检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2011年第6期33卷 427-430页

作者：孙佩龙郝飞飞吕淑霞刘新奇周建华林跃智沈阳农业大学生物科学技术学院辽宁沈阳110161 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物病研究室黑龙江哈尔滨150001 南开大学生命科学学院天津300071

为获得马传染性贫血病毒单一受体(ELR1)的结晶体,本研究通过PCR方法获得ELR1胞外区基因片段,利用基因重组技术构建包含ELR1胞外区基因的重组杆状病毒表达质粒(Bacmid-ELR1)。将其转染至昆虫细胞sf9中进行蛋白表达,western blot检测结果... 详细信息

为获得马传染性贫血病毒单一受体(ELR1)的结晶体,本研究通过PCR方法获得ELR1胞外区基因片段,利用基因重组技术构建包含ELR1胞外区基因的重组杆状病毒表达质粒(Bacmid-ELR1)。将其转染至昆虫细胞sf9中进行蛋白表达,western blot检测结果显示ELR1胞外区截短型重组蛋白在昆虫表达系统中获得表达。目的蛋白经亲和层析和凝胶过滤方法纯后化,通过多组结晶条件筛选获得了ELR1胞外区重组蛋白结晶体。本研究为ELR1立体结构和功能的解析提供了重要基础。

关键词：马传染性贫血病毒单一受体昆虫表达系统纯化结晶

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5种脑炎人兽共患病病毒多重RT-PCR检测方法的建立

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中国预防兽医学报 2011年第2期33卷 118-121页

作者：蔡绪禹康晓平刘洪李裕昌孙恩成王凌凤杨涛刘霓红步志高李文京杨银辉吴东来中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物/生物安全国家重点实验室北京100071 中国动物疫病预防控制中心北京100125

为建立同时检测流行性乙型脑炎病毒(JEV)、森林脑炎病毒(TBEV)、东方马脑炎病毒(EEEV)、西方马脑炎病毒(WEEV)和基孔肯雅病毒(CHIKV)5种人兽共患脑炎病病毒的多重RT-PCR方法,本研究根据GenBank登录的相关病毒基因序列设计特异引物,通过... 详细信息

为建立同时检测流行性乙型脑炎病毒(JEV)、森林脑炎病毒(TBEV)、东方马脑炎病毒(EEEV)、西方马脑炎病毒(WEEV)和基孔肯雅病毒(CHIKV)5种人兽共患脑炎病病毒的多重RT-PCR方法,本研究根据GenBank登录的相关病毒基因序列设计特异引物,通过优化引物组合及PCR反应条件,建立可同时检测5种病毒的方法,扩增片段长度分别为411 bp(JEV)、945 bp(TBEV)、193 bp(EEEV)、545 bp(WEEV)和769 bp(CHIKV);该方法具有良好的特异性,对病毒核酸最低检测拷贝数分别为7.1×103、3.6×103、2.2×103、5.6×103和5.1×103。该方法具有特异性强、灵敏度高、操作简便等优点,为以上5种人兽共患脑炎病病毒提供快速检测手段。

关键词：流行性乙型脑炎病毒森林脑炎病毒东方马脑炎病毒西方马脑炎病毒基孔肯雅病毒多重RT-PCR

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马传染性贫血病毒p26蛋白单克隆抗体的制备

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中国预防兽医学报 2011年第7期33卷 565-567页

作者：韩秀娥张萍王雪峰李萌魏萍周建华尹杰超东北农业大学黑龙江省乳品工业技术开发中心黑龙江哈尔滨150030 东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物病研究室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学生命科学院黑龙江哈尔滨150030

为制备马传染性贫血病毒(EIAV)的单克隆抗体(MAb),本研究以原核表达并纯化的EIAVp26蛋白作为免疫原免疫8周龄的BALB/c小鼠,利用淋巴细胞杂交瘤技术,建立抗EIAV衣壳蛋白p26抗体的杂交瘤细胞。应用重组p26蛋白为抗原建立ELISA筛选方法,获... 详细信息

为制备马传染性贫血病毒(EIAV)的单克隆抗体(MAb),本研究以原核表达并纯化的EIAVp26蛋白作为免疫原免疫8周龄的BALB/c小鼠,利用淋巴细胞杂交瘤技术,建立抗EIAV衣壳蛋白p26抗体的杂交瘤细胞。应用重组p26蛋白为抗原建立ELISA筛选方法,获得两株能够稳定分泌特异性MAb的杂交瘤细胞株,分别命名为E11和F8。经试验证明,这些抗p26MAb均能够与感染驴胎皮肤细胞的EIAV和经SDS-PAGE分离的EIAV总蛋白中的p26蛋白结合。这两株p26蛋白MAb的获得将为EIAV的检测及鉴别诊断奠定基础。

关键词：马传染性贫血病毒 p26蛋白单克隆抗体

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H9亚型禽流感病毒血凝素蛋白在原核系统中的表达

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东北农业大学学报 2011年第12期42卷 86-90页

