检索结果-内蒙古大学图书馆

黑龙江畜牧兽医 2010年第3期 119-121页

作者：李海忠符芳张永欣李曦宋淑萍中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学黑龙江哈尔滨150030

为了研究PCV2 Cap蛋白的检测方法,试验应用哈尔滨兽医研究所猪传染病研究室猪病分子诊断组已构建的基因工程重组菌NLS-Cap M15,经IPTG诱导表达获得原核表达Ⅱ型猪圆环病毒Cap蛋白,经亲和层析纯化后免疫6周龄Balb/c小鼠,取其脾细胞与SP2/... 详细信息

为了研究PCV2 Cap蛋白的检测方法,试验应用哈尔滨兽医研究所猪传染病研究室猪病分子诊断组已构建的基因工程重组菌NLS-Cap M15,经IPTG诱导表达获得原核表达Ⅱ型猪圆环病毒Cap蛋白,经亲和层析纯化后免疫6周龄Balb/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,经间接ELISA筛选获得了3株分泌Cap蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞,分别命名为2C3、2F3、1E10。结果表明:2C3、2F3均属于IgG1型,1E10属于IgG2a亚型,轻链都是κ链;经Western-blot检测,获得的3株单抗均可以特异性的识别Cap蛋白;ELISA检测其腹水效价均为1.0×105;间接免疫荧光检测单抗2C3、2F3、1E10反应均为阳性,表明这3株单抗能够识别PCV2病毒。

关键词： Ⅱ型猪圆环病毒 Cap蛋白单克隆抗体

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荧光定量RT-PCR检测高致病性PRRSV疫苗免疫仔猪攻毒前后抗原在体内的动态分布

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黑龙江畜牧兽医 2010年第5期 14-16页

作者：李丽琴蔡雪辉刘永刚王淑杰荣福龙石文达徐明明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学黑龙江哈尔滨150030

为了更好地了解高致病性PRRSV疫苗的免疫机理,试验应用荧光定量RT-PCR方法比较了PRRSV变异株(HuN4)活疫苗和PRRSV变异株(JXA1)灭活苗免疫仔猪攻毒前后PRRSV在体内动态分布的差异。结果表明:HuN4活疫苗组攻毒后,病毒在各组织中的含量明... 详细信息

为了更好地了解高致病性PRRSV疫苗的免疫机理,试验应用荧光定量RT-PCR方法比较了PRRSV变异株(HuN4)活疫苗和PRRSV变异株(JXA1)灭活苗免疫仔猪攻毒前后PRRSV在体内动态分布的差异。结果表明:HuN4活疫苗组攻毒后,病毒在各组织中的含量明显低于JXA1灭活苗组和对照组;JXA1灭活苗组攻毒后,病毒在各组织中的分布、载量与对照组相似,但较对照组轻。说明HuN4活疫苗免疫仔猪攻毒后,能明显抑制病毒在各组织中的复制,其免疫效果明显优于JXA1灭活苗。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒荧光定量RT-PCR 抗原的动态分布

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网状内皮组织增生病病毒反向遗传操作系统的建立

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中国预防兽医学报 2010年第9期32卷 659-663页

作者：邓小芸祁小乐高玉龙高宏雷秦立廷高立王永强王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 黑龙江畜牧兽医职业学院黑龙江双城150111

为建立网状内皮组织增生病病毒(REV)的反向遗传操作系统,本研究分别以6个含有连续并且部分重叠的REV HLJR0901株基因组片段的重组质粒为模板,通过重叠延伸PCR(SOE PCR)和酶切拼接将HLJR0901的全基因组克隆于pBluescriptⅡ载体中,并在基... 详细信息

