检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2011年第11期33卷 849-853页

作者：陈家锃崔红玉田志军葛俊伟安同庆彭金美李一经东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

为筛选适宜乳酸菌(LAB)宿主表达载体的启动子,本研究以大肠杆菌-LAB穿梭载体pPG612为基本骨架,利用GatewayTM克隆技术操作构建了LAB组成型启动子探测载体,并利用该载体筛选了短乳杆菌的S层启动子。我们利用底物X-gluC与报告基因gusA编... 详细信息

为筛选适宜乳酸菌(LAB)宿主表达载体的启动子,本研究以大肠杆菌-LAB穿梭载体pPG612为基本骨架,利用GatewayTM克隆技术操作构建了LAB组成型启动子探测载体,并利用该载体筛选了短乳杆菌的S层启动子。我们利用底物X-gluC与报告基因gusA编码的蛋白酶之间的特异性显色反应筛选阳性菌落,超声破碎后的菌体蛋白经SDS-PAGE和western blot分析表明该启动子在宿主菌中具有组成型启动子活性。本研究为进一步利用表达载体及筛选其他LAB启动子奠定基础。

关键词：乳酸菌启动子探测载体 Gateway克隆技术 X-gluC

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禽呼肠孤病毒σC蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备

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中国家禽 2011年第12期33卷 18-21页

作者：孙美玉秦立廷高玉龙祁小乐高宏雷王永强王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所禽传染病研究室兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

通过RT-PCR扩增禽呼肠孤病毒σC基因,经EcoRⅠ和SalⅠ双酶切处理后与pET-30a原核表达载体连接,获得重组质粒pET-30a-σC。将重组阳性质粒转化至BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达后通过Western blot分析表明重组目的蛋白获得表达,分... 详细信息

通过RT-PCR扩增禽呼肠孤病毒σC基因,经EcoRⅠ和SalⅠ双酶切处理后与pET-30a原核表达载体连接,获得重组质粒pET-30a-σC。将重组阳性质粒转化至BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达后通过Western blot分析表明重组目的蛋白获得表达,分子量约为42ku,主要以包涵体形式存在。重组蛋白经纯化后免疫新西兰白兔,三次免疫获得抗σC蛋白的高效免疫血清。经ELISA检测,该血清抗体效价为1∶105,并且能够与重组杆状病毒表达的σC蛋白发生特异性反应。禽呼肠孤病毒σC蛋白的表达与兔抗血清的制备为进一步研究该蛋白功能奠定了基础。

关键词：禽呼肠孤病毒 σC基因原核表达兔抗血清

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鹌鹑β- 防御素10基因的克隆与表达及其体内分布的检测

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中国预防兽医学报 2011年第7期33卷 552-556页

作者：蔺利娟王瑞琴韩宗玺邵昱昊刘胜旺程宝晶孙黎李子瑞马得莹东北农业大学动物营养研究所黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

为测定鹌鹑β-防御素10(AvBD10)体外抗菌活性及检测其在鹌鹑脏器组织的分布,本研究应用RT-PCR方法从鹌鹑肺脏组织中扩增到鹌鹑AvBD10,经序列同源性分析,鹌鹑AvBD10与鸡AvBD10的氨基酸序列同源性最高(83.8%)。将该基因亚克隆到表达载体pG... 详细信息

为测定鹌鹑β-防御素10(AvBD10)体外抗菌活性及检测其在鹌鹑脏器组织的分布,本研究应用RT-PCR方法从鹌鹑肺脏组织中扩增到鹌鹑AvBD10,经序列同源性分析,鹌鹑AvBD10与鸡AvBD10的氨基酸序列同源性最高(83.8%)。将该基因亚克隆到表达载体pGEX-6p-1中进行原核表达,SDS-PAGE电泳表明,鹌鹑AvBD10重组蛋白分子量约为31ku。该重组蛋白经纯化后测定其体外抗菌活性,结果显示,鹌鹑AvBD10重组蛋白具有广谱的抗菌活性。采用定量RT-PCR法检测到AvBD10在鹌鹑脏器组织中广泛表达。

