检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2012年第11期34卷 847-853页

作者：欧阳伟朱向东王永山王永强潘群兴毕振威王笑梅江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

为研究microRNA(gga-miR-21)对传染性法氏囊病病毒(IBDV)复制的影响,本研究利用PCR方法从鸡的肝细胞基因组中扩增细胞pri-gga-miR-21,克隆于慢病毒表达质粒pL-EGFP中构建重组质粒pL-miR-21。将pL-miR-21与3个包装质粒pLP1、pLP2和pLP/VSVG共转染293FT细胞,制备含gga-miR-21基因的重组慢病毒VL+miR-21。将VL+miR-21感染DF-1细胞,经杀稻瘟菌素筛选获得过表达gga-miR-21的细胞株DF-miR-21,采用定量RT-PCR(qRT-PCR)检测表明,gga-miR-21的表达量比正常DF-1细胞提高60%。将IBDV接种于DF-miR-21细胞,在96 h后,其病毒滴度(104.75TCID50/0.1 mL)显著低于正常DF-1细胞的病毒滴度(108.75TCID50/0.1 mL)。采用生物信息学方法和双荧光素酶报告系统分析验证,在IBDV基因组VP1基因中存在gga-miR-21的结合靶点。将IBDV感染DF-miR-21细胞,采用western blot分析,VP1蛋白的表达量比正常DF-1细胞显著降低;用qRT-PCR分析,VP1 mRNA水平与正常DF-1细胞没有明显差异。本实验结果表明:细胞gga-miR-21可以抑制IBDV的复制,其分子作用机理是在VP1基因翻译水平上实现的。

关键词：传染性法氏囊病病毒 miRNA gga-miR-21 慢病毒表达系统病毒复制

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传染性法氏囊病病毒感染细胞内源性microRNA表达差异分析

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中国兽医学报 2012年第3期32卷 329-336页

作者：欧阳伟王永山王永强王笑梅朱向东毕振威范红结江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 南京农业大学动物医学院江苏南京210095

细胞内源性microRNA(miRNA)在宿主与病原相互作用过程中发挥着重要的调节功能。为了分析细胞内源性miRNA与传染性法氏囊病病毒(IBDV)的相互作用,用IBDV弱毒和强毒分别感染鸡胚成纤维细胞(CEF)和SPF鸡,24h后,取感染CEF和法氏囊组织,提取... 详细信息

细胞内源性microRNA(miRNA)在宿主与病原相互作用过程中发挥着重要的调节功能。为了分析细胞内源性miRNA与传染性法氏囊病病毒(IBDV)的相互作用,用IBDV弱毒和强毒分别感染鸡胚成纤维细胞(CEF)和SPF鸡,24h后,取感染CEF和法氏囊组织,提取细胞总RNA,用Hy3/Hy5双色荧光标记,与miRNA芯片杂交,进行芯片内标准化、芯片间标准化、表达差异比较以及聚类分析。结果显示:在IBDV弱毒感染的CEF中,有17个细胞内源性miRNA表达上调,17个miRNA表达下调;在IBDV强毒感染的鸡法氏囊组织细胞中,有30个细胞内源性miRNA表达上调,18个miRNA表达下调。根据表达差异显著的miRNA序列设计引物,用荧光定量RT-PCR方法验证芯片检测结果,2种方法的检测结果一致。结果表明,IBDV感染可诱导细胞内源性miRNA表达变化,这些上调或下调的miRNA能调控细胞内多种代谢和信号传导途径发生异常,引起细胞及组织器官发生病理学变化。

关键词：传染性法氏囊病病毒(IBDV) microRNA(miRNA) 基因芯片荧光定量PCR

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兔抗猪CD163蛋白多克隆抗体制备及鉴定

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中国兽医学报 2012年第11期32卷 1624-1628页

作者：郭娟娟彭金美安同庆冷超良吴江宫大庆陈家锃杨永倩田志军张德礼西北农林科技大学、动物医学院病毒免疫与生物信息研究室、生物信息研究中心、分子病毒免疫与肿瘤系统生物学研究组陕西杨凌712100 中国农业科学院、哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室、猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

为制备兔抗猪CD163多克隆抗体,采用RT-PCR方法从猪PAM RNA中扩增CD163胞质外区部分基因SRCR4-5,克隆至pGEX-6p-1原核表达载体,在IPTG诱导下获得约50 000以包涵体形式表达的重组蛋白。WesternBlotting分析表明,表达产物能够被GST单抗所... 详细信息

为制备兔抗猪CD163多克隆抗体,采用RT-PCR方法从猪PAM RNA中扩增CD163胞质外区部分基因SRCR4-5,克隆至pGEX-6p-1原核表达载体,在IPTG诱导下获得约50 000以包涵体形式表达的重组蛋白。WesternBlotting分析表明,表达产物能够被GST单抗所识别。用该重组蛋白免疫兔制备多抗血清,经间接ELISA检测,多抗血清效价可达105,流式检测发现可与Marc-145和PAM上的天然CD163分子相互作用。抗体阻断试验证明制备的多抗血清可以部分阻断PRRSV感染。本试验为进一步研究PRRSV与受体-CD163相互作用机制打下了基础。

