检索结果-内蒙古大学图书馆

2005年-2010年我国部分地区PRRSV流行毒株的遗传变异分析

动物医学进展 2011年第3期32卷 1-7页

作者：范培虎危艳武郭龙军吴洪丽黄立平刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

为了掌握高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）的变异情况,揭示该病的发生规律,根据GenBank登录的PRRSV基因序列设计引物,采用RT-PCR法对2005年-2010年间送检的282份病料进行了PRRSV核酸检测,对其中9份阳性样品进行了ORF5-7基因片... 详细信息

为了掌握高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）的变异情况,揭示该病的发生规律,根据GenBank登录的PRRSV基因序列设计引物,采用RT-PCR法对2005年-2010年间送检的282份病料进行了PRRSV核酸检测,对其中9份阳性样品进行了ORF5-7基因片段扩增和测序,所得序列与GenBank下载的PRRSV CH-1a、VR2332、HB-2、LV株的ORF5序列进行同源性比较,并与国内已发表的27株PRRSV ORF5序列进行遗传进化树分析,对GP5蛋白潜在糖基化位点和数目进行预测与分析。结果表明,病料PRRSV核酸阳性检出率为18.8%（53/282）;9个流行毒株同属于一个基因亚群,其ORF5序列同源性为95.0%-99.2%,氨基酸序列同源性为92.0%-99.0%;与4个参考毒株的ORF5序列同源性依次为93.4%-95.5%、87.6%-89.4%、91.2%-92.7%和63.0%-64.0%,氨基酸序列的同源性依次为91.0%-94.0%、85.6%-88.6%、89.6%-92.0%和54.7%-58.2%;GP5糖基化位点分析表明,5个糖基化位点有3株,4个糖基化位点有5株,3个糖基化位点有1株;这些糖基化位点分布在第30位-第55位氨基酸之间,以第44、55位点保守,另3个位点存在变异。我国猪群中PRRSV流行毒株变异幅度较大,GP5糖基化位点不同可能与毒力存在一定联系。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒 GP5基因遗传变异

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

副猪嗜血杆菌菌影的制备

引用

中国预防兽医学报 2011年第1期33卷 11-14页

作者：胡明明常月红张艳禾司薇谢芳于申业刘慧芳刘思国沈楠王春来中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学黑龙江哈尔滨150030

为研制副猪嗜血杆菌(***)菌影疫苗,本实验通过PCR扩增噬菌体PhiX174的裂解基因E,将其连接到含有λPL/PR-cI857启动阻遏系统的pBV220载体中,使裂解基因E与λPL/PR-cI857串联成为温度敏感的裂解盒,构建重组质粒pBV-E。并将含有E基因的裂... 详细信息

为研制副猪嗜血杆菌(***)菌影疫苗,本实验通过PCR扩增噬菌体PhiX174的裂解基因E,将其连接到含有λPL/PR-cI857启动阻遏系统的pBV220载体中,使裂解基因E与λPL/PR-cI857串联成为温度敏感的裂解盒,构建重组质粒pBV-E。并将含有E基因的裂解盒插入pMD18-T载体中,构建***打孔质粒(pMD-E)。采用电击穿孔法将其转入***β2155中,利用接合的方式将打孔质粒转入*** 5型菌株中。将含有打孔质粒的***在28℃培养至对数生长期,升温到42℃诱导E基因表达,制备***菌影。电镜观察菌影形态完整,内容物全部被释放到胞外。本实验为进一步研究菌影疫苗奠定了基础。

关键词：副猪嗜血杆菌菌影裂解基因

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

荧光定量RT-PCR方法与兔体定型热试验对于检测猪瘟兔化弱毒疫苗的平行关系

引用

中国预防兽医学报 2011年第9期33卷 699-703页

作者：葛叶张兴娟朱庆虎韩秋影王牟平李伟杰孙建宏仇华吉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所维科生物技术开发公司黑龙江哈尔滨150069

