检索结果-内蒙古大学图书馆

中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第九次学术研讨会

作者：于申业彭玮司微尹录刘思国王春来常月红中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室，黑龙江哈尔滨 150001

菌蜕是通过调控PhiXl74噬菌体裂解基因E的表达而形成的，其为灭活疫苗的研究提供了新的途径。本文利用基因重排技术，构建了PhiXl74噬菌体裂解基因E的基因重排文库。通过与原核非融合表达载体DBV220进行重组，筛选到两个溶菌质粒。其中... 详细信息

菌蜕是通过调控PhiXl74噬菌体裂解基因E的表达而形成的，其为灭活疫苗的研究提供了新的途径。本文利用基因重排技术，构建了PhiXl74噬菌体裂解基因E的基因重排文库。通过与原核非融合表达载体DBV220进行重组，筛选到两个溶菌质粒。其中一个含有新奇的E基因突变体(命名为mE)，由5`端74-bp非编码序列和201bp的△E基因组成，能明显提高对大肠杆菌和沙门氏菌的溶菌效率。而且，溶菌细菌的OD600值最高可达到1.0(109cfu)，解决了菌蜕研究和生产中菌液浓度低和菌蜕数量少等技术瓶颈问题。本结果对于加快菌蜕疫苗的研制具有重要的意义。

关键词：革兰氏阴性菌菌蜕疫苗裂解基因基因重排突变体溶菌效率

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猪胸膜肺炎放线杆菌ClpP蛋白酶基因缺失株的构建及其生物学活性

猪胸膜肺炎放线杆菌ClpP蛋白酶基因缺失株的构建及其生物学活性

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2012年全国病原微生物学术会议

作者：谢芳周泷张艳禾李刚王春来中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/细菌病研究室黑龙江哈尔滨150001

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高致病性PRRSV NSP7不同佐剂亚单位疫苗的免疫保护效果比较

高致病性PRRSV NSP7不同佐剂亚单位疫苗的免疫保护效果比较

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第九次学术研讨会

作者：王刚王延群蔡雪辉刘永刚刘鹤李玉明武嘉男何玉利韩梓峰汪志艳中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／动物疫病诊断中心，黑龙江哈尔滨 150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／动物疫病诊断中心，黑龙江哈尔滨 150001 东北农业大学，黑龙江哈尔滨 150001

为研究PRRSV NSP7蛋白的免疫保护作用，本实验以NSP7为免疫原，配合MONTANIDE ISA 206VG佐剂、603纳米佐剂或MONTANODE ISA 206 VG／CpG ODN佐剂制备成3种亚单位疫苗免疫断奶仔猪，观察实验猪群抗HP—PRRSV感染的效果。实验结果显示：60... 详细信息

为研究PRRSV NSP7蛋白的免疫保护作用，本实验以NSP7为免疫原，配合MONTANIDE ISA 206VG佐剂、603纳米佐剂或MONTANODE ISA 206 VG／CpG ODN佐剂制备成3种亚单位疫苗免疫断奶仔猪，观察实验猪群抗HP—PRRSV感染的效果。实验结果显示：603纳米佐剂组感染***后，整个实验过程成活率为100％;攻毒后恢复至正常体温的时间较其他实验组提前2 d～3 d;胸腺未见萎缩，肺脏未见肉眼可见的间质性肺炎病变;攻毒时血清TNF-α、IL-1β、IL-2、IL-6的水平明显高于其它实验组。以上结果表明：在PI汛sv亚单位疫苗的制备中，佐剂的选择是必须考虑的因素之一;在抗***感染的过程中，细胞免疫作用不容忽视，具体作用还需进一步研究。

关键词：高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒非结构蛋白免疫保护亚单位疫苗

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猪圆环病毒(PCV)2a/2b亚型毒株病毒灭活疫苗及其重组Cap蛋白亚单位疫苗的交互免疫试验

猪圆环病毒(PCV)2a/2b亚型毒株病毒灭活疫苗及其重组Cap蛋白亚单...