为建立网状内皮组织增生病病毒(REV)的反向遗传操作系统,本研究分别以6个含有连续并且部分重叠的REV HLJR0901株基因组片段的重组质粒为模板,通过重叠延伸PCR(SOE PCR)和酶切拼接将HLJR0901的全基因组克隆于pBluescriptⅡ载体中,并在基因组中通过改变核苷酸(C2250G)消除了其中的MscⅠ酶切位点作为分子标签,构建了REV感染性分子克隆pBlu-mHLJR0901。测序结果表明,REV HLJR0901株前病毒DNA全长为8284bp。将pBlu-mHLJR0901转染鸡胚成纤维细胞(CEF)进行病毒拯救,间接免疫荧光、PCR、测序及电镜观察表明拯救出REV。其拯救的REV在CEF细胞上具有与亲本毒相似的复制特性。该反向遗传操作系统的建立为REV的深入研究提供了有效的技术操作平台。

关键词：网状内皮组织增生病感染性分子克隆病毒拯救

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乙型脑炎病毒E蛋白Ⅰ、Ⅱ结构域抗原表位鉴定

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中国预防兽医学报 2010年第1期32卷 56-60页

作者：闫丽萍华荣虹亓文宝周艳君李国新于海姜一峰田志军童光志中国农业科学院上海兽医研究所上海200241 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 华南农业大学兽医学院广东广州510642

为鉴定乙型脑炎病毒(JEV)E蛋白I,II结构域抗原表位,本研究设计了一系列针对E蛋白的I、II结构域(1aa～296aa)部分重叠短肽,分别进行GST融合表达,用JEV阳性血清进行western blot和ELISA反应性筛选,获得了5个线性抗原表位分别为:E1(1FNCLGM... 详细信息

为鉴定乙型脑炎病毒(JEV)E蛋白I,II结构域抗原表位,本研究设计了一系列针对E蛋白的I、II结构域(1aa～296aa)部分重叠短肽,分别进行GST融合表达,用JEV阳性血清进行western blot和ELISA反应性筛选,获得了5个线性抗原表位分别为:E1(1FNCLGMGNRDFIEGAS16)、E10-4(77TGEAHNEK84)、E11-2(83EKRADSS YVCKQ94)、E19(145GTTTSENHGNYSAQVG160)和E33(257SQEGGLHHALAGAIVV272)。除E10和E19外,其它表位均为第一次通过实验方法确定的。将这5个融合蛋白对小鼠进行免疫,获得了高滴度的针对5个融合短肽的抗血清,研究证明了这些表位具有良好的免疫原性。本研究为乙型脑炎特异性诊断试剂及表位疫苗的开发奠定了基础。

关键词：乙型脑炎病毒 E蛋白抗原表位

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表达H5亚型禽流感病毒HA基因重组火鸡疱疹病毒的构建

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中国预防兽医学报 2010年第5期32卷 329-333页

作者：高宏博崔红玉石星明赵妍赵晓岩全炎铭董鹏闫帅黄婷婷杨瑞王玫王云峰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 河北北方学院动物科技学院/动物医学系河北张家口075131

为构建表达禽流感病毒(AIV)血凝素(HA)基因的重组疱疹病毒(HVT),本研究将AIV A/Goose/Guangdong/3/96(H5N1)的HA基因克隆于真核表达质粒中,构建了转移载体pUAB-gpt-HA。通过同源重组及霉酚酸筛选技术,将HA基因表达盒插入到HVT US10基因... 详细信息

为构建表达禽流感病毒(AIV)血凝素(HA)基因的重组疱疹病毒(HVT),本研究将AIV A/Goose/Guangdong/3/96(H5N1)的HA基因克隆于真核表达质粒中,构建了转移载体pUAB-gpt-HA。通过同源重组及霉酚酸筛选技术,将HA基因表达盒插入到HVT US10基因区,构建了一株表达H5亚型AIV HA基因的重组病毒HVT(rHVT-US10-HA)。经PCR、间接免疫荧光、western blot及红细胞凝集试验鉴定,重组病毒能稳定表达具有生物学活性的HA蛋白。rHVT-US10-HA的构建为禽流感基因工程病毒活载体疫苗的研究奠定了基础。