关键词：鹌鹑 AvBD10 重组蛋白抗菌活性组织分布

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马传染性贫血病毒弱毒疫苗S2基因在体内变异分析

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中国预防兽医学报 2011年第6期33卷 415-418页

作者：王帅王雪峰林跃智姜成刚吕晓玲赵立平周建华曲娟娟东北农业大学资源与环境学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物病研究室黑龙江哈尔滨150001

为研究马传染性贫血病毒(EIAV)驴白细胞弱毒疫苗EIAVDLV121的S2基因在马体内的变异规律,本研究选用4匹成年马,其中2匹(#1、#2)接种EIAVDLV121,另外2匹作为对照。免疫后监测马体温、血小板含量以及病毒载量结果显示,免疫马未出现马传染... 详细信息

为研究马传染性贫血病毒(EIAV)驴白细胞弱毒疫苗EIAVDLV121的S2基因在马体内的变异规律,本研究选用4匹成年马,其中2匹(#1、#2)接种EIAVDLV121,另外2匹作为对照。免疫后监测马体温、血小板含量以及病毒载量结果显示,免疫马未出现马传染性贫血体征。通过RT-PCR方法检测病毒S2基因在感染马体内不同时期的基因序列,结果显示,免疫马体内EIAVDLV121 S2蛋白的突变主要发生在氨基酸第17位、22位、39位、41位、51位和55位。另外,#1马免疫后70 d以及#2马免疫后第14 d和第28 d检测疫苗毒S2蛋白序列与EIAVDLV121亲缘关系较近,而#1马免疫后第42 d、第112 d和第140 d的疫苗毒S2蛋白序列与EIAVDLV121的致病性亲本强毒株EIAVLN40亲缘关系最近。本研究结果有助于对EIAV及EIAV疫苗株在马体内感染进程的研究。

关键词：马传染性贫血病毒 S2基因变异分析

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禽源U6启动子介导鸡马立克氏病病毒gI、gE基因特异siRNA的筛选及干扰活性鉴定

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中国预防兽医学报 2011年第5期33卷 335-339页

作者：全炎铭崔红玉赵妍赵晓岩石星明高宏博闫帅张晓艳王玫王云峰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物科技学院黑龙江哈尔滨150030

为筛选鸡马立克氏病病毒(MDV)gI、gE基因特异性siRNA,本研究以鸡胚成纤维细胞(CEF)的DNA为模板,扩增禽源cU6-3启动子序列,并合成针对gI和gE基因各5个靶位点的10条shRNA序列。通过重叠PCR将cU6-3启动子与shRNA融合扩增制备shRNA表达盒,... 详细信息

为筛选鸡马立克氏病病毒(MDV)gI、gE基因特异性siRNA,本研究以鸡胚成纤维细胞(CEF)的DNA为模板,扩增禽源cU6-3启动子序列,并合成针对gI和gE基因各5个靶位点的10条shRNA序列。通过重叠PCR将cU6-3启动子与shRNA融合扩增制备shRNA表达盒,将制备的shRNA表达盒分别与重组质粒pEGFP-gI或pEGFP-gE共转染CEF细胞,并根据荧光显微镜观察和流式细胞仪检测结果评价siRNA抑制融合荧光蛋白表达的效率。结果表明,gI和gE基因的抑制效率为10%～80%。分别将其中抑制效率最高的一条shRNA插入pGEM-T载体中构建重组表达质粒pcU6-shgI735和pcU6-shgE936,通过不同细胞系稳定干扰试验和抑制病毒复制试验评价其干扰活性。结果显示,pcU6-shgI735和pcU6-shgE936能够明显抑制融合蛋白的表达及MDV在CEF细胞中的增殖,并且禽源U6启动子构建的表达盒在禽源细胞(DF1)中的活性比在哺乳动物细胞(Vero、MDCK)的活性高1.21～1.45倍。本研究鉴定获得了gI和gE基因的特异性siRNA,筛选出能够抑制MDV复制的靶位点,为MDV基因的功能和抗MDV病毒研究奠定了基础。

关键词：鸡马立克氏病病毒 gI和gE基因禽源U6启动子 siRNA

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表达小反刍兽疫病毒F基因重组腺病毒的构建及对小鼠的免疫原性

