检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2012年第1期34卷 68-70页

作者：李行高彩霞蔡文博杨柳武永淑张伟韩凌霞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/实验动物中心黑龙江哈尔滨150001 甘肃农业大学动物科学技术学院兰州甘肃730070 东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030

为分析鸡主要组织相容性复合体(MHC)II类抗原β亚基BLB蛋白在鸡脾脏中的表达情况,本研究采用RT-PCR技术从鸡脾细胞中扩增了BLB基因的保守区第3外显子的部分序列,大小约为380 bp。将其克隆于表达载体pET-30a(+)中。在大肠杆菌BL21(DE3)中... 详细信息

为分析鸡主要组织相容性复合体(MHC)II类抗原β亚基BLB蛋白在鸡脾脏中的表达情况,本研究采用RT-PCR技术从鸡脾细胞中扩增了BLB基因的保守区第3外显子的部分序列,大小约为380 bp。将其克隆于表达载体pET-30a(+)中。在大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达,获得大小约为19 ku以包涵体形式存在的His-BLB重组蛋白。切取含有重组蛋白的SDS-PAGE胶免疫实验兔,获得抗血清。以制备的血清通过western blot在鸡脾脏中检测到MHC II类分子特异性条带,其大小约为28 ku,与BLB天然蛋白的大小相符合。本研究为进一步分析MHC-II类分子在鸡体内的蛋白表达水平提供了依据。

关键词：鸡主要组织相容性复合体 BLB基因兔抗血清蛋白质免疫印迹

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抗马动脉炎病毒N蛋白单克隆抗体的制备

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中国预防兽医学报 2012年第10期34卷 827-829页

作者：赵世华戚亭郭巍李红梅王贵宾刘翠云仇铮田志革王征卢刚潘佳亮相文华中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物研究室黑龙江哈尔滨150001 东北林业大学资源与环境学院黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150001 黑龙江八一农垦大学黑龙江大庆163000

为制备抗马动脉炎病毒(EAV)衣壳蛋白(N)的单克隆抗体(MAb),本研究通过原核表达重组N蛋白,纯化后免疫6周龄雌性BALB/c小鼠,细胞融合后经间接ELISA筛选获得两株能够稳定分泌抗EAV N蛋白的杂交瘤细胞株,MAbs亚型鉴定为IgG1,轻链为κ链。Wes... 详细信息

为制备抗马动脉炎病毒(EAV)衣壳蛋白(N)的单克隆抗体(MAb),本研究通过原核表达重组N蛋白,纯化后免疫6周龄雌性BALB/c小鼠,细胞融合后经间接ELISA筛选获得两株能够稳定分泌抗EAV N蛋白的杂交瘤细胞株,MAbs亚型鉴定为IgG1,轻链为κ链。Western blot结果显示,这两株杂交瘤细胞分泌的MAb均能够识别EAV。EAV N蛋白MAb的制备,为EAV血清学检测方法的建立奠定了基础。

关键词：马动脉炎病毒核衣壳蛋白单克隆抗体

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Vero E6细胞中B23.1基因的扩增及其原核表达

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中国畜牧兽医 2012年第3期39卷 33-36页

作者：吕茂杰陈建飞时洪艳冯力中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 瑞普(保定)生物药业有限公司河北保定071000

应用RT-PCR技术,利用含有酶切位点的上、下游引物扩增得到Vero E6细胞中编码B23.1蛋白的基因片段,并进行序列测定及分析,结果表明,B23.1基因含有一个长901bp的开放阅读框(ORF),未发现碱基的插入和缺失。将其进行BamHⅠ和XhoⅠ双酶切,而... 详细信息

