检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2011年第3期33卷 194-198页

作者：蔡文博牛成明高彩霞李行司昌德张伟韩凌霞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 甘肃农业大学动物科学技术学院甘肃兰州730070

为研究具有不同抗性的马立克氏病(MD)疫苗免疫鸡羽髓后,疫苗毒和超强毒(vvMDV)的复制动力学及两种病毒载量的相关性,本实验对经火鸡疱疹病毒(HVT)FC126疫苗株免疫1周后(1wpv),攻击vvMDV Md5株G3系和G7系鸡羽髓中的HVT和vvMDV载量进行定... 详细信息

为研究具有不同抗性的马立克氏病(MD)疫苗免疫鸡羽髓后,疫苗毒和超强毒(vvMDV)的复制动力学及两种病毒载量的相关性,本实验对经火鸡疱疹病毒(HVT)FC126疫苗株免疫1周后(1wpv),攻击vvMDV Md5株G3系和G7系鸡羽髓中的HVT和vvMDV载量进行定量检测及相关性分析。结果显示,G3系和G7系鸡群羽髓中的vvMDV载量始终高于疫苗毒。其中,G3系鸡群在免疫和攻毒后的相同时间内,疫苗毒与vvMDV载量的消长规律基本一致,均在感染后第4周(4wpi)出现峰值,6wpi降至最低水平,两种病毒载量多表现为正相关,6wpv～8wpv为持续显著正相关;G7系的两种病毒的复制动力学存在差异:vvMDV载量从攻毒后第6周呈增长趋势,而疫苗毒在4wpv出现峰值后迅速下降,两种病毒载量多表现为负相关。本研究表明,免疫遗传基因在对病毒的抵抗中起主要作用,为MDV的感染机制和疫苗免疫机理的研究提供实验依据。

关键词： HVT vvMDV G3系鸡 G7系鸡复制动力学

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猪RIG-1、TLR-9、IRF-3和IRF-7mRNA TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用

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中国预防兽医学报 2011年第12期33卷 953-956页

作者：王晓玲蔺文成刘芹防崔尚金青岛农业大学动物科技学院山东青岛266109 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

为建立定量检测猪Ⅰ型干扰素信号传导因子mRNA的TaqMan荧光定量PCR检测方法,本研究针对猪Ⅰ型干扰素信号传导因子视黄酸诱导基因-1(RIG-1)、Toll样受体-9(TLR-9)、干扰素调节因子-3(IRF-3)和干扰素调节因子-7(IRF-7)的基因序列设计了特... 详细信息

为建立定量检测猪Ⅰ型干扰素信号传导因子mRNA的TaqMan荧光定量PCR检测方法,本研究针对猪Ⅰ型干扰素信号传导因子视黄酸诱导基因-1(RIG-1)、Toll样受体-9(TLR-9)、干扰素调节因子-3(IRF-3)和干扰素调节因子-7(IRF-7)的基因序列设计了特异性的引物和探针,分别构建了各自的阳性标准重组质粒,同时选择β-actin作为管家基因,建立了检测猪RIG-1、TLR-9、IRF-3、IRF-7的Taq Man荧光定量PCR方法。结果表明:所建立的检测方法荧光定量PCR扩增均无非特异性产物产生;检测下限均达1.0×101 copies/μL;批内及批间变异系数均小于3%。利用该方法对猪细小病毒(PPV)感染48 h的ST细胞中RIG-1、TLR-9、IRF-3和IRF-7mRNA的表达水平进行了检测。结果表明,RIG-1、IRF-3和IRF-7转录水平呈现上调趋势,而TLR-9转录水平呈现下调趋势。本研究建立的TaqMan荧光定量PCR方法特异性强、敏感性高、重复性好,适于猪Ⅰ型干扰素信号传导因子的定量检测分析。

关键词： Ⅰ型干扰素信号传导因子荧光定量PCR 检测

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两株鸭源H6N2亚型禽流感病毒的序列分析及对鸡的致病性研究

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中国预防兽医学报 2011年第4期33卷 270-275页

