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2013年中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十二次学术讨论会

作者：张小莺陈红秀江雪梅仇华吉西北农林科技大学动物医学院陕西杨凌712100 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 西北农林科技大学动物医学院陕西杨凌712100 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

目的：通过构建猪IFN-γ的噬菌体展示禽源scFv抗体文库,制备高特异性的scFv抗体.方法：1、构建猪IFN-γ的禽源噬菌体展示抗体文库.免疫SPF鸡4次后,提取SPF鸡脾脏mRNA,反转录为cDNA后,以cDNA为模板扩增抗体重链可变区和轻链可变区基因,... 详细信息

目的：通过构建猪IFN-γ的噬菌体展示禽源scFv抗体文库,制备高特异性的scFv抗体.方法：1、构建猪IFN-γ的禽源噬菌体展示抗体文库.免疫SPF鸡4次后,提取SPF鸡脾脏mRNA,反转录为cDNA后,以cDNA为模板扩增抗体重链可变区和轻链可变区基因,并进一步经融合PCR扩增单链抗体(scFv)基因.scFv与pCATAB5E均通过SfiI/NotI酶切后,scFv克隆至pCATAB5E噬菌粒载体,构建噬菌体展示抗体文库,随机挑取的10个克隆;2、抗体基因的大量表达.将随机挑取的10个克隆的抗体基因克隆至原核表达载体pET30a,优化诱导表达条件,并用Ni+柱进行纯化.结果：在噬菌体展示抗体文库中随机挑取的10个克隆,反应性均很高;诱导表达结果显示20℃,0.4mM IPTG,10h为最佳表达条件;可溶性scFv抗体的终浓度为5mg/mL,经ELISA、Western blot和间接免疫荧光检测反应性良好,与鼠源单抗平行比较发现,鸡scFv反应性较鼠源单抗高.结论：本研究构建了猪IFN-γ的噬菌体展示鸡源scFv抗体文库,并制备高特异性的scFv抗体;同时与鼠源单抗进行比较,初步确认了禽源单抗的特殊优势;这些研究结果支持了构建禽源单克隆抗体研发平台的设想,不失为一种有效的抗体研发替代途径.

关键词：禽源单克隆IgY抗体药物开发猪干扰素-γ 噬菌体展示技术

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猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)在脱氨酶作用下变异的证据

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)在脱氨酶作用下变异的证据

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2013国际猪繁殖与呼吸综合征学术研讨会

作者：冷超粮汤艳东董建国侯艳霞常丹蔡雪辉周建华张桂红田志军童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 华南农业大学兽医学院广东广州510642 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 华南农业大学兽医学院广东广州510642 华南农业大学兽医学院广东广州510642 中国农业科学院上海兽医研究所上海200241

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)俗称"蓝耳病",是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的一种重要传染病.该病在世界范围内广泛存在,给养猪业造成了巨大的经济损失.2006年,我国出现了能导致"非典型蓝耳病"和"高热病&...

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)俗称"蓝耳病",是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的一种重要传染病.该病在世界范围内广泛存在,给养猪业造成了巨大的经济损失.2006年,我国出现了能导致"非典型蓝耳病"和"高热病"的高致病猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV),给该病的防控提出了更为严峻的挑战.PRRSV的进化机理,特别是PRRSV由低致病性变异为高致病性的原因,一直是研究的热点领域.在本研究中,我们分别将6对PRRSV弱毒疫苗株与其相应母源强毒株(CH-la/CH-1R、HuN4/HuN4-F112、JXAl/JXAl-R、VR-2332/respPRRS MLV和JA 142/Ingelvac ATP)的全基因组序列进行了比对.有趣的是,这6株PRRSV母源强毒株在Marc-145细胞连续传代过程中都有倾向性的高突变.

