检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2013年第4期35卷 259-262页

作者：郭东伟尹曼曼张枫李江南黄丽余丽芸翁长江黑龙江八一农垦大学生命科学技术院黑龙江大庆163319 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)编码的非结构蛋白NSP9为参与病毒复制的RNA依赖的RNA聚合酶(RdRp),而宿主蛋白与RdRp相互作用参与病毒基因组的复制机理尚不明确。为筛选与RdRp相互作用的宿主蛋白,本研究以PPRSV NSP9蛋白为"诱饵&quo... 详细信息

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)编码的非结构蛋白NSP9为参与病毒复制的RNA依赖的RNA聚合酶(RdRp),而宿主蛋白与RdRp相互作用参与病毒基因组的复制机理尚不明确。为筛选与RdRp相互作用的宿主蛋白,本研究以PPRSV NSP9蛋白为"诱饵",利用酵母双杂交方法筛选猪肺泡巨噬细胞cDNA酵母表达文库,筛选结果显示PRRSV NSP9蛋白与宿主蛋白RACK1具有相互作用关系。进一步经酵母共转化试验和免疫共沉淀试验验证RACK1和NSP9特异性结合,并共定位于细胞浆中。研究结果表明,宿主蛋白RACK1是PRRSV NSP9蛋白的一种新的相互作用蛋白,然而RACK1参与PRRSV复制的详细机理有待深入研究。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒猪肺泡巨噬细胞表达文库 NSP9 RACK1蛋白蛋白相互作用

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鸭坦布苏病毒鸭胚成纤维细胞适应病毒编码基因序列测定及分析

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中国预防兽医学报 2013年第10期35卷 791-794页

作者：李云霞刘晓丽张玥韩宗玺邵昱昊刘胜旺孔宪刚中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学生命科学学院黑龙江哈尔滨150030

为研究鸭坦布苏病毒(DTMUV)Du/CH/LSD/110128在鸭胚成纤维细胞(DEF)的适应性及变异情况,本研究将Du/CH/LSD/110128接种DEF,测定各代病毒的TCID50,表明DTMUV分离株已适应DEF,并在72 h产生明显的细胞病变(CPE),自F8代起病毒适应DEF,其F10... 详细信息

为研究鸭坦布苏病毒(DTMUV)Du/CH/LSD/110128在鸭胚成纤维细胞(DEF)的适应性及变异情况,本研究将Du/CH/LSD/110128接种DEF,测定各代病毒的TCID50,表明DTMUV分离株已适应DEF,并在72 h产生明显的细胞病变(CPE),自F8代起病毒适应DEF,其F10代病毒滴度为104.4TCID50/0.1 mL左右。对细胞适应毒F10代的DTMUV进行编码区基因测序并分析,结果表明Du/CH/LSD/110128细胞适应毒与DTMUV参考病毒株同源性在98%以上;其推导氨基酸序列与亲本病毒氨基酸序列差异不显著,仅存在10个氨基酸差异位点,主要在NS1和NS3蛋白,与鸡源、鸭源及鸽源病毒分别具有21个、14个、16个差异位点,这些差异位点主要存在于E蛋白、NS1蛋白和NS5蛋白。

关键词：鸭坦布苏病毒细胞适应序列分析氨基酸差异

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表达西尼罗病毒E蛋白重组腺病毒的构建及鉴定

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中国预防兽医学报 2013年第4期35卷 267-270页

作者：张翠云赵晶陈韬孙恩成刘霓红杨涛徐青元王文世魏鹏吴东来湖南农业大学动物医学学院湖南长沙410128 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

为构建表达西尼罗病毒(WNV)E蛋白的重组腺病毒,本实验将WNV的E基因克隆至腺病毒穿梭载体pShuttle-CMV中,经PmeⅠ酶切线性化后电转化于含有人5型缺陷腺病毒的骨架的BJ5183感受态大肠杆菌中进行同源重组,构建重组质粒pAd-WNV-E;将其经Pac... 详细信息