为探讨荧光定量RT-PCR技术与传统兔体定型热试验对于检测猪瘟兔化弱毒疫苗的平行关系,本研究采用荧光定量RT-PCR方法与兔体定型热试验对5份猪瘟兔化弱毒细胞苗成品和6份半成品样品进行平行检测。结果表明,两种检测方法存在正相关性,最低... 详细信息

为探讨荧光定量RT-PCR技术与传统兔体定型热试验对于检测猪瘟兔化弱毒疫苗的平行关系,本研究采用荧光定量RT-PCR方法与兔体定型热试验对5份猪瘟兔化弱毒细胞苗成品和6份半成品样品进行平行检测。结果表明,两种检测方法存在正相关性,最低105个病毒拷贝可以使家兔产生定型热反应,最低103个病毒拷贝可以使家兔产生轻热反应。荧光定量RT-PCR检测方法的检测过程仅需3.5 h,大大缩短了猪瘟疫苗的检测时间,该方法可以补充传统的兔体定型热反应用于猪瘟兔化弱毒疫苗半成品与成品的检验。

关键词：猪瘟兔化弱毒疫苗荧光定量RT-PCR 兔体定型热试验

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

表达猪白细胞介素2重组腺病毒的构建

引用

中国预防兽医学报 2011年第4期33卷 313-315页

作者：张健陈艳乔传玲杨焕良唐续辛晓光陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

为构建表达猪白细胞介素2(IL-2)的复制缺陷型重组腺病毒,本研究提取经刀豆球蛋白A(Con A)刺激体外培养的长白猪外周血淋巴细胞总RNA,利用RT-PCR扩增猪IL-2基因,并克隆于质粒pIRES2-EGFP中,将含有IL-2及EGFP的基因片段亚克隆到腺病毒的... 详细信息

为构建表达猪白细胞介素2(IL-2)的复制缺陷型重组腺病毒,本研究提取经刀豆球蛋白A(Con A)刺激体外培养的长白猪外周血淋巴细胞总RNA,利用RT-PCR扩增猪IL-2基因,并克隆于质粒pIRES2-EGFP中,将含有IL-2及EGFP的基因片段亚克隆到腺病毒的穿梭质粒pDC315中,构建重组腺病毒穿梭质粒pDC315-IL-2-EGFP。利用脂质体转染方法将pDC315-IL-2-EGFP和腺病毒骨架质粒pBHGloxΔE1,E3Cre共转染HEK293细胞。根据腺病毒感染后形成的典型细胞病变及EGFP的荧光信号筛选重组腺病毒rAd-IL-2-EGFP。经western blot鉴定,结果表明获得了一株能够表达猪IL-2蛋白的重组腺病毒rAd-IL-2-EGFP。本研究为进一步研究猪IL-2在疫苗免疫中的增强作用及研制新型免疫增强剂奠定了基础。

关键词： IL-2 重组腺病毒基因表达

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

H5N1亚型禽流感病毒血凝素蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

引用

中国预防兽医学报 2011年第6期33卷 476-478页

作者：崔佳莹李印于扬张文亮邓国华陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

为制备抗H5N1禽流感病毒(AIV)的单克隆抗体(MAb),本研究以灭活的H5N1亚型A/Chicken/Guangdong/S2261/2009(H5N1GD261)株免疫4周龄～6周龄BALB/c雌鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,经间接ELISA及HI筛选获得了3株能稳定分泌抗HA的MAb杂交瘤细胞,分别命名为1A4、2F5和3D3。MAb亚类鉴定表明,2F5为IgM类,其它为IgG2a亚类,轻链均为κ链。经血凝抑制检测,3株MAb均能与H5亚型的AIV结合,并具有较好的型广谱性。

关键词：禽流感病毒血凝素单克隆抗体血凝抑制

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

甲型H1N1流感病毒株的分离鉴定以及PR8株的相关基因对重组病毒增殖能力的影响

引用

中国预防兽医学报 2011年第7期33卷 517-520页

作者：李建辉刘春国张云刘明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

为分离流感病毒,本研究将疑似甲型流感患者的咽喉拭子接种SPF鸡胚尿囊腔,经检测收获的鸡胚尿囊液具有血凝活性。采用流感病毒通用引物进行PCR扩增出8个基因节段,经测序与GenBank中登录的序列比对后确定该病毒株为2009年爆发的甲型H1N1... 详细信息