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新疆马病毒性动脉炎的血清学调查

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草食家畜 2013年第6期 59-61页

作者：阿依吐拉·肉孜赵世华盛卓君阿孜古丽美热木古丽居马别克王文相文华新疆动物卫生监督所新疆乌鲁木齐830052 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 新疆奇台县动物疾病控制中心新疆奇台县831800

为搞清马病毒性动脉炎在新疆昭苏县的流行情况,本实验采用法国进口马病毒性动脉炎间接ELISA诊断试剂盒对来自新疆4个地区的435份马血清样品进行检测结果显示,有2份血清检测为阳性,阳性率为1.26%。其中伊犁种马场,昭苏种马场和哈密伊吾... 详细信息

为搞清马病毒性动脉炎在新疆昭苏县的流行情况,本实验采用法国进口马病毒性动脉炎间接ELISA诊断试剂盒对来自新疆4个地区的435份马血清样品进行检测结果显示,有2份血清检测为阳性,阳性率为1.26%。其中伊犁种马场,昭苏种马场和哈密伊吾县送检血清均为阴性,巴州和静县检出2份阳性血清。目前该病在我国还没有分离到病毒的相关报道,本次流行病学调查研究,对于该病在我国新疆地区的流行现状具有重要的指导意义。

关键词：新疆马病毒性动脉炎血清学调查

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一株高致病性猪繁殖与呼吸综合征疫苗株HuN4-F112N蛋白单克隆抗体不识别其强毒株HuN4-F5与其氨基酸序列无关

一株高致病性猪繁殖与呼吸综合征疫苗株HuN4-F112N蛋白单克隆抗体...

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2013国际猪繁殖与呼吸综合征学术研讨会

作者：王倩安同庆彭金美陈家锃冷超粮孙艳田志军杨汉春中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验/室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 中国农业大学动物医学院农业部动物流行病学与人畜共患病重点实验室北京100193 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验/室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 中国农业大学动物医学院农业部动物流行病学与人畜共患病重点实验室北京100193

2006年,以Nsp2编码区30-aa缺失为特征的高致病性PRRSV (HP-PRRSV)的出现和流行给我国养猪业造成巨大的经济损失.本实验室通过将HP-PRRSV HuN4株在Marc-145细胞上传了112代得到一个致弱毒株HuN4-F112.序列分析显示HuN4-F112与其强毒株HuN...

2006年,以Nsp2编码区30-aa缺失为特征的高致病性PRRSV (HP-PRRSV)的出现和流行给我国养猪业造成巨大的经济损失.本实验室通过将HP-PRRSV HuN4株在Marc-145细胞上传了112代得到一个致弱毒株HuN4-F112.序列分析显示HuN4-F112与其强毒株HuN4-F5之间存在数目不多、散在的氨基酸突变,然而它的生物学特性已经发生了很大的改变.如何找出它们之间的抗原性差异对于研究它致弱的分子机制具有重要意义.

关键词：

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猪圆环病毒2型Cap蛋白保守序列突变可降低其表达量并阻碍Cap与Rep蛋白共定位抑制病毒复制

猪圆环病毒2型Cap蛋白保守序列突变可降低其表达量并阻碍Cap与Rep...

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2013国际猪繁殖与呼吸综合征学术研讨会

作者：黄立平 Nicolaas R.C.Van Renne Dipongkor Saha Jan Van Doorsselaere Uladzimir Karniychuk 刘长明 Hans J.Nauwynck Laboratory of Virology Faculty of Veterinary Medicine Ghent University Merelbeke Belgium 中国农业科学院 Laboratory of Virology Faculty of Veterinary Medicine Ghent University Merelbeke Belgium Department of Health Care and Biotechnology KATHO Catholic University College of South-West Flander 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

背景猪圆环病毒2型(PCV2)是断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的主要病原,该病给养猪业带来巨大的经济损失.PCV2 Cap蛋白上保守序列97RIRKVKV103可能是该病毒的受体结合位点,然而Cap蛋白的结构显示该序列位于病毒粒子的内部,因此该序列...