作者：丁晴微邓国华施建忠李印崔鹏飞齐瑛琳于杨崔佳莹邱伯根陈化兰湖南农业大学动物医学院湖南长沙410128 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

为了解鸭源H6N2亚型禽流感病毒(AIV)的生物学特性,本研究对两株鸭源H6N2亚型AIV[A/duck/Hubei/Sd061/2008(HB/061/08)和A/duck/Fujian/S2080/2009(FJ/080/09)]进行序列分析和致病性试验。序列分析显示:两株病毒的HA和NA基因均来源于我国近年流行的H6亚型病毒株,但是HB/061/08株的内部基因可能来源于H9、H5等其他亚型。与病毒株HB/061/08NP、PA、PB2基因的核苷酸同源性最高的病毒株为A/environment/Hunan/2-84/2007(H9N2);与M、PB1和NS基因的核苷酸同源性最高的病毒株分别为A/duck/Zhejiang/11/2000(H5N1)、A/chicken/Hebei/7/2008(H9N2)和A/chicken/Henan/L1/2008(H9N2)。两株病毒的抗原差异性较显著,相关系数为0.49;用106EID50病毒剂量感染4周龄SPF鸡,结果显示FJ/080/09株不能感染鸡,而HB/061/08株在鸡体内能够高效复制,并通过咽喉和泄殖腔持续排毒。鸡群感染后第3d采取脏器样品,在气管和肺部能够检测到病毒存在,部分脏器和器官的组织学观察显示存在一定程度的病理变化。以上数据表明,H6亚型AIV在跨越不同宿主感染的传播过程中,对新宿主适应能力的差异导致对其致病性的差异。

关键词：禽流感病毒 H6N2 基因组分析抗原分析致病性

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H5亚型禽流感DNA疫苗pCAGGoptiHA5对鸭免疫保护效力的研究

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中国预防兽医学报 2011年第3期33卷 211-213页

作者：李俊平赵双成常晓飞柳金雄曾显营卫星辉李福基姜永萍陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 格兰柏生化科技有限公司香港999077

为评价H5亚型禽流感病毒(AIV)DNA疫苗pCAGGoptiHA5对鸭的免疫保护效力,本研究将pCAGGoptiHA5以20μg、30μg和50μg剂量免疫3周龄SPF鸭,首次免疫后3周加强免疫一次。2周后以105EID50的鸭源高致病力AIV由鼻腔攻毒,观察SPF鸭发病和死亡情... 详细信息

为评价H5亚型禽流感病毒(AIV)DNA疫苗pCAGGoptiHA5对鸭的免疫保护效力,本研究将pCAGGoptiHA5以20μg、30μg和50μg剂量免疫3周龄SPF鸭,首次免疫后3周加强免疫一次。2周后以105EID50的鸭源高致病力AIV由鼻腔攻毒,观察SPF鸭发病和死亡情况。分别于攻毒后3d、5d和7d采集喉头及泄殖腔拭子进行病毒分离,检测鸭排毒情况及免疫和攻毒后血凝抑制(HI)抗体、中和(NT)抗体的动态变化。结果表明:30μg和50μg免疫组均可对免疫鸭产生100%保护,而20μg剂量组则可对免疫鸭提供80%保护。

关键词：禽流感 DNA疫苗 pCAGGoptiHA5

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3种ELISA试剂盒检测抗牛支原体抗体的比较

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中国预防兽医学报 2011年第6期33卷 448-451页

作者：刘洋陈维宋志强孙文静李媛邹小辉辛九庆中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室/国家牛传染性胸膜肺炎指定检测实验室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030

为比较3种抗牛支原体(***)血清抗体的ELISA试剂盒检测效果,本实验应用3种检测***血清抗体ELISA诊断试剂盒对38份阳性样品(自然感染19份,人工感染18份)和37份阴性样品进行检测。结果表明:本实验室制备的HVRI试剂盒与商品化试剂盒Kit 1的... 详细信息