为分离流感病毒,本研究将疑似甲型流感患者的咽喉拭子接种SPF鸡胚尿囊腔,经检测收获的鸡胚尿囊液具有血凝活性。采用流感病毒通用引物进行PCR扩增出8个基因节段,经测序与GenBank中登录的序列比对后确定该病毒株为2009年爆发的甲型H1N1流感病毒,并命名为A/Harbin/LM/2009(H1N1),简称LM株。由于LM分离株在鸡胚中增殖能力比较弱,为提高其在鸡胚中的增殖能力,我们利用反向遗传技术将LM株的HA和NA基因与高增殖特性的人流感病毒细胞高产株PR8的另外6个节段进行"6+2"重配,获得拯救病毒,但该重配病毒血凝价并未显著提高。为进一步鉴定影响病毒增殖能力的基因,本研究将LM株所有节段以"7+1"的方式逐一与PR8的7个片段搭配构成完整的流感病毒基因组,分别得到8个重配病毒。结果显示分离株的PB1、PA、HA基因显著降低了重配病毒在鸡胚细胞中的增殖能力。

关键词：甲型H1N1流感病毒反向遗传重配增殖能力

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

鸭β-防御素5基因的分离、鉴定及其生物学作用

引用

微生物学通报 2011年第11期38卷 1688-1697页

作者：张可心蔺利娟韩宗玺邵昱昊刘胜旺马得莹东北农业大学动物营养研究所黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

为克隆与表达鸭β-防御素5(AvBD5)基因及测定其生物学特性,采用RT-PCR方法从鸭肺脏组织中扩增到鸭AvBD5,将测得的序列与已发现的禽β-防御素和部分哺乳类动物β-防御素的氨基酸序列构建进化树进行同源性分析。结果显示鸭AvBD5 cDNA大小... 详细信息

为克隆与表达鸭β-防御素5(AvBD5)基因及测定其生物学特性,采用RT-PCR方法从鸭肺脏组织中扩增到鸭AvBD5,将测得的序列与已发现的禽β-防御素和部分哺乳类动物β-防御素的氨基酸序列构建进化树进行同源性分析。结果显示鸭AvBD5 cDNA大小为201 bp,编码66个氨基酸残基,内含6个位置保守的半胱氨酸残基,分别在分子内形成Cys1-Cys5、Cys2-Cys4和Cys3-Cys6共3对二硫键,与鸡AvBD5氨基酸同源性高达97%。进一步将其亚克隆到大肠杆菌pGEX-6p-1载体中进行原核表达。重组GST融合蛋白经纯化后,通过菌落计数法测定其体外抗菌活性,盐离子浓度对其抗菌活性的影响,以及该重组GST融合蛋白对溶血活性的影响。鸭AvBD5重组蛋白分子量约为32 kD,具有良好的抗菌活性,对11种细菌均有不同程度的抑制作用,高盐浓度对其抗菌活性有一定影响。此外,该重组蛋白对红细胞溶血活性极低。

关键词：鸭AvBD5 重组蛋白抗菌活性

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

口蹄疫病毒非结构蛋白3AB单克隆抗体的制备及其对应表位区分析

引用

中国预防兽医学报 2011年第9期33卷 733-737页

作者：刘丹丹高明春宋军宋鸽曹永生张润祥李爽于力王君伟东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

为鉴定口蹄疫病毒(FMDV)的非结构蛋白3AB的抗原表位,本研究以原核表达并纯化的FMDV 3AB重组蛋白免疫BALB/c小鼠,采用淋巴细胞杂交瘤技术制备杂交瘤细胞,通过间接ELISA进行筛选,获得6株能够稳定分泌抗3AB蛋白特异性单克隆抗体(MAb)的杂... 详细信息