背景猪圆环病毒2型(PCV2)是断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的主要病原,该病给养猪业带来巨大的经济损失.PCV2 Cap蛋白上保守序列97RIRKVKV103可能是该病毒的受体结合位点,然而Cap蛋白的结构显示该序列位于病毒粒子的内部,因此该序列作为受体结合位点的功能受到质疑.该序列在PCV2毒株之间高度保守,可能具有重要功能.本研究旨在阐明该保守序列在PCV2复制过程中的功能.

关键词：

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多杀性巴氏杆菌aroA基因缺失突变株的构建及鉴定

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微生物学报 2012年第4期52卷 526-531页

作者：郭东春卢艳刘家森原冬伟张爱芹姜骞林欢司昌德曲连东中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室实验动物研究室哈尔滨150001 黑龙江八一农垦大学动物科技学院大庆163319

【目的】构建多杀性巴氏杆菌aroA基因缺失突变株,并验证其致病性。【方法】采用正向筛选同源重组技术构建多杀性巴氏杆菌aroA基因缺失突变株,利用PCR对突变株进行鉴定,分析其遗传稳定性、生长特性和致病性。【结果】成功构建多杀性巴氏... 详细信息

【目的】构建多杀性巴氏杆菌aroA基因缺失突变株,并验证其致病性。【方法】采用正向筛选同源重组技术构建多杀性巴氏杆菌aroA基因缺失突变株,利用PCR对突变株进行鉴定,分析其遗传稳定性、生长特性和致病性。【结果】成功构建多杀性巴氏杆菌aroA基因缺失突变株,连续传代20代,遗传稳定;突变株体外生长曲线表明,在前6h生长速度稍慢于亲本菌,随后两者生长速度一致。对小鼠的致病性试验表明:经腹腔注射aroA基因缺失突变株在1.0×106 CFU对小鼠无致死性,而亲本菌株在1.0×102 CFU对小鼠是致死性的。【结论】本研究获得多杀性巴氏杆菌aroA基因缺失突变株,对小鼠的致病性是减弱的。多杀性巴氏杆菌突变株的构建有助于研究其致病机理。

关键词：多杀性巴氏杆菌 aroA基因基因缺失株毒力

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汉坦病毒L基因的分段克隆及原核表达

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中国预防兽医学报 2012年第2期34卷 143-145页

作者：李茂中刘家森郭东春姜骞林欢曲连东中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/实验动物中心黑龙江哈尔滨150001

为原核表达汉坦病毒(HV)L蛋白,本研究根据HV 76-118株全长L基因序列分段设计合成了6对引物。通过RT-PCR方法分段扩增L基因的6个片段,分别克隆于原核表达载体pET-30a中,并转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达。SDS-PAGE分析表明,获得与预... 详细信息

为原核表达汉坦病毒(HV)L蛋白,本研究根据HV 76-118株全长L基因序列分段设计合成了6对引物。通过RT-PCR方法分段扩增L基因的6个片段,分别克隆于原核表达载体pET-30a中,并转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达。SDS-PAGE分析表明,获得与预期分子量一致的特异的目的蛋白。Western blot检测表明,重组蛋白与小鼠抗His标签单克隆抗体发生特异性反应。

关键词：汉坦病毒 L基因原核表达

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鸽β-防御素5基因克隆及其抗菌活性

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生物工程学报 2012年第11期28卷 1294-1305页

作者：辛胜男张可心张名岳韩宗玺邵昱昊刘晓丽刘胜旺马得莹东北农业大学动物营养研究所黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

从鸽的骨髓和肝组织中扩增到2个禽β-防御素(AvBD)基因,在大肠杆菌中高效表达,检测其重组蛋白的抗菌活性。应用RT-PCR方法从鸽的骨髓和肝脏组织中扩增AvBD5基因,根据已发现的禽β-防御素和部分哺乳类动物β-防御素-5的氨基酸序列构建系... 详细信息