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第九次学术研讨会

作者：付玉洁郭龙军黄立平危艳武唐青海吴洪丽刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／猪传染病研究室，黑龙江哈尔滨 150001

为评价猪圆环病毒(PcV)2a／2b两种基因型毒株及其重组cap蛋白(rCap)之间的交互免疫效果，本研究采用PCV2a-LG和PCv2b-YJ株制备了2种病毒灭活疫苗，及其重组杆状病毒表达的2种C印蛋白(PCv2a-rap和PCv2b-rap)亚单位疫苗。选用8周龄BALB／c... 详细信息

为评价猪圆环病毒(PcV)2a／2b两种基因型毒株及其重组cap蛋白(rCap)之间的交互免疫效果，本研究采用PCV2a-LG和PCv2b-YJ株制备了2种病毒灭活疫苗，及其重组杆状病毒表达的2种C印蛋白(PCv2a-rap和PCv2b-rap)亚单位疫苗。选用8周龄BALB／c鼠165只，随机分成11组，每组15只，用上述4种疫苗各免疫2组，以Pcv2a或Pcv2b毒株攻毒。攻毒后，所有鼠均未见肉眼可见的临床症状和病理变化。采用IPMA法检测抗体，4种疫苗于免疫第3周抗体转阳，第5周抗体效价达到1：200～1：800倍，其中Pcv2a-rCap免疫组抗体效价最高。2种灭活苗和Pcv2a-rCap免疫组攻击同型或异型毒株均可获得完全保护。以Pcv2a和Pcv2b各为指示毒对病毒抗血清和r(=印蛋白抗血清进行交叉中和试验，同型毒株与同型血清的中和抗体效价均高于异型毒株。病理观察显示，免疫鼠均未见明显病理变化，攻毒对照鼠肺脏出现一定程度的病理损伤。本研究表明，病毒灭活疫苗及其rap亚单位疫苗对PcV2a和PcV2b可提供交叉保护。

关键词：猪圆环病毒病毒灭活疫苗重组Cap蛋白交互免疫

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猪瘟病毒E2蛋白和猪RACK1相互作用的鉴定

猪瘟病毒E2蛋白和猪RACK1相互作用的鉴定

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第九次学术研讨会

作者：凌理军仇华吉李素董泓贺番冯烁廖亚金申梁孙元翁长江中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室，黑龙江哈尔滨 150001

为筛选和鉴定与猪瘟病毒(csFv)E2蛋白相互作用的猪宿主蛋白，采用酵母双杂交方法筛选猪肺泡巨噬细胞表达文库得到与猪瘟病毒csFV E2蛋白相互作用的宿主细胞RAcKl蛋白，经共转化试验和GsTpull-down试验进一步证实两者可以特异性结合，且... 详细信息

为筛选和鉴定与猪瘟病毒(csFv)E2蛋白相互作用的猪宿主蛋白，采用酵母双杂交方法筛选猪肺泡巨噬细胞表达文库得到与猪瘟病毒csFV E2蛋白相互作用的宿主细胞RAcKl蛋白，经共转化试验和GsTpull-down试验进一步证实两者可以特异性结合，且共聚焦试验表明两者共定位于细胞的细胞浆。本研究证实E2蛋白与宿主细胞RACK1蛋白存在相互作用，RACK1在CSFV感染过程中所发挥的功能有待进一步研究。

关键词：猪瘟病毒E2蛋白猪宿主蛋白酵母双杂交猪巨噬细胞表达文库

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副结核分枝杆菌MAP1588C蛋白的原核表达与抗原性分析

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中国动物传染病学报 2012年第6期20卷 36-39页

作者：刘银冰陈利苹鄢秋龙曹俊刘思国黑龙江八一农垦大学动物科技学院大庆163319 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室哈尔滨150001

从副结核分支杆菌K-10菌株基因组中扩增出516 bp的MAP1588C基因片段,插入原核表达载体pET-28b(+),转化至大肠杆菌BL21(DE3),在0.5 mmol/L的IPTG诱导下进行表达;利用融合蛋白的组氨酸标签进行亲和层析纯化重组蛋白;通过抗6 His标签抗体的... 详细信息

从副结核分支杆菌K-10菌株基因组中扩增出516 bp的MAP1588C基因片段,插入原核表达载体pET-28b(+),转化至大肠杆菌BL21(DE3),在0.5 mmol/L的IPTG诱导下进行表达;利用融合蛋白的组氨酸标签进行亲和层析纯化重组蛋白;通过抗6 His标签抗体的Western blot验证了纯化蛋白产物;另外,副结核阳性牛血清可检测到该蛋白条带。结果表明,表达的重组蛋白MAP1588C的蛋白分子量为21 kDa,具有良好抗原性,有望将此抗原用于建立副结核的ELISA诊断方法。