为比较3种抗牛支原体(***)血清抗体的ELISA试剂盒检测效果,本实验应用3种检测***血清抗体ELISA诊断试剂盒对38份阳性样品(自然感染19份,人工感染18份)和37份阴性样品进行检测。结果表明:本实验室制备的HVRI试剂盒与商品化试剂盒Kit 1的检测结果和综合检测结果符合率分别达到92%和96%;而商品化试剂盒Kit 2的检测结果与综合检测结果符合率仅为74.67%。一致性检验结果显示:HVRI试剂盒与Kit 1的一致性较高;Kit 2与HVRI试剂盒、Kit 2与Kit 1有中度的一致性。此外,3种试剂盒对牛传染性胸膜肺炎国际标准血清(PS2)的检测结果显示HVRI试剂盒和Kit 1均为为阴性,Kit 2为阳性。因此,HVRI试剂盒与Kit 1更适于***检测和开展流行病学调查。

关键词：牛支原体 ELISA试剂盒诊断

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高致病性PRRSV HuN4株Nsp4的原核表达及其抗体水平检测

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中国预防兽医学报 2011年第3期33卷 219-222页

作者：董建国刘永刚石文达武嘉男王刚刘鹤徐明明荣福龙李丽琴田志军蔡雪辉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 山东农业大学山东泰安271018 东北农业大学黑龙江哈尔滨150001

为进一步研究高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)Nsp4的免疫学特性,本研究根据PRRSV HuN4株序列,设计并合成用于扩增PRRSV HuN4株Nsp4基因的引物。将扩增产物与原核表达载体pGEX-6P-1连接,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中。Western b... 详细信息

为进一步研究高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)Nsp4的免疫学特性,本研究根据PRRSV HuN4株序列,设计并合成用于扩增PRRSV HuN4株Nsp4基因的引物。将扩增产物与原核表达载体pGEX-6P-1连接,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中。Western blot试验显示,Nsp4在大肠杆菌中获得较高水平的表达,并且具有良好的反应活性。利用该蛋白建立ELISA方法,检测PRRSV HuN4株感染仔猪的不同时间内的血清,并比较抗Nsp4,囊膜蛋白和M蛋白,N蛋白的抗体水平,结果表明Nsp4抗体升高的时间晚于囊膜蛋白和M蛋白、N蛋白出现的时间,同时抗体水平也低于其他蛋白。

关键词： PRRSV Nsp4 原核表达抗原性

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结核分枝杆菌pdhA基因的原核表达及其免疫原性分析

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中国兽医科学 2011年第7期41卷 697-700页

作者：王华南亓英芳朱婷于申业刘慧芳司微杨盛王加明冯拥军李素兰于秀婷王春来刘思国中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室黑龙江哈尔滨150001 新疆生产建设兵团农十师畜牧兽医站新疆阿勒泰836000

以结核分枝杆菌H37Rv菌株的基因组DNA为模板,采用PCR方法扩增出1 100bp的pdhA(pyruvate dehydrogenase E1component alpha subunit)基因,经限制性酶切后,与pET-28a载体连接,转化到大肠杆菌BL21中,重组菌经1mmol/L IPTG诱导表达了pdhA蛋白,并用Ni-His-resin纯化了目的蛋白,经Western-blot分析鉴定了目的蛋白的免疫原性。结果显示,重组质粒的双酶切鉴定和DNA测序均正确;SDS-PAGE和Western-blot分析结果显示,在44ku处获得一目的条带,且具有很好的免疫原性。本研究成功获得了高纯度的重组蛋白pdhA,为深入研究其功能奠定了基础。

关键词：结核分枝杆菌 pdhA基因原核表达

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表达小反刍兽疫病毒H基因重组腺病毒的构建及对小鼠免疫原性的试验

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中国兽医杂志 2011年第7期47卷 20-22页

作者：王芳周国辉曹丽艳李一经于力东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室大动物传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

人工合成密码子优化的小反刍兽疫病毒(PPRV)H基因,将其克隆到腺病毒穿梭载体pShuttle-CMV中,电转化BJ5183感受态细胞,获得重组腺病毒质粒pAdV-H,转染AD-293细胞,获得重组腺病毒rHAdV-H。用PCR和Dot-ELISA鉴定H基因在AD-293细胞中的表达... 详细信息