从鸽的骨髓和肝组织中扩增到2个禽β-防御素(AvBD)基因,在大肠杆菌中高效表达,检测其重组蛋白的抗菌活性。应用RT-PCR方法从鸽的骨髓和肝脏组织中扩增AvBD5基因,根据已发现的禽β-防御素和部分哺乳类动物β-防御素-5的氨基酸序列构建系统进化树,将该基因克隆到大肠杆菌原核表达载体pGEX-6p-1上进行原核表达,对该重组蛋白进行纯化,测定体外抗菌活性与理化特性。测序得到这2个基因的cDNA大小均为201 bp,编码66个氨基酸残基,内含6个位置保守的半胱氨酸残基。经遗传进化分析发现,该基因推导的两组氨基酸序列与鸭AvBD5的同源性最高,分别为87.9%和78.8%,这两组氨基酸序列的同源性为83.3%。因此,将其分别命名为鸽AvBD5α(骨髓)和鸽AvBD5β(肝脏)。进一步将这两个基因分别亚克隆到大肠杆菌pGEX-6p-1载体中进行原核表达。两个重组融合蛋白经纯化后,通过菌落计数法测定其体外抗菌活性,盐离子浓度对其抗菌活性的影响,及其融合蛋白的溶血活性。结果表明,重组鸽AvBD 5α、AvBD 5β融合蛋白的分子量约为32 kDa。具有明显的抗菌活性,对12种细菌均有不同程度的抑制作用,高盐浓度对其抗菌活性显著影响。此外,这两个重组蛋白对红细胞无显著溶血活性。

关键词：鸽β-防御素5 重组蛋白抗菌活性

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gga-miR-21过表达细胞株对传染性法氏囊病病毒复制的影响

gga-miR-21过表达细胞株对传染性法氏囊病病毒复制的影响

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中国畜牧兽医学会禽病学分会第三届全国禽病分子生物技术青年学术论坛

作者：欧阳伟朱向东王永山王永强潘群兴毕振威王笑梅江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

用PCR 方法从鸡的肝细胞基因组中扩增细胞pri-gga-miR-21,克隆于慢病毒表达质粒pL-EGFP中构建重组质粒pL-miR-21.将pL-miR-21 和包装质粒共转染293FT 细胞,制备重组慢病毒VL+miR-21.用VL+miR-21感染DF-1 细胞,经杀稻瘟菌素筛选获得了过...

用PCR 方法从鸡的肝细胞基因组中扩增细胞pri-gga-miR-21,克隆于慢病毒表达质粒pL-EGFP中构建重组质粒pL-miR-21.将pL-miR-21 和包装质粒共转染293FT 细胞,制备重组慢病毒VL+miR-21.用VL+miR-21感染DF-1 细胞,经杀稻瘟菌素筛选获得了过表达gga-miR-21 的细胞株DF-miR-21,qRT-PCR 检测表明,gga-miR-21 的表达量比正常DF-1 细胞提高60％.

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白细胞介素18及其在禽类中的研究进展

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中国预防兽医学报 2012年第9期34卷 752-755页

作者：李行韩凌霞 f中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/实验动物中心黑龙江哈尔滨150001

白细胞介素18（Interleukin-18，IL-18）主要由单核-巨噬细胞系分泌，在结构上属于1L-1家族，在功能上与IL-12相似，而且与IL-12有协同效应，是重要的调节先天性免疫和获得性免疫的因子。IL-18除了能够明显诱导Th1、NK及NKT细胞产生IFN... 详细信息

白细胞介素18（Interleukin-18，IL-18）主要由单核-巨噬细胞系分泌，在结构上属于1L-1家族，在功能上与IL-12相似，而且与IL-12有协同效应，是重要的调节先天性免疫和获得性免疫的因子。IL-18除了能够明显诱导Th1、NK及NKT细胞产生IFN-γ外，还可诱导诸如IL-2、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM—CSF）及肿瘤坏死因子（TNF-α）等其它多种细胞因子的产生。禽IL-18具有与人和哺乳动物相似的生物学功能，在抗微生物感染、抗肿瘤免疫等中具有应用潜力。

关键词：白细胞介素18 粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子禽类 IL-12 IL-18 生物学功能肿瘤坏死因子细胞因子

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