检索结果-内蒙古大学图书馆

H5N1亚型人禽流感病毒A/Anhui/2/2005株反向遗传操作系统的建立

中国预防兽医学报 2010年第2期32卷 135-138页

作者：冯华朋钟功勋张月梅李旭勇李雁冰施建忠陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001 内蒙古农业大学动物科学与医学学院内蒙古呼和浩特010018

为建立H5N1亚型人源禽流感病毒A/Anhui/2/2005(W-AH05)反向遗传操作系统,本研究构建了W-AH05的8重组质粒,拯救出人源禽流感病毒R-A/Anhui/2/2005(R-AH05)。全基因序列测定结果表明,救获病毒R-AH05与野生病毒W-AH05的核苷酸序列完全一致... 详细信息

为建立H5N1亚型人源禽流感病毒A/Anhui/2/2005(W-AH05)反向遗传操作系统,本研究构建了W-AH05的8重组质粒,拯救出人源禽流感病毒R-A/Anhui/2/2005(R-AH05)。全基因序列测定结果表明,救获病毒R-AH05与野生病毒W-AH05的核苷酸序列完全一致;动物试验证实,R-AH05保持了W-AH05的对BALB/c小鼠呈高致病力的特性,其MLD50分别为1.5log10EID50和1.2log10EID50。R-AH0与W-AH05分别以106EID50剂量鼻腔感染BALB/c小鼠,病毒在小鼠体内的分布情况及各个脏器中的病毒滴度基本相同。由此可见,R-AH05保持了W-AH05的生物学特性,从而为进一步研究人源禽流感病毒的致病机理及跨宿主传播机制等提供了操作平台。

关键词： H5N1 人源禽流感病毒反向遗传操作

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禽网状内皮组织增生症流行现状及检测技术研究进展

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动物医学进展 2010年第9期31卷 93-96页

作者：邓小芸祁小乐高玉龙高宏雷秦立廷王永强王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 黑龙江畜牧兽医职业学院黑龙江双城150111

禽网状内皮组织增生症(RE)是禽类一种重要的致瘤性和免疫抑制性疾病。近年来,国内外鸡群中网状内皮组织增生症病毒(REV)流行比较严重;REV与马立克病病毒(MDV)、鸡贫血病病毒(CAV)和J亚群禽白血病病毒(Avianleukosis virus subgroup J,AL... 详细信息

禽网状内皮组织增生症(RE)是禽类一种重要的致瘤性和免疫抑制性疾病。近年来,国内外鸡群中网状内皮组织增生症病毒(REV)流行比较严重;REV与马立克病病毒(MDV)、鸡贫血病病毒(CAV)和J亚群禽白血病病毒(Avianleukosis virus subgroup J,ALV-J)几种免疫抑制性病毒的混合感染在我国部分养鸡场中均普遍存在,使得鸡群处于免疫力低下的状态,导致禽流感、新城疫等重要疫苗免疫失败,并容易造成继发感染,使疫病的诊断和防控难度加大。另外,REV可以整合到MDV和鸡痘病毒(Fowlpox virus,FPV)基因组中,从而导致商品化疫苗受到污染,并可用做将外源基因插入到鸡和哺乳动物细胞内的表达载体;基于REV传统检测方法的基础上,新型的分子生物学检测技术如PCR、实时荧光PCR、LAMP提高了诊断REV的敏感性和特异性。

关键词：禽网状内皮组织增生症流行感染基因重组检测技术

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H5N1亚型禽流感病毒对鸭的致病性研究

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中国预防兽医学报 2010年第4期32卷 301-303页

作者：许静宋家升苏胜杰李雁冰施建忠陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感开放实验室黑龙江哈尔滨150001 内蒙古农业大学动物科学与医学学院内蒙古呼和浩特010018

为评估H5N1亚型禽流感病毒(AIV)在实验室环境下对鸭的致病力,本研究以无特殊病原(SPF)鸭为模型,对我国近年分离的7株病毒进行了致病力分析。结果发现其中4株病毒对鸭致死率为100%,2株病毒对鸭的致死率分别为60%和80%,另外1株病毒,A/goos... 详细信息