应用RT-PCR技术,利用含有酶切位点的上、下游引物扩增得到Vero E6细胞中编码B23.1蛋白的基因片段,并进行序列测定及分析,结果表明,B23.1基因含有一个长901bp的开放阅读框(ORF),未发现碱基的插入和缺失。将其进行BamHⅠ和XhoⅠ双酶切,而后定向克隆到经相同双酶切的pGEX-6p-1载体中,构建的重组质粒命名为pGEX-6p-B23.1;将该质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3)中,在IPTG诱导下进行表达;SDS-PAGE结果表明,表达出与预期大小相符的约68ku的重组蛋白,重组蛋白主要以包涵体形式存在;Western blotting分析结果表明,表达的重组蛋白与B23蛋白单克隆抗体有很好的反应活性。

关键词： VeroE6细胞 B23.1基因重组蛋白反应活性

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同时检测犬瘟热病毒和犬细小病毒双重PCR方法的建立

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中国预防兽医学报 2012年第3期34卷 211-213页

作者：刘大飞姜一曈杨天阔林欢刘春国柴洪亮王翀崔英玲姜晓飞马旭青刘大程华育平曲连东张洪英中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 东北林业大学野生动物资源学院黑龙江哈尔滨150040 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所北京100091 莱阳市河洛兽医站山东莱阳265200

为建立可以同时检测犬瘟热病毒(CDV)和犬细小病毒(CPV)的双重PCR方法,本研究根据GenBank登录的CDV N蛋白序列和CPV NS基因保守序列,设计合成2对特异性引物。通过优化反应条件,对CDV阳性病毒株反转录后的cDNA模板和CPV的DNA模板进行双重... 详细信息

为建立可以同时检测犬瘟热病毒(CDV)和犬细小病毒(CPV)的双重PCR方法,本研究根据GenBank登录的CDV N蛋白序列和CPV NS基因保守序列,设计合成2对特异性引物。通过优化反应条件,对CDV阳性病毒株反转录后的cDNA模板和CPV的DNA模板进行双重PCR扩增,同时得到2条与试验设计相符的669 bp(CDV)和392 bp(CPV)特异性条带,建立了同时检测CDV和CPV的双重PCR方法。实验结果表明:在同一PCR反应体系中可以同时检测这2种病毒,而对犬腺病毒Ⅰ型、犬腺病毒Ⅱ型、狂犬病毒检测均为阴性;CDV和CPV的最低检出限分别为101.8TCID50和101.4TCID50。采用该方法对在黑龙江省不同地区所采集的30份犬病料样品进行检测,CDV阳性率为30%;CPV阳性率为23.33%,表明建立的PCR方法可以用于临床诊断。

关键词：犬瘟热病毒犬细小病毒聚合酶链式反应

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猪捷申病毒TaqMan实时定量RT-PCR方法的建立

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中国预防兽医学报 2012年第3期34卷 206-210页

作者：胡峰赵亚荣吕超超王贵华崔玉东王春仁崔尚金黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 大北农动物医学研究中心北京100097

为建立猪捷申病毒(PTV)的早期检测及定量分析方法,本研究基于PTV 11个血清型基因组5'端非编码区保守序列,设计引物和TaqMan探针,建立了检测PTV的TaqMan实时定量RT-PCR方法。应用该方法对PTV、猪细小病毒、猪繁殖与呼吸综合症病毒、... 详细信息

为建立猪捷申病毒(PTV)的早期检测及定量分析方法,本研究基于PTV 11个血清型基因组5'端非编码区保守序列,设计引物和TaqMan探针,建立了检测PTV的TaqMan实时定量RT-PCR方法。应用该方法对PTV、猪细小病毒、猪繁殖与呼吸综合症病毒、猪圆环病毒2型、猪伪狂犬病毒以及猪瘟病毒进行特异性试验,结果除PTV为阳性外其它均为阴性;针对PTV最低可检测到10个拷贝;批内、批间重复试验的变异系数均小于3%。应用建立的方法与病毒分离方法分别对91份临床样品进行检测,检出率分别为79.12%和57.14%,两者的符合率是78.02%。经临床应用表明,该实时定量RT-PCR方法可为PTV的早期诊断及定量分析提供技术手段。