关键词：副结核分支杆菌 MAP1588C蛋白重组表达免疫性

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抗猪输血传播病毒1型(PTTV1)Cap蛋白单克隆抗体制备及鉴定

抗猪输血传播病毒1型(PTTV1)Cap蛋白单克隆抗体制备及鉴定

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第九次学术研讨会

作者：张龙刘建波黄立平郭龙军危艳武唐青海吴洪丽刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／猪传染病研究室，黑龙江哈尔滨 150001

为表达猪输血传播病毒1型(PTTV1)cap蛋白用于单克隆抗体(MAb)的制备，以含PTTV1全长基因组的质粒(pMD18-TTV1-SY13)为模板，用高保真PCR法扩增PTTV1-ORF1(1501～2475 nt)编码的Cap蛋白C末端截短序列(324 aa)，引物两端设计了salI和Not ... 详细信息

为表达猪输血传播病毒1型(PTTV1)cap蛋白用于单克隆抗体(MAb)的制备，以含PTTV1全长基因组的质粒(pMD18-TTV1-SY13)为模板，用高保真PCR法扩增PTTV1-ORF1(1501～2475 nt)编码的Cap蛋白C末端截短序列(324 aa)，引物两端设计了salI和Not I酶切位点，将PcR产物克隆到pGEx-6P-1载体，构建的重组质粒命名为pGEx-TTV1-ORF1-c1。将重组质粒转化大肠杆菌Rosetta(DE3)菌株后进行诱导表达，获得了含GST标签的PTTv1-rCap重组融合蛋白，经SDS-AGE电泳分析和western blOt鉴定，目的蛋白获得了高效表达，分子量约为64．0kDa，以包涵体形式存在。用纯化的重组蛋白免疫Balb／c小鼠，采用淋巴细胞杂交瘤技术获得了8株稳定分泌抗PTTv1rCap蛋白的杂交瘤细胞株，依次命名为1H4、1E9、1E11、4G12、5c5、788、8c2、8G2，MAb亚类鉴定均为IgG1，轻链为K型;MAb培养上清效价为400～3200倍，腹水为4．0×105～6．4×1 06倍;有7株单抗与PTTVl=Cap蛋白产生特异性反应，另1株MAb(1E11)呈阴性，可能针对构象表位。为验证8株单抗与真核表达的cap蛋白的免疫反应性，将全长与截短的PTTV1-0RF-基因片段克隆到pcDNA3-1/V5-His TOPO表达载体，转染293T细胞进行蛋白表达，采用免疫过氧化物酶单层细胞染色法(IPMA)检测表明，这8株MAb均能够与表达的c印蛋白产生特异性反应。本研究表达的PTTV1-Cap蛋白及制备的MAb，为该病毒诊断方法的建立及抗原表位的鉴定奠定了基础。

关键词：猪输血传播病毒重组cap蛋白单克隆抗体抗性鉴定

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禽白血病病毒双抗体夹心ELISA方法的建立

禽白血病病毒双抗体夹心ELISA方法的建立

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第九次学术研讨会

作者：负炳岭高玉龙王笑梅刘文李德龙秦立廷刘在斯吴关祁小乐王永强高宏雷中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／禽传染病研究室，黑龙江哈尔滨 150001

为建立一种快速有效的检测禽白血病病毒的方法，以原核表达的HB09JY03(ALV-J)p27蛋白制备的单克隆抗体作为包被抗体，p27蛋白制备的多克隆抗体作为检测抗体建立了检测ALV的双抗体夹心EusA(DAs-ELISA)方法。该方法对p27的最小检出量为1.2... 详细信息

为建立一种快速有效的检测禽白血病病毒的方法，以原核表达的HB09JY03(ALV-J)p27蛋白制备的单克隆抗体作为包被抗体，p27蛋白制备的多克隆抗体作为检测抗体建立了检测ALV的双抗体夹心EusA(DAs-ELISA)方法。该方法对p27的最小检出量为1.25ng/ML，且与禽类常见的病毒(IBV，MDV，ILTV等)无交叉反应。动物感染实验结果表明该方法可在感染动物12d后有效检测泄殖腔分泌物中的ALV。利用该方法检测了491份蛋清样品和180份肛拭子样品，与PCR方法符合率分别为96.5％和93.8％。结果表明，该方法具有方便、快速、敏感等优点，该方法的建立为ALV的早期诊断及种鸡场的净化提供了有效工具。