关键词：禽流感病毒重组火鸡疱疹病毒 HA基因

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结核分枝杆菌csdA基因的原核表达及其免疫原性

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中国兽医科学 2010年第12期40卷 1232-1235页

作者：王华南亓英芳杜艳芬刘慧芳司微于申业王加明杨盛李素兰冯拥军倪洪波王春来刘思国中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室黑龙江哈尔滨150001 新疆生产建设兵团农十师畜牧兽医站新疆阿勒泰836000

以结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA为模板,采用PCR方法扩增出1 690 bp的csdA(cold-shock dead-box protein A)基因,经限制性酶切后,与pET28a载体连接,转化到大肠杆菌BL21中后,重组菌经0.2 mmol/L IPTG诱导表达了csdA蛋白及Ni-His-resin纯化蛋白,经Western-blot分析,鉴定了目的蛋白的反应原性。试验结果表明,重组质粒的双酶切鉴定和DNA测序均正确;SDS-PAGE和Western-blot分析结果显示,在64 ku处获得一目的条带,具有很好的免疫原性。证实,成功构建了重组表达质粒pET28a-csdA,获得了高纯度的重组蛋白,为深入研究csdA蛋白的功能奠定了基础。

关键词：结核分枝杆菌 csdA基因原核表达

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S2基因失活突变马传染性贫血病毒感染性克隆的构建及感染性研究

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中国预防兽医学报 2010年第7期32卷 499-502页

作者：耿庆华郭巍赵立平吕晓玲相文华周建华中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物病研究室黑龙江哈尔滨150001 沈阳出入境检验检疫局辽宁沈阳110016

为研制马传染性贫血病毒(EIAV)标记疫苗株,本研究在EIAV驴胎皮肤(FDD)细胞弱毒疫苗株感染性克隆pEIAVFDDV3-8的S2基因内部引入两个终止密码子,致使S2基因终止表达,构建了一株S2基因突变的感染性克隆pEIAVFDDV3-8△S2。用该重组质粒转染... 详细信息

为研制马传染性贫血病毒(EIAV)标记疫苗株,本研究在EIAV驴胎皮肤(FDD)细胞弱毒疫苗株感染性克隆pEIAVFDDV3-8的S2基因内部引入两个终止密码子,致使S2基因终止表达,构建了一株S2基因突变的感染性克隆pEIAVFDDV3-8△S2。用该重组质粒转染FDD细胞,盲传至第4代时,转染细胞病变明显,电镜下可见细胞内的典型病毒颗粒。反转录酶活性检测和Real-time PCR对病毒拷贝数的检测均证明,获得了EIAVS2基因终止表达的感染性克隆毒株,命名为EIAVFDDV3-8△S2。

关键词：马传染性贫血病毒感染性克隆 S2基因缺失

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Asia 1型口蹄疫病毒VP1基因的表达鉴定及其多抗制备

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中国预防兽医学报 2010年第4期32卷 285-288页

作者：朱远茂任宪刚史鸿飞高欲燃于作冯军科相文华薛飞东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 哈药集团生物疫苗有限公司黑龙江哈尔滨150030

本研究旨在表达口蹄疫病毒(FMDV)的VP1全基因并制备特异性的多克隆抗体。利用PCR方法扩增Asia 1 IND 49197株VP1全基因,将其克隆至原核表达载体pET-30a(+)中,在大肠杆菌BL21中进行表达。SDS-PAGE结果显示表达产物分子量约为31.6ku,以包... 详细信息