为构建表达西尼罗病毒(WNV)E蛋白的重组腺病毒,本实验将WNV的E基因克隆至腺病毒穿梭载体pShuttle-CMV中,经PmeⅠ酶切线性化后电转化于含有人5型缺陷腺病毒的骨架的BJ5183感受态大肠杆菌中进行同源重组,构建重组质粒pAd-WNV-E;将其经PacⅠ酶切线性化后通过脂质体介导转染于人胚肾细胞Ad-293细胞,制备重组腺病毒rAd-WNV-E;经western blot以及间接免疫荧光鉴定表明WNV E蛋白在Ad-293细胞中获得有效表达。病毒滴度测定试验结果显示,该重组腺病毒与野毒型腺病毒复制能力相近。该重组腺病毒的构建为进一步研制表达WNV E蛋白的重组腺病毒的疫苗奠定了基础。

关键词：西尼罗病毒 E蛋白重组腺病毒

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H6亚型禽流感病毒一步法RT-PCR检测方法的建立

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中国预防兽医学报 2013年第2期35卷 142-145页

作者：谭丹邓国华施建忠刘道新陈化兰湖南农业大学动物医学院湖南长沙410128 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

为快速检测临床样品中的H6亚型禽流感病毒(AIV),本研究通过分析流感数据库中H6亚型的HA基因,在HA保守区设计一对引物,建立一种用于扩增H6亚型禽流感病毒HA基因的一步法RT-PCR检测方法,扩增片段为327 bp。采用该方法对H6亚型AIV的尿囊液1... 详细信息

为快速检测临床样品中的H6亚型禽流感病毒(AIV),本研究通过分析流感数据库中H6亚型的HA基因,在HA保守区设计一对引物,建立一种用于扩增H6亚型禽流感病毒HA基因的一步法RT-PCR检测方法,扩增片段为327 bp。采用该方法对H6亚型AIV的尿囊液10倍倍比稀释样品进行检测,结果显示最低检出量为102.5EID50/mL。用该方法检测其他亚型AIV和鸡新城疫病毒等病原均为阴性,具有良好的特异性。对H6 AIV人工感染鸡的咽喉、泄殖腔棉拭子样品进行一步法RT-PCR检测,并与病毒分离进行比较,显示该方法对棉拭子的检测极限可达102.5EID50/mL,同时利用该方法及病毒分离对临床样品进行检测,两者检测结果一致。实验结果表明该RT-PCR方法具有较好的特异性、敏感性,可以应用于临床样品的实验室检测。

关键词：禽流感病毒一步法RT-PCR H6亚型

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猪圆环病毒2型引起相关肠炎疾病的研究进展

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动物医学进展 2013年第10期34卷 92-95页

作者：袁婧魏萍刘长明东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

猪圆环病毒相关疾病(PCVAD)已成为世界范围内影响养猪业发展的重要疾病。由猪圆环病毒2型(PCV-2)引发的肠炎是PCVAD的症状之一,临床表现为生长仔猪腹泻、生长发育迟缓或体重减轻;在淋巴组织和肠组织中可检测到大量的PCV-2病原,并出现特... 详细信息

猪圆环病毒相关疾病(PCVAD)已成为世界范围内影响养猪业发展的重要疾病。由猪圆环病毒2型(PCV-2)引发的肠炎是PCVAD的症状之一,临床表现为生长仔猪腹泻、生长发育迟缓或体重减轻;在淋巴组织和肠组织中可检测到大量的PCV-2病原,并出现特征性组织学病变。试验证实,PCV-2单独感染或与其他病原混合感染可引发肠炎,经口服途径攻毒感染是引发PCV-2相关肠炎疾病的一种重要感染途径。因此,PCV-2是生长仔猪肠道疾病的一种致病因子,应予以足够重视。论文对PCV-2相关肠炎在临床表现、组织病理学特征、多病原混合感染对其影响、临床诊断以及防控措施等方面的研究进展进行综述,以期对PCV-2相关肠炎疾病的深入研究提供参考。