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中国预防兽医学报 2011年第4期33卷 253-256页

作者：王芳周国辉曹丽艳李一经于力东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

为构建表达小反刍兽疫病毒(PPRV)F蛋白的重组腺病毒,本实验合成密码子优化的PPRVF基因,将其克隆至腺病毒穿梭载体pShuttle-CMV中,并以PmeⅠ线性化后转化含有人5型腺病毒骨架的BJ5183感受态细胞,通过细菌内同源重组构建表达PPRVF蛋白的... 详细信息

为构建表达小反刍兽疫病毒(PPRV)F蛋白的重组腺病毒,本实验合成密码子优化的PPRVF基因,将其克隆至腺病毒穿梭载体pShuttle-CMV中,并以PmeⅠ线性化后转化含有人5型腺病毒骨架的BJ5183感受态细胞,通过细菌内同源重组构建表达PPRVF蛋白的重组腺病毒质粒pAdV-F,经PacⅠ线性化后转染AD-293细胞,获得重组腺病毒rHAdV-F。经PCR和Dot-ELISA鉴定,F蛋白在AD-293细胞中获得表达。该重组腺病毒与野生型腺病毒复制能力相近,但病毒滴度略低。间接ELISA方法检测显示rHAdV-F可以诱导小鼠产生抗PPRV特异性体液免疫应答。

关键词：小反刍兽疫 F基因重组腺病毒表达免疫原性

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马流感病毒NP单克隆抗体的制备及特性鉴定

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中国兽医科学 2011年第6期41卷 610-613页

作者：姬媛媛郭巍王征赵立平李红梅相文华中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物病研究室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学生命科学学院黑龙江哈尔滨150030

利用原核表达的马流感病毒(EIV)核蛋白(NP)为免疫原,经腹腔接种4周龄BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,经4次有限稀释法克隆和间接ELISA法筛选,获得了3株稳定分泌单抗的杂交瘤细胞株2G11、3E10和4A1,并对它们进行了亚类... 详细信息

利用原核表达的马流感病毒(EIV)核蛋白(NP)为免疫原,经腹腔接种4周龄BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,经4次有限稀释法克隆和间接ELISA法筛选,获得了3株稳定分泌单抗的杂交瘤细胞株2G11、3E10和4A1,并对它们进行了亚类鉴定、间接ELISA检测和特性鉴定。结果显示,单抗2G11为IgG1亚型,3E10为IgG2a亚型,4A1为IgM亚型,轻链均为κ链。单抗2G11、3E10和4A1的细胞上清液及腹水效价分别为1∶640、1∶640、1∶320和1∶409 600、1∶204 800、0。这3株单抗均能特异性识别EIV NP重组蛋白,并且能够与天然EIV结合;获得的3株单抗与马动脉炎病毒、马疱疹病毒1型、马疱疹病毒4型、马乙型脑炎病毒均不发生交叉反应。亲和力试验结果显示,单抗2G11和3E10与EIV的亲和力常数分别为4.39×106 M-1和2.20×106 M-1。

关键词：马流感病毒核蛋白单克隆抗体特性鉴定

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猴免疫缺陷病毒p27蛋白单克隆抗体结合抗原表位的鉴定

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中国预防兽医学报 2011年第9期33卷 738-741页

作者：李亮林跃智那雷汤艳东吕晓玲周建华曲娟娟东北农业大学生命科学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物病研究室黑龙江哈尔滨150001

为鉴定抗猴免疫缺陷病毒(SIV)衣壳蛋白p27单克隆抗体(MAb)p27-A5、p27-C7和p27-D2所识别的抗原表位,本研究通过间接ELISA法相加试验对这3株MAbs结合抗原表位进行初步分析,并利用部分重叠的短肽对MAbs的结合抗原表位进行鉴定。结果表明p2... 详细信息