为评估H5N1亚型禽流感病毒(AIV)在实验室环境下对鸭的致病力,本研究以无特殊病原(SPF)鸭为模型,对我国近年分离的7株病毒进行了致病力分析。结果发现其中4株病毒对鸭致死率为100%,2株病毒对鸭的致死率分别为60%和80%,另外1株病毒,A/goose/Hubei/51/05(GS/HB/51/05),对鸭无致病力。本研究还发现,与高致病力毒株一样,GS/HB/51/05也可在鸭体内呈全身性复制,并且可通过喉头和泻殖腔向外排泄。我们推测GS/HB/51/05可能是中国南方出现的其他对鸭呈高致病力的H5N1病毒的祖先,对这些病毒的系统研究,可揭示H5N1亚型AIV对鸭的致病力遗传机制。

关键词：禽流感病毒 H5N1亚型感染鸭

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A型禽流感病毒不同拷贝数基质蛋白胞外区基因的原核表达及免疫保护力研究

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中国预防兽医学报 2010年第10期32卷 795-799页

作者：李洪涛张新涛刘明刘春国杜金玲石薇琳孙恩成中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感开放实验室及国家禽流感参考实验室/OIE禽流感参考实验室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319

为研究含禽流感病毒(AIV)不同拷贝数基质蛋白胞外功能区(M2e)亚单位疫苗在SPF鸡体中的免疫保护效力差异,根据已发表的高致病性AIV M2基因序列设计合成两对引物,利用PCR技术扩增单个M2e基因片段,以此为基础顺次串联得到不同拷贝数的M2e... 详细信息

为研究含禽流感病毒(AIV)不同拷贝数基质蛋白胞外功能区(M2e)亚单位疫苗在SPF鸡体中的免疫保护效力差异,根据已发表的高致病性AIV M2基因序列设计合成两对引物,利用PCR技术扩增单个M2e基因片段,以此为基础顺次串联得到不同拷贝数的M2e基因片段,并将其克隆到pMAL-C2x载体中,构建不同拷贝数的A型AIV M2e基因的重组表达质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE鉴定。表达产物经纯化后免疫家兔、SPF鸡,制备抗M2e融合蛋白的多克隆抗体。Western blot和间接免疫荧光试验检测纯化的融合蛋白免疫原性,间接ELISA测定鸡血清抗体水平,表明MBP-3M2e融合蛋白的抗体水平较高,且MBP-3M2e亚单位疫苗产生最好的免疫保护力。

关键词： A型禽流感病毒 M2e基因原核表达多克隆抗体免疫保护力

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鸡马立克氏病病毒细菌人工染色体技术展望

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中国家禽 2010年第3期32卷 8-12页

作者：董鹏崔红玉王云峰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 河北北方学院动物科技学院河北张家口075131

鸡马立克氏病病毒反向遗传操纵技术的发展促进了对其生物学特性研究的不断深入,文章回顾了MDV基因操纵技术的发展历程,综述了MDV细菌人工染色体的特点、构建策略、研究进展、应用局限性及未来发展潜力。

关键词：鸡马立克氏病病毒细菌人工染色体

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通过暂时免疫抑制研究跨膜蛋白C末端缺失对EIAV疫苗株EIAV_(FDDV12)体内复制的影响

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中国预防兽医学报 2010年第11期32卷 829-833页

作者：姜成刚马建林跃智赵立平吕晓玲华育平刘娣周建华黑龙江省农业科学院畜牧研究中心博士后工作站黑龙江哈尔滨150086 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物病研究室黑龙江哈尔滨150001 东北林业大学博士后流动站黑龙江哈尔滨150086

马传染性贫血病毒(EIAV)减毒疫苗是世界首例慢病毒疫苗,但其作用机理尚不明了。我们的前期研究发现EIAV疫苗株EIAVFDDV12编码跨膜蛋白gp45的基因在马体内发生高频率G2230A点突变形成终止子,使该蛋白C末端出现154个氨基酸的截短。为了探... 详细信息