关键词：猪圆环病毒2型肠炎诊断

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H6N6亚型禽流感病毒反向遗传操作系统的建立

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中国预防兽医学报 2013年第5期35卷 346-349页

作者：张国权王国俊罗维玉姜永萍施建忠邓国华田石杨孝朴陈化兰甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

为建立H6N6亚型禽流感病毒(AIV)A/Chicken/GuangDong/S1311/10(W-CKGD)反向遗传操作系统,本研究构建了W-CKGD的8个重组质粒,拯救出AIV A/Chicken/GuangDong/S1311/10(R-CKGD)。全基因序列测定结果表明,救获病毒R-CKGD与野生病毒W-CKGD的核苷酸序列完全相同。R-CKGD与W-CKGD具有相同的受体结合特性和对BALB/c小鼠均呈低致病性,以106EID50剂量鼻腔感染BALB/c小鼠,病毒仅在小鼠的呼吸道复制,可以引起小鼠体重下降但均不造成死亡。实验结果表明,R-CKGD与W-CKGD保持了一致的生物学特性,从而为进一步研究H6亚型AIV的致病机理及跨宿主传播机制等提供了良好的平台。

关键词： H6N6 禽流感病毒反向遗传操作系统

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禽流感病毒同义NP蛋白的原核表达及其间接ELISA检测方法的建立

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中国预防兽医学报 2013年第6期35卷 464-467页

作者：田石邓国华单继艳施建忠张国权陈普成柳金雄文雪霞姜永萍陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070

为建立通用型禽流感病毒(AIV)快速检测方法,本研究将合成的同义NP(ConsNP)基因克隆于pET30a中,利用大肠杆菌系统进行原核表达,以纯化重组ConsN P蛋白作为包被抗原,建立了检测AIVNP抗体的间接ConsNP-ELISA方法,并优化了反应条件。结果表... 详细信息

为建立通用型禽流感病毒(AIV)快速检测方法,本研究将合成的同义NP(ConsNP)基因克隆于pET30a中,利用大肠杆菌系统进行原核表达,以纯化重组ConsN P蛋白作为包被抗原,建立了检测AIVNP抗体的间接ConsNP-ELISA方法,并优化了反应条件。结果表明:抗原包被量为1μg/孔;封闭剂为5%脱脂乳;一抗血清稀释度为1∶200;H RP标记的兔抗鸡IgG(酶标二抗)稀释度为1∶20 000;阴阳性临界值为:O D490nm值>0.239。该间接ELISA方法与其他亚型A IV阳性血清均呈阳性反应,与新城疫病毒,马力克病病毒,禽传染性囊病病毒阳性血清无交叉反应,具有良好的特异性和敏感性。本研究为进一步研制通用型的禽流感ConsN P-ELISA检测试剂盒奠定了基础。

关键词：禽流感病毒同义NP蛋白 ELISA 检测

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抗猪PD-L1分子的单克隆抗体制备及免疫学特性分析

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中国预防兽医学报 2013年第7期35卷 578-581页

作者：彭金美李登云郭娟娟安同庆孙艳吴玉全陈家锃冷超粮田志军童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 西北农林科技大学动物医学院陕西杨凌712100 中国农业科学院上海兽医研究所猪传染病研究室上海200241

为制备抗猪程序性死亡因子配体1(PD-L1)的单克隆抗体(MAb)并鉴定其免疫学特性,本研究将猪PD-L1基因的外膜区利用原核表达载体pET32a进行表达,以纯化的表达蛋白免疫BALB/c小鼠,利用常规淋巴细胞杂交瘤技术进行细胞融合,以表达PD-L1-Fc蛋... 详细信息