关键词：猪捷申病毒实时定量RT-PCR TaqMan

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RNA干扰及其在动物传染病方面的研究概况

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动物医学进展 2012年第6期33卷 130-134页

作者：杨亮宇孙永科杨玉艾王凯王玉娥孔令富云南农业大学动物科学技术学院云南昆明650201 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是一种沉默靶基因活动的过程,可以实现对特定的mR-NA的选择性降解,进而抑制其翻译过程。论文介绍了RNAi的发现、作用机理、作用特点及其在猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征、禽流感、新城疫、狂犬病等动物传染... 详细信息

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是一种沉默靶基因活动的过程,可以实现对特定的mR-NA的选择性降解,进而抑制其翻译过程。论文介绍了RNAi的发现、作用机理、作用特点及其在猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征、禽流感、新城疫、狂犬病等动物传染病方面的研究概况。

关键词： RNAi mRNA siRNA

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表达犬瘟热病毒H基因重组新城疫病毒的构建及其免疫原性研究

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中国预防兽医学报 2012年第4期34卷 257-261页

作者：田美杰葛金英王喜军冯娜马良帅磊苏华高玉伟夏咸柱步志高中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001 军事医学科学院军事兽医研究所吉林长春130062 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030

为研制安全、有效的新型犬瘟热疫苗,本研究利用新城疫病毒(NDV)LaSota弱毒疫苗株反向遗传操作系统,构建出表达犬瘟热病毒(CDV)弱毒疫苗株Rockborn-20/8血凝素(H)蛋白的重组病毒rLa-CDV-H,并对其生物学特性进行鉴定,评估其作为犬瘟热活... 详细信息

为研制安全、有效的新型犬瘟热疫苗,本研究利用新城疫病毒(NDV)LaSota弱毒疫苗株反向遗传操作系统,构建出表达犬瘟热病毒(CDV)弱毒疫苗株Rockborn-20/8血凝素(H)蛋白的重组病毒rLa-CDV-H,并对其生物学特性进行鉴定,评估其作为犬瘟热活载体疫苗的安全性和有效性。通过免疫荧光和western blot试验证明了CDV H蛋白的正确表达;重组病毒株保持了LaSota亲本株的低致病性和高滴度鸡胚生长特性;重组病毒rLa-CDV-H接种12周龄比格犬后,可以诱导显著的CDV中和抗体反应。本研究表明重组病毒rLa-CDV-H具有作为犬瘟热重组病毒活载体疫苗的潜力。

关键词：犬瘟热病毒血凝素蛋白重组新城疫病毒

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副猪嗜血杆菌Plp4蛋白的原核表达及免疫原性分析

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中国预防兽医学报 2012年第5期34卷 415-417页

作者：朱晓凯赵福广李建军胡明明李艳玲张艳禾谢芳王春来中国农业科学院哈尔滨兽医研究所、兽医生物技术国家重点实验室/细菌病研究室黑龙江哈尔滨150001 吉林农业大学生命科学学院吉林长春130118

为原核表达副猪嗜血杆菌Plp4蛋白,本研究通过PCR方法扩增Plp4全长基因并克隆于pET-28a(+)载体中,将重组质粒转化BL21(DE3)感受态中,采用0.4 mM IPTG经22℃诱导表达了35 ku的重组蛋白。经western blot试验证明Plp4蛋白具有良好的反应原性... 详细信息

为原核表达副猪嗜血杆菌Plp4蛋白,本研究通过PCR方法扩增Plp4全长基因并克隆于pET-28a(+)载体中,将重组质粒转化BL21(DE3)感受态中,采用0.4 mM IPTG经22℃诱导表达了35 ku的重组蛋白。经western blot试验证明Plp4蛋白具有良好的反应原性,免疫6周龄昆明小鼠制备免疫血清,ELISA检测表明制备的抗血清效价在1∶15 000以上,表明Plp4蛋白具有良好的免疫原性。

关键词：副猪嗜血杆菌表达 Plp4基因免疫原性

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抗蓝舌病病毒VP6和VP7蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