作者：石锐包红梅姜永萍乔传玲陈化兰王秀荣陈维多黑龙江民族职业学院哈尔滨150081 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室及兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001 东北农业大学生命科学学院哈尔滨150030

应用带有His6尾的pET原核表达系统对禽流感病毒血凝素蛋白进行表达,将禽流感A/Turkey/Wisconsin/66(H9N2)的HA基因克隆至原核表达载体pET-30a中,经酶切、PCR扩增和测序分析确证其插入,并且阅读框正确,获得重组质粒pET30a-H9。将此重组... 详细信息

应用带有His6尾的pET原核表达系统对禽流感病毒血凝素蛋白进行表达,将禽流感A/Turkey/Wisconsin/66(H9N2)的HA基因克隆至原核表达载体pET-30a中,经酶切、PCR扩增和测序分析确证其插入,并且阅读框正确,获得重组质粒pET30a-H9。将此重组质粒转化到宿主菌BL21中,用诱导剂异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)进行诱导,产物处理后进行SDS-PAGE电泳、免疫印迹和薄层扫描分析。结果发现HA蛋白可被大量表达,主要以包涵体形式存在,表达产物分子质量约64 ku,与理论推测值一致;菌液OD600值为1.0、IPTG终浓度为0.3 mmol.L-1、诱导时间4 h,其蛋白表达量最大,约占菌体蛋白总量的35%左右;通过免疫印迹试验发现,表达的蛋白可被禽流感H9亚型阳性血清特异性识别。研究结果表明,可以用原核表达系统对禽流感病毒血凝素蛋白进行表达,其产物具有免疫原性,可以用作禽流感抗体检测的免疫诊断试剂。

关键词：禽流感 H9 原核表达

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中国3种旧大陆猴TRIMCyp嵌合基因的存在状况及基因特性研究

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中国预防兽医学报 2011年第8期33卷 615-619页

作者：那雷于长清季芳汤艳东李亮林跃智吕晓玲刘晓明郑永辉周建华曲娟娟东北农业大学生命科学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物病研究室黑龙江哈尔滨150001 广东省昆虫研究所华南灵长类研发中心广东广州510030 Microbiology and Molecular Genetics Michigan State University

本研究应用PCR方法检测了中国3种旧大陆猴(恒河猴、食蟹猴及藏酋猴)的TRIMCyp嵌合基因型个体的存在状况,并首次发现携带TRIMCyp嵌合基因中国品系恒河猴。同时本实验应用建立RT-PCR方法在mRNA水平上进一步检测了恒河猴和食蟹猴的TRIMCyp... 详细信息

本研究应用PCR方法检测了中国3种旧大陆猴(恒河猴、食蟹猴及藏酋猴)的TRIMCyp嵌合基因型个体的存在状况,并首次发现携带TRIMCyp嵌合基因中国品系恒河猴。同时本实验应用建立RT-PCR方法在mRNA水平上进一步检测了恒河猴和食蟹猴的TRIMCyp嵌合基因序列和特性。其编码的融合蛋白TRIMCyp丧失了对HIV-1复制的限制功能,推测具有该基因型旧大陆猴对HIV-1更易感,可用于建立新型的艾滋病非人灵长类动物模型。本研究结果将促进逆转录病毒跨种间传播的研究和建立HIV-1易感非人灵长类动物模型。

关键词： RT-PCR 中国旧世纪猴 TRIMCyp HIV-1

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现代生物技术在猪病诊断和防治中的应用

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猪业科学 2011年第8期28卷 32-37页

作者：崔宇超崔尚金中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

生物技术是指应用生命科学研究成果,以人们意志设计,对生物或生物的成分进行改造和利用的技术。现在,多种猪病混合感染严重威胁着我国的养猪业。本文简述了生物技术在猪病的诊断和防治中的部分应用。生物技术在猪病诊断中的应用主要包... 详细信息

生物技术是指应用生命科学研究成果,以人们意志设计,对生物或生物的成分进行改造和利用的技术。现在,多种猪病混合感染严重威胁着我国的养猪业。本文简述了生物技术在猪病的诊断和防治中的部分应用。生物技术在猪病诊断中的应用主要包括蛋白的克隆表达与纯化技术,从而做成敏感性、特异性高的试剂盒;生物技术在猪病防治中的应用主要包括研单位疫苗、(非复制性及)活载体疫苗和干扰素等。生物技术在猪病的诊断和防治中还有很多其他应用,本文只是抛砖引玉。

关键词：生物技术猪病诊断防治

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重组腺病毒rAd-H5HA-EGFP对小鼠免疫保护性的研究

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中国兽医学报 2011年第1期31卷 1-5页

作者：吴运谱乔传玲杨焕良展小过陈艳辛晓光陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001 辽宁省动物疫病预防控制中心辽宁沈阳110164 辽宁省动物医学研究院辽宁沈阳110164