关键词：禽白血病病毒单克隆抗体多克隆抗体双抗体夹心酶联免疫吸附测定

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表达V5表位的重组猪圆环病毒2型毒株及其生物学特性鉴定

表达V5表位的重组猪圆环病毒2型毒株及其生物学特性鉴定

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第九次学术研讨会

作者：黄立平陆月华危艳武郭龙军吴洪丽张飞雁付玉洁刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／猪传染病研究室，黑龙江哈尔滨 150001

为了探讨猪圆环病毒2型(PCV2)作为表达外源表位的可行性，本研究构建了以PCV2基因组为骨架。在ORF2编码Cap蛋白的C末端插入了源自副流感病毒5型的一个含14氨基酸序列的V5表位标签，用构建感染性分子克隆重组质粒转染细胞，拯救出一株表... 详细信息

为了探讨猪圆环病毒2型(PCV2)作为表达外源表位的可行性，本研究构建了以PCV2基因组为骨架。在ORF2编码Cap蛋白的C末端插入了源自副流感病毒5型的一个含14氨基酸序列的V5表位标签，用构建感染性分子克隆重组质粒转染细胞，拯救出一株表达V5表位标签的重组毒株，命名为recPCV2／CL—V5。采用免疫过氧化物酶单层试验(IPMA)、血清中和试验(SNA)、捕获ELISA及免疫电镜对重组毒株进行了鉴定。结果表明：在recPCV2／CL-V5株感染细胞中检出PCV2和V5表位抗原;PCV2阳性血清和中和性单克隆抗体(1D2)能够完全中和recPCV2／CL-V5株的细胞感染性;recPCV2／CL．V5株在繁殖动力学和形态学上与亲本病毒基本一致。鉴于recPCV2／CL-V5株插入了一个v5表位，采用PCR、IPMA和捕获ELISA与亲本毒株相鉴别。recPCV2／CL-V5株经细胞连续传10代，体外培养增殖性能稳定，毒价可达106.25TCID50、mL。拯救的带有V5表位标签的重组PCV2毒株，为深入研究该病毒复制理、抗原表位展示及分子标记疫苗和鉴别诊断等开创了新的平台。

关键词：猪圆环病毒2型表位生物学特性鉴别诊断

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高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒HBR株不同代次水平的毒力比较试验

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒HBR株不同代次水平的毒力比较试验

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第九次学术研讨会

作者：危艳武范培虎郭龙军吴洪丽刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／猪传染病研究室，黑龙江哈尔滨 150001

为了阐明高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)HBR毒株在体外传代过程中发生的毒力及遗传变异情况，本试验采用第5代、10代和125代PRRSV-HBR株病毒进行了人工感染试验。结果表明，低代次(第5和10代)病毒接种组可复制出以“高热综合征... 详细信息

为了阐明高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)HBR毒株在体外传代过程中发生的毒力及遗传变异情况，本试验采用第5代、10代和125代PRRSV-HBR株病毒进行了人工感染试验。结果表明，低代次(第5和10代)病毒接种组可复制出以“高热综合征”为特点的症候群，第5代毒株感染组死亡率达40％(2／5)，第10代感染组症状明显减轻且无死亡，第125代毒株感染组基本无临床症状。这3个代次的毒株感染组于第3 d检测病毒血症呈阳性，第7～14 d到达高峰，第125代于21 d消失，较第5和10代毒株提前1 w。病毒感染后抗原检测主要分布于脾脏、扁桃体、淋巴结等组织，第5和10代毒株感染组脏器出现严重的病理损伤，第125代毒株感染组仅见轻微病理损伤。对3个代次毒株的ORF5、ORF6和ORF7测序显示，仅在ORF5出现了3个氨基酸位点突变，第29位：第5、10代为缬氨酸一第125代为丙氨酸;第32位：第5、125代为丝氨酸，第10代为甘氨酸;第196位：第5、10代为谷氨酰胺→第125代为精氨酸。研究表明，低代次毒株能够完全复制出典型的“猪高热综合征”，而高代次毒株无明显临床症状，证明该毒株经细胞传代后毒力下降。鉴于高代次毒株感染动物仍能够引起毒血症和持续感染，表明其仍具一定毒力，作为疫苗种毒需要进一步毒力弱化。

关键词：高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒变异毒株代次水平毒力分析

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