马传染性贫血病毒(EIAV)减毒疫苗是世界首例慢病毒疫苗,但其作用机理尚不明了。我们的前期研究发现EIAV疫苗株EIAVFDDV12编码跨膜蛋白gp45的基因在马体内发生高频率G2230A点突变形成终止子,使该蛋白C末端出现154个氨基酸的截短。为了探讨该截短蛋白对EIAV疫苗株生物学特性的作用,本研究以EIAV弱毒疫苗株感染性克隆基础上,构建了gp45截短型感染性克隆,脂质体转染细胞,增殖传代,获得病毒株EIAVFDDVTM-36,接种到马体内。在接种后167 d内未观察到临床症状,连续注射10 d地塞米松以暂时抑制免疫系统,并用迟发性超敏反应和淋巴细胞增殖实验评价免疫抑制效果。结果显示,截短型跨膜蛋白疫苗株EIAVFDDVTM-36接种组免疫抑制前后病毒载量和中和抗体效价差异不显著,而完整型跨膜蛋白疫苗株感染性克隆EIAVFDDVTM-45接种组4匹马中3匹免疫抑制后病毒载量显著上升,同时组内中和抗体效价明显提高。以上结果表明,马体特异性免疫压力对EIAVFDDVTM-36复制无影响,而对亲本株EIAVFDDVTM-45复制有抑制,显示跨膜蛋白截短型EIAV作为疫苗更为安全。但免疫抑制造成的gp45跨膜蛋白未截短型疫苗株感染性克隆体内病毒载量升高,可以促使机体产生更高的中和抗体效价,提示该疫苗的安全性和有效性在一定程度内呈负相关(相互制约)。因此,安全性和有效性的平衡是慢病毒减毒疫苗研发需注意的重要因素。

关键词：马传染性贫血病毒跨膜蛋白截短突变体内复制免疫抑制

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猪细小病毒NS2基因mRNA的克隆和序列分析

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黑龙江畜牧兽医 2010年第6期 23-25页

作者：祝超姚贵哲钱爱东崔尚金刘芹防张超范张振梅吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

为了研究NS2基因的表达及其功能,试验用猪细小病毒PPV-BQ株接种传代培养的ST细胞,并提取复制过程中的总RNA,反转录成cDNA;通过RT-PCR扩增出NS2基因mRNA的片段(长约486bp)和NS2基因前体mRNA片段(长约1959bp);分别将2个目的片段克隆到pMD1... 详细信息

为了研究NS2基因的表达及其功能,试验用猪细小病毒PPV-BQ株接种传代培养的ST细胞,并提取复制过程中的总RNA,反转录成cDNA;通过RT-PCR扩增出NS2基因mRNA的片段(长约486bp)和NS2基因前体mRNA片段(长约1959bp);分别将2个目的片段克隆到pMD18-T载体上并进行序列测定和分析。结果表明:PPV-BQ株NS2基因mRNA片段与GenBank已发表的核苷酸序列同源性为97.4%～99.4%,推导氨基酸序列同源性为94.4%～98.8%。说明PPV-BQ株与四川SR-1分离株、加拿大Kresse分离株、美国NADL-2分离株亲缘关系较近。

关键词：猪细小病毒 mRNA 克隆序列分析

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流行性乙型脑炎病毒E蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

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中国兽医杂志 2010年第1期46卷 3-5页

作者：赵付荣华荣虹王斌陈娜莎阿合买提.买买提步志高新疆农业大学动物医学院新疆乌鲁木齐830052 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部兽医公共卫生重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

流行性乙型脑炎病毒(JEV)是一种严重危害人畜健康的虫媒病毒。表面囊膜蛋白(E蛋白)是该病毒的主要结构蛋白。本研究利用原核表达的乙型脑炎病毒SA14-14-2株结构蛋白E蛋白作为免疫原,免疫6周龄BALB/c小鼠,采用淋巴细胞杂交瘤技术进行融合... 详细信息