关键词： CD163 抗体鉴定

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感染兔出血症病毒兔肝组织蛋白表达差异研究

感染兔出血症病毒兔肝组织蛋白表达差异研究

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第九次学术研讨会

作者：李茂中刘家森王泽祥孙宏勇郭东春姜骞林欢曲连东中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／实验动物研究室，黑龙江哈尔滨 150001

提取感染组和对照组的兔肝脏总蛋白，采用双向凝胶电泳技术比较分析差异表达蛋白;经MALDI-TOF-TOF质谱分析，搜索蛋白质数据库，获得差异蛋白质的信息。经过初步筛选和质谱分析，共获得60个具有统计学意义的表达差异蛋白点，其中19个在... 详细信息

提取感染组和对照组的兔肝脏总蛋白，采用双向凝胶电泳技术比较分析差异表达蛋白;经MALDI-TOF-TOF质谱分析，搜索蛋白质数据库，获得差异蛋白质的信息。经过初步筛选和质谱分析，共获得60个具有统计学意义的表达差异蛋白点，其中19个在感染中表达上调，41个表达下调。通过比较人工感染兔出血热病毒(RHDV)组和对照组兔肝脏整体蛋白表达谱，筛选出了5种可能在病毒整个感染过程中起作用的差异蛋白。

关键词：兔出血症病毒肝组织蛋白表达双向凝胶电泳

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猪圆环病毒疫苗的研究进展

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兽医导刊 2012年第2期 55-56页

作者：刘长明陆月华郭龙军危艳武中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

猪圆环病毒2型（PCV2）主要引起以患猪全身性淋巴结肿大为特征的多系统功能衰竭性疾病，临床上表现为断奶仔猪多系统衰竭综合征、猪皮炎与肾炎综合征、猪呼吸道疾病综合征、母猪繁殖障碍、坏死性淋巴结炎、肉芽肿性肠炎和渗出性表皮炎... 详细信息

猪圆环病毒2型（PCV2）主要引起以患猪全身性淋巴结肿大为特征的多系统功能衰竭性疾病，临床上表现为断奶仔猪多系统衰竭综合征、猪皮炎与肾炎综合征、猪呼吸道疾病综合征、母猪繁殖障碍、坏死性淋巴结炎、肉芽肿性肠炎和渗出性表皮炎等，统称为猪圆环病毒病。

关键词：猪圆环病毒2型断奶仔猪多系统衰竭综合征病毒疫苗猪呼吸道疾病综合征淋巴结肿大母猪繁殖障碍猪圆环病毒病猪皮炎

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蓝舌病病毒VP5蛋白的原核表达及其抗原性分析

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中国预防兽医学报 2012年第8期34卷 607-610页

作者：赵大维朱彦青陈伟业胡倩倩殷倩倩黄克和步志高南京农业大学动物医学学院江苏南京210095 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001 南京农业大学公共管理学院江苏南京210095

为表达蓝舌病病毒(BTV)VP5蛋白并检测其生物学活性,本实验采用RT-PCR方法扩增血清12型BTV的VP5基因,构建重组质粒pMAL-VP5。将重组质粒转化TB1感受态细胞,以0.4 mmol/L的IPTG进行诱导表达,SDS-PAGE电泳结果显示,融合了大肠杆菌麦芽糖结... 详细信息

为表达蓝舌病病毒(BTV)VP5蛋白并检测其生物学活性,本实验采用RT-PCR方法扩增血清12型BTV的VP5基因,构建重组质粒pMAL-VP5。将重组质粒转化TB1感受态细胞,以0.4 mmol/L的IPTG进行诱导表达,SDS-PAGE电泳结果显示,融合了大肠杆菌麦芽糖结合蛋白(MBP)标签的VP5重组蛋白以可溶形式表达,分子质量约为112.2 ku。利用MBP标签对重组蛋白进行纯化,并以其作为包被抗原,间接ELISA检测山羊血清样品,结果 5份羊血清P/N值均大于1,其中有1只羊检测结果 P/N值为2.396,鉴定为阳性血清,表明重组蛋白可以与VP5抗体反应,可以作为检测BTV VP5抗体的抗原,为今后进一步开展BT诊断研究奠定了基础。

关键词：蓝舌病病毒 VP5基因原核表达间接ELISA

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新疆地区马鼻肺炎血清学调查

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中国畜牧兽医文摘 2013年第12期29卷 82-82页

作者：阿依吐拉·肉孜阿孜古丽肖开提马伟田志革林汉亮新疆动物卫生监督所新疆乌鲁木齐830052 新疆昌吉州奇台县动物疾病控制中心新疆昌吉831800 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