为鉴定口蹄疫病毒(FMDV)的非结构蛋白3AB的抗原表位,本研究以原核表达并纯化的FMDV 3AB重组蛋白免疫BALB/c小鼠,采用淋巴细胞杂交瘤技术制备杂交瘤细胞,通过间接ELISA进行筛选,获得6株能够稳定分泌抗3AB蛋白特异性单克隆抗体(MAb)的杂交瘤细胞。这6株MAbs亚类鉴定均为IgG1型,轻链均为κ链。间接免疫荧光试验结果表明,这6株MAbs均能够识别FMDV 3AB蛋白。采用制备的MAb对分段表达的3AB蛋白进行western blot分析,结合位点分别位于3AB的第aa 55～aa 70、aa 64～aa 79、aa 130～aa 145区段。该结果为进一步探索3AB蛋白的结构和功能以及建立诊断方法奠定了基础。

关键词：口蹄疫病毒非结构蛋白3AB 单克隆抗体抗原表位区

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

抗Ⅰ型鸭肝炎病毒单克隆抗体的制备及其生物学特性鉴定

引用

中国预防兽医学报 2011年第6期33卷 487-489页

作者：李晓军张婷婷孟凡依刘明李刚张云中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030

为制备抗Ⅰ型鸭肝炎病毒(DHV-1)的单克隆抗体(MAb),本研究采用纯化的DHV-1免疫4周龄～6周龄BALB/c雌鼠,按常规方法制备MAb,通过间接ELISA方法进行筛选获得4株能稳定传代并分泌抗DHV-1的MAb的杂交瘤细胞株,分别命名为AF8、BF5、BG6和DB6... 详细信息

为制备抗Ⅰ型鸭肝炎病毒(DHV-1)的单克隆抗体(MAb),本研究采用纯化的DHV-1免疫4周龄～6周龄BALB/c雌鼠,按常规方法制备MAb,通过间接ELISA方法进行筛选获得4株能稳定传代并分泌抗DHV-1的MAb的杂交瘤细胞株,分别命名为AF8、BF5、BG6和DB6。Dot-ELISA、间接免疫荧光试验和中和试验等结果表明4株MAbs效价为1∶1 600～1∶3 200,与新型DHV无交叉反应。其中,BF5和BG6具有中和活性。抗DHV-1的MAb的制备为DHV-1的生物学特性研究及其快速诊断方法的建立奠定了基础。

关键词： Ⅰ型鸭肝炎病毒单克隆抗体鉴定

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

鹅源H5N1亚型禽流感病毒感染雏鸡免疫器官细胞凋亡的研究

引用

中国预防兽医学报 2011年第3期33卷 177-180页

作者：张瑞莉刘明张卓郑世民东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

为研究鹅源H5N1亚型禽流感病毒(AIV)人工感染雏鸡免疫器官细胞凋亡的动态变化,本研究将50只1日龄SPF雏鸡随机分为两组。试验组雏鸡于7日龄,分别经鼻、眼、口同时感染105TCID50的鹅源H5N1亚型AIV,分别于感染后3d、4d、5d、7d和14d迫杀,... 详细信息

为研究鹅源H5N1亚型禽流感病毒(AIV)人工感染雏鸡免疫器官细胞凋亡的动态变化,本研究将50只1日龄SPF雏鸡随机分为两组。试验组雏鸡于7日龄,分别经鼻、眼、口同时感染105TCID50的鹅源H5N1亚型AIV,分别于感染后3d、4d、5d、7d和14d迫杀,采取胸腺、法氏囊和脾脏,应用TUNEL染色法和透射电镜技术观察其细胞凋亡的动态变化情况。结果显示,试验组雏鸡的胸腺和脾脏凋亡细胞数量在感染后3d～7d极显著高于对照组(p<0.01);法氏囊凋亡细胞数量在感染后3d～4d比对照组明显增加(p<0.05或p<0.01)。组织器官超微结构检测可见凋亡细胞核染色质固缩并凝结成块,聚集在核膜周围,呈新月状或环状;细胞质浓缩。表明鹅源H5N1AIV能够诱导感染雏鸡免疫器官发生细胞凋亡。

关键词：禽流感病毒免疫器官细胞凋亡

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：