为鉴定抗猴免疫缺陷病毒(SIV)衣壳蛋白p27单克隆抗体(MAb)p27-A5、p27-C7和p27-D2所识别的抗原表位,本研究通过间接ELISA法相加试验对这3株MAbs结合抗原表位进行初步分析,并利用部分重叠的短肽对MAbs的结合抗原表位进行鉴定。结果表明p27-C7和p27-A5的结合抗原表位位于p27蛋白的aa61～aa76(氨基酸序列为61SEGCTPYDINQMLNCV76);p27-D2的结合抗原表位则位于aa191～aa206(氨基酸序列为191EQTDAAVKNWMTQTLL206)。该结果为进一步深入了解p27的抗原特性和建立该蛋白的检测方法奠定了基础。

关键词：猴免疫缺陷病毒 p27蛋白单克隆抗体表位鉴定

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1型鸭疫里氏杆菌OmpA蛋白间接ELISA方法的建立

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中国预防兽医学报 2011年第8期33卷 635-639页

作者：孙 郭东春刘家森姜骞司昌德林欢崔玉东曲连东中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319

为建立检测1型鸭疫里氏杆菌(***)的间接ELISA方法,本研究根据已发表的***外膜蛋白A(ompA)基因序列(AF104937)设计引物,扩增1型*** HLG1株的ompA基因,构建重组质粒pHtb-ompA,转化大肠杆菌BL21(DE3),并利用IPTG进行诱导表达。SDS-PAGE和we... 详细信息

为建立检测1型鸭疫里氏杆菌(***)的间接ELISA方法,本研究根据已发表的***外膜蛋白A(ompA)基因序列(AF104937)设计引物,扩增1型*** HLG1株的ompA基因,构建重组质粒pHtb-ompA,转化大肠杆菌BL21(DE3),并利用IPTG进行诱导表达。SDS-PAGE和western blot结果表明,表达蛋白约为55 ku,具有良好的抗原活性。以纯化的OmpA为包被抗原建立间接ELISA并对条件进行优化。建立的ELISA具有良好的特异性、敏感性;与HLG1株菌体裂解蛋白为抗原的间接ELISA比较,符合率为91.3%。本研究建立的ELISA方法为***的流行病学调查和SPF鸭的监测提供了快速、特异的血清学诊断方法。

关键词：鸭疫里氏杆菌 OmpA蛋白间接ELISA

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猪捷申病毒、猪瘟病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒的多重RT-PCR检测方法的建立及应用

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中国预防兽医学报 2011年第9期33卷 704-708页

作者：刘杉杉赵亚荣胡峰吕超超胡泉博王贵华崔尚金中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 大北农动物医学研究中心北京100097

为建立同时检测猪捷申病毒(PTV)、猪瘟病毒(CSFV)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的多重RT-PCR(mRT-PCR)检测方法,本研究以PRRSV ORF6基因、CSFV Erns基因和PTV 5'-UTR基因为对象,建立检测3种病毒的mRT-PCR方法。特异性试验表明,... 详细信息

为建立同时检测猪捷申病毒(PTV)、猪瘟病毒(CSFV)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的多重RT-PCR(mRT-PCR)检测方法,本研究以PRRSV ORF6基因、CSFV Erns基因和PTV 5'-UTR基因为对象,建立检测3种病毒的mRT-PCR方法。特异性试验表明,该方法可以特异扩增3种病毒的基因,对大肠杆菌、猪圆环病毒Ⅱ型、猪细小病毒、猪伪狂犬病毒和猪流感病毒呈阴性反应;敏感性试验表明,PRRSV、CSFV和PTV的最低核酸检出量分别为7.11×102拷贝、7.81×103拷贝和8.43×102拷贝,略低于单一RT-PCR敏感性;应用该方法对69份送检样品进行检测,其中PRRSV、CSFV和PTV单纯感染检出率分别为28.99%、27.54%和56.52%,PRRSV和CSFV混合感染检出率为4.35%,PRRSV和PTV的混合感染检出率为11.59%,CSFV和PTV的混合感染检出率为13.04%,3种病毒的混合感染检出率为8.70%,与单一RT-PCR检测结果符合率为98.6%。本研究建立的检测方法快速简便,可以用于疾病的初步筛选,对临床早期诊断和流行病学调查具有重要意义。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒猪瘟病毒猪捷申病毒 mRT-PCR

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