本文应用ELISA方法对新疆地区6个县市的马进行鼻肺炎血清学调查,共采集血清1 484份;结果显示,6个县市均查出马鼻肺炎感染阳性马,最低感染率仅为1.99%,最高感染率达51.69%,新疆西部地区疫情较为严重。本研究结果为新疆地区马鼻肺炎的防... 详细信息

本文应用ELISA方法对新疆地区6个县市的马进行鼻肺炎血清学调查,共采集血清1 484份;结果显示,6个县市均查出马鼻肺炎感染阳性马,最低感染率仅为1.99%,最高感染率达51.69%,新疆西部地区疫情较为严重。本研究结果为新疆地区马鼻肺炎的防治提供了可参考数据。

关键词：马鼻肺炎流行病学调查防治

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结核分枝杆菌rv3036c基因的原核表达及其多克隆抗体的制备

结核分枝杆菌rv3036c基因的原核表达及其多克隆抗体的制备

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第九次学术研讨会

作者：陈利苹曹俊刘银冰鄢秋龙刘思国中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／动物细菌病研究室，黑龙江哈尔滨 150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／动物细菌病研究室，黑龙江哈尔滨 150001 黑龙江八一农垦大学，黑龙江大庆 163319

本研究以结核分枝杆菌强毒株H37Rv基因组DNA为模板，扩增rv3036c基因，将此基因片段连接于表达载体pET-28a(+)，获得重组质粒pET-28a-ru3036c，并将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中，经1 mmol／L IPTG诱导表达组氨酸标签融合蛋白R_v3... 详细信息

本研究以结核分枝杆菌强毒株H37Rv基因组DNA为模板，扩增rv3036c基因，将此基因片段连接于表达载体pET-28a(+)，获得重组质粒pET-28a-ru3036c，并将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中，经1 mmol／L IPTG诱导表达组氨酸标签融合蛋白R_v3036c，用Ni-NTAHis口Bind Resin纯化目的蛋白，经westem-b10t验证了蛋白的纯化结果。Rv3036c蛋白纯化产物免疫新西兰大白兔，制备多克隆抗体。并通过间接EuSA方法检测抗体效价。结果显示，重组质粒双酶切鉴定和DNA序列测定均完全正确;sDS-PAGE和westem_blot分析结果显示，pET-28a-Rv3036c VT,可溶形式表达，蛋白分子量大小为28ku，且具有很好的免疫原性。以上结果为进一步研究rv3036c基因在结核分枝杆菌致病性中的作用奠定了很好的基础。

关键词：结核分枝杆菌原核表达多克隆抗体蛋白纯化

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多重耐药基因cfr在动物源细菌中的流行病学及传播机制研究

多重耐药基因cfr在动物源细菌中的流行病学及传播机制研究

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第九次学术研讨会

作者：张万江王秀梅张荣民刘思国中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／细菌病研究室，黑龙江哈尔滨 150001

cfr首次在2000年由德国联邦农业研究中心，动物育种研究所分子微生物和诊断室的Stefan Schwarz教授从患有呼吸道疾病的小牛鼻腔中分离到的松鼠葡萄球菌中发现。本文介绍了cfr基因的作用机制、流行情况、传播机制。

关键词：动物源细菌多重耐药基因流行病学传播机制

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猪胸膜肺炎放线杆菌ClpP蛋白酶基因缺失株的构建及其生物学活性

猪胸膜肺炎放线杆菌ClpP蛋白酶基因缺失株的构建及其生物学活性

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纪念中国微生物学会成立六十周年大会暨2012年中国微生物学会学术年会

作者：谢芳周泷张艳禾李刚王春来中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/细菌病研究室黑龙江哈尔滨 150001

本研究构建clpP基因缺失的胸膜肺炎放线杆菌突变株，采用结晶紫染色法和荧光显微镜观察比较c1pP基因缺失株和APP亲本株的生物被膜形成能力。结果成功筛选获得一株c1pP基因缺失的胸膜肺炎放线杆菌突变株，通过对突变株生物学特性进行初... 详细信息

本研究构建clpP基因缺失的胸膜肺炎放线杆菌突变株，采用结晶紫染色法和荧光显微镜观察比较c1pP基因缺失株和APP亲本株的生物被膜形成能力。结果成功筛选获得一株c1pP基因缺失的胸膜肺炎放线杆菌突变株，通过对突变株生物学特性进行初步研究，结果表明突变株与亲本株相比，在25℃和37℃条件下培养生长能力未受影响，在42℃条件下培养生长能力略有下降，在添加有1mM H2O2和0.5M KC1的培养条件下也表现出下降的生长能力;结晶紫染色法和荧光显微镜观察结果显示，clpf，基因缺失株与亲本株相比，其生物被膜形成能力显著下降。该突变株构建体系的建立为胸膜肺炎放线杆菌新毒力基因的功能研究及猪传染性胸膜肺炎弱毒活疫苗的开发奠定了良好基础。

关键词：猪胸膜肺炎放线杆菌 ClpP蛋白酶基因缺失生物学活性

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