本研究旨在表达口蹄疫病毒(FMDV)的VP1全基因并制备特异性的多克隆抗体。利用PCR方法扩增Asia 1 IND 49197株VP1全基因,将其克隆至原核表达载体pET-30a(+)中,在大肠杆菌BL21中进行表达。SDS-PAGE结果显示表达产物分子量约为31.6ku,以包涵体的形式存在。通过Ni-NTA Purification System纯化后进行western blot和间接ELISA分析,结果显示重组蛋白能够被FMD阳性血清识别,具有良好的反应性。将纯化的重组蛋白免疫新西兰白兔制备多克隆抗体,ELISA测定抗体效价为1∶20480,病毒中和试验测定抗体效价为1∶64。本研究所表达的VP1蛋白可用于开发检测Asia1口蹄疫抗体的诊断试剂,所制备的多克隆抗体为进一步研究VP1的结构、功能以及抗原表位的鉴定提供了条件。

关键词： Asia I口蹄疫病毒 VP1基因多克隆抗体

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猪瘟病毒NS3蛋白的重组表达及其单克隆抗体的制备

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中国兽医科学 2010年第2期40卷 144-149页

作者：常天明孙元李宏宇贺番李淼黄俊华仇华吉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 内蒙古农业大学动物科学与医学学院内蒙古呼和浩特010018

以含有猪瘟病毒(CSFV)石门株全长cDNA的重组质粒pOKShimen为模板,经PCR扩增获得NS3基因,利用原核表达载体pMAL-c2X、pET32a以及杆状病毒表达载体pFastBacH T B表达CSFV石门株NS3基因,获得3种重组蛋白:MBP-NS3、His-NS3和rNS3。Western-blot分析及间接免疫荧光试验证实,这3种不同载体表达的NS3蛋白均能被猪瘟阳性血清所识别。利用直链淀粉树脂柱对重组蛋白MBP-NS3进行纯化后,用其免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与SP2/0细胞融合,用间接ELISA筛选,获得2株能稳定传代并分泌针对抗CSFVNS3蛋白单克隆抗体的细胞株,命名为1D10和1H10。Western-blot分析及间接免疫荧光试验结果证明,这2株杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体均可识别CSFVNS3蛋白。

关键词：猪瘟病毒 NS3基因单克隆抗体

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共表达猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5基因和猪瘟病毒E2基因的重组腺病毒的构建及其在小鼠模型上的免疫原性分析

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中国预防兽医学报 2010年第3期32卷 161-166页

作者：李宏宇孙元常天明贺番黄俊华仇华吉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 内蒙古农业大学动物科学与医学学院内蒙古呼和浩特010018

本研究旨在以复制缺陷型人5型腺病毒为载体,构建一株同时表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)变异株GP5蛋白和猪瘟病毒(CSFV)E2蛋白的重组腺病毒疫苗。首先利用重叠PCR将GP5和E2基因通过口蹄疫病毒(FMDV)2A序列连接,形成一个完整的ORF,... 详细信息

本研究旨在以复制缺陷型人5型腺病毒为载体,构建一株同时表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)变异株GP5蛋白和猪瘟病毒(CSFV)E2蛋白的重组腺病毒疫苗。首先利用重叠PCR将GP5和E2基因通过口蹄疫病毒(FMDV)2A序列连接,形成一个完整的ORF,并将其克隆到腺病毒穿梭载体中,通过细菌内同源重组构建共表达PRRSVGP5蛋白和CSFVE2蛋白的重组腺病毒(rAdV-GP52AE2)。间接免疫荧光试验和western blot检测证实2个外源基因均获得表达。在小鼠上进行的免疫效力评价结果显示,rAdV-GP52AE2免疫组针对CSFV的中和抗体滴度可达1∶128,针对PRRSV的中和抗体滴度为1∶16;在淋巴细胞增殖试验中,免疫组与阴性对照组在增殖指数上有显著差异,表明该重组腺病毒可以同时诱导抗PRRSV和CSFV的特异性体液免疫和细胞免疫。这些结果显示,利用具有自动剪切功能的FMDV2A多肽构建的重组腺病毒有望开发成一种同时预防PRRS和CSF的新型载体疫苗。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒猪瘟病毒重组腺病毒免疫原性

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