将重组腺病毒rAd-H5HA-EGFP以不同免疫剂量接种BALB/c小鼠,通过检测小鼠免疫后的抗体以及抵抗H5N1亚型流感病毒攻击的保护对rAd-H5HA-EGFP的免疫保护性进行了评估。分别以108 TCID50、107 TCID50的rAd5-H5HA-EGFP免疫小鼠,初次免疫后3... 详细信息

将重组腺病毒rAd-H5HA-EGFP以不同免疫剂量接种BALB/c小鼠,通过检测小鼠免疫后的抗体以及抵抗H5N1亚型流感病毒攻击的保护对rAd-H5HA-EGFP的免疫保护性进行了评估。分别以108 TCID50、107 TCID50的rAd5-H5HA-EGFP免疫小鼠,初次免疫后3周进行加强,剂量为2×108 TCID50和2×107 TCID50,同时以接种rAd5-EGFP和PBS的小鼠作为对照。二免后3周,将各组试验小鼠随机分为2组,分别应用106 EID50的SW/FJ/1/01株和CK/HuN/77/05两株H5N1亚型流感病毒进行攻击。结果显示,重组病毒108 TCID50和107 TCID50的免疫剂量均能够诱导高水平的HI抗体生成,rAd-H5HA-EGFP免疫小鼠在受到病毒SW/FJ/1/01和CK/HuN/77/05攻击后,与接种腺病毒rAd-EGFP和PBS的对照组小鼠相比,没有出现明显的体质量减轻,攻毒后病毒在免疫小鼠体内的复制被完全或部分抑制,脏器内检测到的病毒含量明显低于对照组小鼠;免疫小鼠在受到CK/HuN/77/05毒株攻击时,没有出现死亡(0/5),而接种rAd-EGFP和PBS的对照组小鼠均有死亡,死亡比例分别为4/5和5/5。以上结果表明,该重组rAd-H5HA-EGFP对小鼠具有良好的免疫保护性,有望成为1株新型H5N1亚型动物流感疫苗的候选重组毒株。

关键词：重组腺病毒 rAd-H5HA-EGFP 流感病毒 H5N1亚型免疫保护性

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猪传染性胃肠炎的综合防制

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兽医导刊 2011年第3期 27-28页

作者：陈建飞冯力时洪艳中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

猪传染性胃肠炎（TGE）是由尼多目、冠状病毒科的猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）引起的猪的一种高度接触传染性的肠道疾病，以引起14日龄以内仔猪呕吐、严重腹泻和高死亡率（可高达100％）为特征。虽然不同年龄的猪对该病毒均易感，但5周... 详细信息

猪传染性胃肠炎（TGE）是由尼多目、冠状病毒科的猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）引起的猪的一种高度接触传染性的肠道疾病，以引起14日龄以内仔猪呕吐、严重腹泻和高死亡率（可高达100％）为特征。虽然不同年龄的猪对该病毒均易感，但5周龄以上猪的死亡率则很低。1945年Doyle和Hutchings首次报道美国发生了本病，

关键词：猪传染性胃肠炎病毒综合防制接触传染性冠状病毒科肠道疾病死亡率呕吐仔猪

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Genomic Sequencing and Molecular Characteristics of A Very Virulent Strain of Infectious Bursal Disease Virus Isolated in China

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Agricultural Science & Technology 2011年第12期12卷 1946-1949页

作者：祁小乐高立秦立廷邓小芸吴关张礼洲余飞任宪刚高玉龙高宏雷王永强王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

[Objective] The paper was to determine the genomic sequence of a very virulent strain of infectious bursal disease virus（IBDV）,and study its molecular characteristics.[Method] A very virulent strain（vvIBDV）（HLJ-0504） of infectious bursal disease virus（IBDV） with special characters was isolated in China and its genome was sequenced.[Result] Sequence analysis showed that segment A of HLJ-0504 was derived from vvIBDV,while segment B was from a distinct *** morbidity and mortality of HLJ-0504 was 100% and 86.7%to SPF chickens,respectively.[Conclusion] vvIBDV with distinct segment B were still circulating and the evolution of IBDV was diversified in ***,it is hard to imagine that the virulence of IBDV is determined solely by segment A or B.

关键词： Infectious bursal disease virus（IBDV） Genome Evolution Virulence

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猪干扰素基因在腺病毒的表达及应用

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养猪 2011年第3期 61-64页

作者：崔尚金中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

多年来,疫苗免疫接种一直是一种预防大范围传染病暴发的有效措施之一。目前被广泛用来进行免疫控制传染病以及自身免疫病和癌症等疾病的治疗。免疫接种的优点是促使先天性免疫细胞产生免疫记忆细胞,从而使机体针对特定的病原体产生持久... 详细信息

多年来,疫苗免疫接种一直是一种预防大范围传染病暴发的有效措施之一。目前被广泛用来进行免疫控制传染病以及自身免疫病和癌症等疾病的治疗。免疫接种的优点是促使先天性免疫细胞产生免疫记忆细胞,从而使机体针对特定的病原体产生持久的免疫保护。

关键词：干扰素基因腺病毒疫苗免疫接种应用自身免疫病免疫控制记忆细胞免疫细胞

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