人工合成密码子优化的小反刍兽疫病毒(PPRV)H基因,将其克隆到腺病毒穿梭载体pShuttle-CMV中,电转化BJ5183感受态细胞,获得重组腺病毒质粒pAdV-H,转染AD-293细胞,获得重组腺病毒rHAdV-H。用PCR和Dot-ELISA鉴定H基因在AD-293细胞中的表达,同时用一步生长曲线,测定该重组腺病毒的复制能力。接种小鼠评价免疫效力,用间接ELISA试验检测抗体水平,结果表明,PPRV H基因在AD-293细胞中获得了表达,子代重组腺病毒在感染细胞后60 h滴度最高,为3×108PFU/mL。rHAdV-H免疫小鼠产生针对PPRV特异性抗体,表明该重组腺病毒可以诱导抗PPRV的特异性免疫应答。

关键词：小反刍兽疫 H基因重组腺病毒表达免疫原性

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传染性喉气管炎病毒WG株糖蛋白gD基因主要抗原区的表达

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中国兽医科学 2011年第2期41卷 188-192页

作者：魏秀英石星明张晶王玫赵妍胡顺磊崔红玉全炎铭闫帅陈洪岩王云峰东北农业大学生命科学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

为表达传染性喉气管炎病毒(ILTV)gD蛋白,根据GenBank中登录的ILTV全基因组序列(EU675324)设计了1对引物,进行gD全基因的PCR扩增,产物经纯化后连接至pGEM-T Easy载体,进行序列测定,采用DNAStar软件分析gD蛋白的抗原性,选择抗原性强的第25... 详细信息

为表达传染性喉气管炎病毒(ILTV)gD蛋白,根据GenBank中登录的ILTV全基因组序列(EU675324)设计了1对引物,进行gD全基因的PCR扩增,产物经纯化后连接至pGEM-T Easy载体,进行序列测定,采用DNAStar软件分析gD蛋白的抗原性,选择抗原性强的第256～405aa的编码片段设计引物并进行PCR扩增,结果获得截短的gD基因,将其克隆至原核表达载体pET-32a中,并转化*** BL21(DE3)。经IPTG诱导后,获得大小为43.5ku的重组蛋白,命名为r-gD。Western-blot分析结果表明,r-gD具有较强的抗原性。

关键词：传染性喉气管炎病毒糖蛋白D 序列分析蛋白质免疫印迹

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鸭瘟病毒疫苗株在免疫SPF鸭体内的生长动力学检测

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中国兽医科学 2011年第5期41卷 514-518页

作者：张新富胡永浩柳金雄陈普成邬丽姜永萍陈化兰甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点实验室兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

为了研究鸭瘟病毒疫苗株在免疫SPF鸭脑、胸腺、脾、肾、肝、法氏囊中的动态分布规律,根据GenBank中鸭瘟病毒的UL6基因设计引物RTF和RTR,采用SYBR GreenⅠ实时荧光定量方法,建立了特异性强、敏感性高、重复性好的标准曲线。利用建立的标... 详细信息

为了研究鸭瘟病毒疫苗株在免疫SPF鸭脑、胸腺、脾、肾、肝、法氏囊中的动态分布规律,根据GenBank中鸭瘟病毒的UL6基因设计引物RTF和RTR,采用SYBR GreenⅠ实时荧光定量方法,建立了特异性强、敏感性高、重复性好的标准曲线。利用建立的标准曲线对采集组织中鸭瘟病毒DNA的拷贝数进行定量。结果显示,免疫后在脑、胸腺、肝、肾、脾、法氏囊均能检测到鸭瘟病毒DNA,且免疫后第1天至第3周,肝、脑、肾中病毒DNA的拷贝数较其他受检组织中鸭瘟病毒DNA的拷贝数高。免疫后至第9周,鸭瘟病毒DNA检出不稳定。试验结束时,除肾、法氏囊外,其他组织中病毒DNA的拷贝数均下降至1×105copies以下。表明鸭瘟病毒疫苗株对SPF鸭组织具有泛嗜性,其主要分布于SPF鸭脑、肝、肾中。

关键词：鸭瘟病毒疫苗株标准曲线动态分布

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