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中国预防兽医学报 2012年第5期34卷 412-414页

作者：魏鹏孙恩成刘霓红杨涛徐青元秦永丽赵晶冯瑜菲王文世张翠云吴东来中国农业科学院哈尔滨兽医研究所、兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 湖南农业大学动物医学学院湖南长沙410128

为制备针对蓝舌病病毒(BTV)的单克隆抗体(MAb),本研究利用血清型1型BTV(BTV1)免疫BALB/c鼠,将其脾淋巴细胞与SP2/0进行融合,并用BTV1包被ELISA板,通过间接ELISA方法筛选出3株稳定分泌抗BTV1的MAb的杂交瘤细胞株(2B10、3D4和4H8)。利用表... 详细信息

为制备针对蓝舌病病毒(BTV)的单克隆抗体(MAb),本研究利用血清型1型BTV(BTV1)免疫BALB/c鼠,将其脾淋巴细胞与SP2/0进行融合,并用BTV1包被ELISA板,通过间接ELISA方法筛选出3株稳定分泌抗BTV1的MAb的杂交瘤细胞株(2B10、3D4和4H8)。利用表达BTV1主要蛋白的真核表达重组质粒转染BHK-21后,对所制备的杂交瘤细胞株上清进行间接免疫荧光(IFA)以及western blot鉴定,结果显示:2B10和4H8与VP7蛋白反应,而3D4与VP6蛋白反应。同时,IFA鉴定结果进一步表明,3株MAb与24个血清型的BTV均可以发生反应。本研究制备的MAb为建立BTV免疫学检测方法和相关病毒蛋白的功能研究奠定了基础。

关键词：蓝舌病病毒单克隆抗体 VP6蛋白 VP7蛋白

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蓝舌病病毒重组VP7蛋白单克隆抗体制备及竞争ELISA检测方法的建立

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中国预防兽医学报 2012年第5期34卷 388-392页

作者：耿宏伟秦永丽李俊平杨涛孙恩成刘霓红白安斌徐青元王凌凤赵晶覃绍敏林俊郭怡璠吴东来东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001 黑龙江省农业科学院黑龙江哈尔滨150086 广西兽医研究所广西南宁530001 广西大学广西南宁530004

为了建立蓝舌病(BT)的血清学诊断方法,本研究利用原核表达的蓝舌病病毒(BTV)血清型12型VP7纯化蛋白免疫BALB/c小鼠,制备2株单克隆抗体(MAb),分别命名为BTV-2D10和BTV-4H7。IFA试验表明,2株MAb均能与BTV 24个血清型发生特异性反应,而与... 详细信息

为了建立蓝舌病(BT)的血清学诊断方法,本研究利用原核表达的蓝舌病病毒(BTV)血清型12型VP7纯化蛋白免疫BALB/c小鼠,制备2株单克隆抗体(MAb),分别命名为BTV-2D10和BTV-4H7。IFA试验表明,2株MAb均能与BTV 24个血清型发生特异性反应,而与茨城病病毒(IBAV)、中山病病毒(CV)、赤羽病病毒(AKAV)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)、牛轮状病毒(BRV)、牛肠道病毒(BEV)、牛呼肠孤病毒(RV)及口蹄疫病毒(FMDV)无交叉反应,表明2株MAb均为BTV群特异性抗体。采用重组表达的VP7蛋白作为包被抗原建立的竞争ELISA方法证明,BTV-4H7 MAb对不同血清型BTV阳性血清具有良好的阻断效果,而对AKAV、IBAV、BRV和FMDV阳性血清无阻断作用。本研究建立的竞争ELISA方法与IDEXX公司的试剂盒检测包括65份已知背景血清和322份采自广西省的山羊血清样品,检测结果符合率分别达100%和98%。该竞争ELISA方法的建立为BTV抗体的监测提供了安全、快速、准确的技术手段。

关键词：蓝舌病病毒重组VP7蛋白群特异性单克隆抗体竞争ELISA

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