革兰氏染色和菌体形态观察、API碳水化合物发酵试验鉴定以及16S rDNA序列的Mega Blast和LinnaeusBlast分析,鉴定为约氏乳杆菌,命名为LactobacillusjohnsoniiY 2。通过耐酸试验、抗胆盐试验、大剂量(8×109cfu)饲喂试验、体外抑菌试验和抗病毒(新城疫病毒La Sota株)试验表明,*** 2可耐受pH 3.0的酸度和0.5%的高胆盐环境;大剂量饲喂无毒无害且具有增加采食量和增重的效果;具有较明显的抗菌和抗病毒作用。*** 2显示出优良的益生特性,可作为益生菌候选菌株。

关键词：乳酸菌分离鉴定益生特性抗病毒特性

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牛α干扰素在毕赤酵母中的高效分泌表达及活性鉴定

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中国预防兽医学报 2013年第10期35卷 845-848页

作者：王延群张璐李玉明汪志艳金家民刘永刚王刚王淑杰姜成刚涂亚斌蔡雪辉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物疫病诊断中心黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030

为高效分泌表达牛α干扰素(boIFN-α),本研究通过人工合成boIFN-α基因,将目的基因克隆至表达载体pPIC9K中,构建重组质粒pPIC9K-boIFN-α,将其电转化于毕赤酵母菌株GS115,利用抗药选择压力G418筛选重组菌,对重组菌诱导表达,取上清进行SD... 详细信息

为高效分泌表达牛α干扰素(boIFN-α),本研究通过人工合成boIFN-α基因,将目的基因克隆至表达载体pPIC9K中,构建重组质粒pPIC9K-boIFN-α,将其电转化于毕赤酵母菌株GS115,利用抗药选择压力G418筛选重组菌,对重组菌诱导表达,取上清进行SDS-PAGE和western blot检测,并优化重组菌的诱导表达条件。结果显示:筛选获得高效分泌表达boIFN-α的重组菌,其最佳诱导条件为:250 r/min,26℃培养,1%甲醇浓度诱导,诱导72 h。上清中目的蛋白表达量最高可达200μg/mL,本研究为boIFN-α在生产中的应用奠定了基础。

关键词：牛IFN-α 毕赤酵母分泌表达

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