流行性乙型脑炎病毒(JEV)是一种严重危害人畜健康的虫媒病毒。表面囊膜蛋白(E蛋白)是该病毒的主要结构蛋白。本研究利用原核表达的乙型脑炎病毒SA14-14-2株结构蛋白E蛋白作为免疫原,免疫6周龄BALB/c小鼠,采用淋巴细胞杂交瘤技术进行融合,经有限稀释法获得1株特异性针对JEV E蛋白的杂交瘤细胞,命名为5D4,经测定5D4单抗亚类属于IgG2a,轻链为κ链。经Western blot证实所得杂交瘤细胞分泌的抗体可特异地与JEV E蛋白结合。结果表明,所制备的抗JEV E蛋白的单抗对病原检测具有很高的特异性,为JEV准确快速的病原诊断和JEV感染相关的基础性研究提供了物质基础。

关键词：乙型脑炎病毒 E蛋白单克隆抗体

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H5亚型高致病性禽流感病毒HA基因重组新城疫病毒活载体疫苗接种后气管黏膜损伤的研究

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黑龙江畜牧兽医 2010年第1期 7-10页

作者：董俊斌马学恩步志高内蒙古农业大学动物科学与医学学院内蒙古呼和浩特010018 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

为了研究H5亚型高致病性禽流感病毒HA基因重组新城疫病毒活载体疫苗[rLa Sota-HA(GD)]的免疫机理,用rLa Sota-HA(GD)免疫2日龄SPF雏鸡,分别在接种后的1,3,5,10,15,18天取气管进行电镜、光镜观察,利用免疫组化染色(IHC)方法检测病毒在气... 详细信息

为了研究H5亚型高致病性禽流感病毒HA基因重组新城疫病毒活载体疫苗[rLa Sota-HA(GD)]的免疫机理,用rLa Sota-HA(GD)免疫2日龄SPF雏鸡,分别在接种后的1,3,5,10,15,18天取气管进行电镜、光镜观察,利用免疫组化染色(IHC)方法检测病毒在气管内的分布。结果表明:接种rLa Sota-HA(GD)后第1天纤毛细胞有脱纤毛现象,杯状细胞破碎,黏液成分增多,黏膜下层的纤维裸露在表面上,并可看到纤毛细胞的纤毛上有球形粒子,杯状细胞、基细胞大量增生;接种后第18天纤毛细胞脱纤毛区域进一步增大。接种后第3天黏膜下层水肿,淋巴细胞、粒细胞、浆细胞浸润,黏膜上皮形成空泡状,表层由数层不成熟的细胞组成;接种后第10天腺体腔闭塞。免疫组化染色可见气管固有层细胞呈阳性反应,棕色颗粒出现在胞浆中。结果说明气管黏膜的损伤是机体重要的防御机制和免疫机制的表现。

关键词： H5亚型高致病性禽流感病毒 HA基因重组新城疫病毒气管黏膜损伤

来源：评论

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Real-time RT-PCR检测J亚群禽白血病病毒的研究

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黑龙江畜牧兽医 2010年第3期 106-108页

作者：张在平田进孟庆文马学恩内蒙古农业大学动物科学与医学学院内蒙古呼和浩特010018 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

为了建立检测J亚群禽白血病病毒(ALV-J)的方法,试验采用Real-time RT-PCR,通过1对ALV-J特异性引物对ALV-J山东分离株(命名为ALV-JSD株)进行特异性、敏感性和重复性试验;然后用ALV-JSD株感染1日龄SPF鸡,感染8周后剖检取各组织,用已建立... 详细信息

为了建立检测J亚群禽白血病病毒(ALV-J)的方法,试验采用Real-time RT-PCR,通过1对ALV-J特异性引物对ALV-J山东分离株(命名为ALV-JSD株)进行特异性、敏感性和重复性试验;然后用ALV-JSD株感染1日龄SPF鸡,感染8周后剖检取各组织,用已建立的方法检测ALV-LSD株的感染情况。结果表明:特异性试验中只有以ALV-JSD株cDNA为模板的反应管中能够检测到扩增曲线;敏感性试验测得反应灵敏度达到3.01×1010 copies/μL,比普通PCR灵敏100多倍;对人工感染鸡的不同组织样品进行3次重复检测,病毒检出率为100%;经重复性和实际临床样本检验证实,该方法稳定、可靠,为ALV-J的早期快速诊断建立了特异、灵敏、廉价的定量检测方法。

关键词： J亚群禽白血病病毒 SYBR Green Ⅰ Real-time RT-PCR

来源：评论

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