为制备抗猪程序性死亡因子配体1(PD-L1)的单克隆抗体(MAb)并鉴定其免疫学特性,本研究将猪PD-L1基因的外膜区利用原核表达载体pET32a进行表达,以纯化的表达蛋白免疫BALB/c小鼠,利用常规淋巴细胞杂交瘤技术进行细胞融合,以表达PD-L1-Fc蛋白的293T细胞作为抗原,采用间接免疫荧光试验筛选杂交瘤培养上清,获得两株稳定分泌抗猪PD-L1 MAb的杂交瘤细胞系。MAb亚型鉴定均为IgG1型,轻链为κ链。Western blot试验表明这两株MAb均可以特异性识别PD-L1蛋白。流式细胞检测结果显示这两株MAb可以识别表达于293T细胞膜表面的PD-L1分子,但不能阻断PD-L1分子与其受体PD-1的结合。这两株MAb的获得为研究PD-1/PD-L1通路与猪的某些感染性疾病发展进程的关系提供了必要的检测工具。

关键词： PPD-L1分子 PD-1 PD-L1通路单克隆抗体

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绿色荧光示踪马传染性贫血病毒样颗粒在活细胞中的组装过程

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中国预防兽医学报 2013年第9期35卷 691-694页

作者：张泽力马建尹鑫谷勤雍艾有为曹苏亚王玉龙王晓钧东北林业大学野生动物资源学院黑龙江哈尔滨150040 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物研究室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030

马传染性贫血病毒(EIAV)gag基因编码的多聚Gag蛋白能够自动组装形成病毒样颗粒(VLPs)。为研究EIAV衣壳蛋白合成、组装及释放过程,本实验通过构建表达EIAV Gag-GFP融合蛋白重组质粒,并将其转染293T细胞,采用western blot检测不同时间点V... 详细信息

马传染性贫血病毒(EIAV)gag基因编码的多聚Gag蛋白能够自动组装形成病毒样颗粒(VLPs)。为研究EIAV衣壳蛋白合成、组装及释放过程,本实验通过构建表达EIAV Gag-GFP融合蛋白重组质粒,并将其转染293T细胞,采用western blot检测不同时间点VLPs的产生及释放。并进一步通过活细胞和3D成像技术观察Gag-GFP在细胞中的表达动态及VLPs的组装过程。结果表明:Gag和GFP蛋白融合表达不影响VLPs的组装,转染约6 h后EIAV Gag蛋白进行合成并在细胞胞质聚集完成组装形成VLPs。该实验结果为进一步研究EIAV在细胞中的组装路线和机制奠定了重要基础。

关键词：马传染贫血病毒病毒样颗粒活细胞共聚焦病毒组装

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恒河猴Tetherin蛋白对马传染性贫血病毒抑制作用的研究

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中国预防兽医学报 2013年第2期35卷 87-90页

作者：谷勤雍胡哲尹鑫张泽力吴星亮魏萍王晓钧东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物研究室黑龙江哈尔滨150001 东北林业大学野生动物资源学院黑龙江哈尔滨150040

Tetherin是新发现的具有限制多种病毒从细胞膜释放功能的细胞蛋白。本研究采用RT-PCR技术从恒河猴巨噬细胞中扩增Tetherin基因,将其插入真核表达载体pEF4/myc-His B中构建重组质粒pHF-Tetherin。并将其转染293T细胞,通过western blot和... 详细信息

Tetherin是新发现的具有限制多种病毒从细胞膜释放功能的细胞蛋白。本研究采用RT-PCR技术从恒河猴巨噬细胞中扩增Tetherin基因,将其插入真核表达载体pEF4/myc-His B中构建重组质粒pHF-Tetherin。并将其转染293T细胞,通过western blot和激光共聚焦分析Tetherin在293T细胞中的表达及亚细胞定位。将pHF-Tetherin分别与马传染性贫血病毒(EIAV)或猴免疫缺陷病毒(SIV)假病毒粒子感染性质粒共转染293T细胞,分析Tetherin对EIAV及SIV出芽的限制作用。研究结果表明,pHF-Tetherin转染293T细胞48 h后可以检测到Tetherin的表达并定位于细胞膜,而且该蛋白具有抑制EIAV及SIV从转染细胞中出芽的生物学功能。

关键词：恒河猴Tetherin 马传染性贫血病毒猴免疫缺陷病毒病毒出芽

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