检索结果-内蒙古大学图书馆

畜牧兽医学报 2009年第6期40卷 952-957页

作者：甘一迪刘家森姜骞郭东春司昌德孟庆文韩凌霞刘娣曲连东中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／实验动物中心哈尔滨150001 黑龙江省农业科学院哈尔滨150001

通过RT-PCR方法扩增鸭肝炎病毒DHV-1：161/79/V、YH、HN株的VP1基因的核苷酸序列。系统发育分析表明,3株病毒与已发表的DHV-1结构基因VP1核苷酸和氨基酸的同源性分别为92.7%~96.9%和95.4%~96.6%,与DHV-1变异株核苷酸和氨基酸序列的相似... 详细信息

通过RT-PCR方法扩增鸭肝炎病毒DHV-1：161/79/V、YH、HN株的VP1基因的核苷酸序列。系统发育分析表明,3株病毒与已发表的DHV-1结构基因VP1核苷酸和氨基酸的同源性分别为92.7%~96.9%和95.4%~96.6%,与DHV-1变异株核苷酸和氨基酸序列的相似性均分别低于75%和88%,表明3株病毒属于DHV-1,与变异株是不同的血清型。强毒DHV-1：161/79/V的VP1蛋白第49和第183位氨基酸为T和H,弱毒DHV-1：YH、HN为S和Q,推测这2处位点的改变可能与病毒的强弱有关 DHV-1和其变异株的VP1蛋白均没有保守的RGD序列变异株N-DHV：90D、04G在第50和51位比DHV-1多2个氨基酸（Q和D）,在第147和185位各缺失1个氨基酸（E和L）,而在变异株DHV：AP-03337、AP-04009、AP-04114、AP-04203的第145和146位比DHV-1多了2个氨基酸（G、G）不同血清型的鸭肝炎病毒在46-64位、95-149位、180-223位抗原指数差别较大,推测这些位点的改变可能影响病毒的生物学特性。

关键词：鸭肝炎病毒(DHV) VP1基因序列分析

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猪肺炎霉形体p52基因重组腺病毒的构建及其免疫特性

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中国兽医科学 2009年第8期39卷 712-717页

作者：曹培丽李媛陈超郭丹王亮乔祖建辛九庆中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室黑龙江哈尔滨150001

为构建携带猪肺炎霉形体(Mycoplasma hyopneumoniae,Mhp)p52基因的重组腺病毒,从Mhp J株扩增p52基因,克隆到穿梭载体pShuttle-CMV中,经PmeⅠ线性化后,电转化入BJ5183菌内,与其含有的骨架载体pAdEasy-1同源重组,再与脂质体混合转染AD-29... 详细信息

为构建携带猪肺炎霉形体(Mycoplasma hyopneumoniae,Mhp)p52基因的重组腺病毒,从Mhp J株扩增p52基因,克隆到穿梭载体pShuttle-CMV中,经PmeⅠ线性化后,电转化入BJ5183菌内,与其含有的骨架载体pAdEasy-1同源重组,再与脂质体混合转染AD-293细胞,包装成完整的腺病毒,经RT-PCR、间接免疫荧光鉴定后扩增,收集病毒液,免疫BALB/c小鼠,并分析了体液免疫、黏膜免疫和细胞免疫效果。结果表明,重组质粒pShuttle-CMV-P52插入片段为1 202 bp;同源重组成功;重组腺病毒可以正确表达目的蛋白,效价达1×106TCID50/mL。重组病毒经肌肉注射和滴鼻均可诱导小鼠产生血清和肺匀浆液特异性IgG、SIgA,但不能诱导特异的淋巴细胞增殖。证实,成功构建了表达p52基因的重组腺病毒,该病毒可诱发小鼠产生特异的体液免疫和黏膜免疫,但不产生细胞免疫应答。

关键词：猪肺炎霉形体 p52基因重组腺病毒免疫应答

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猪链球菌重组GDH蛋白间接ELISA检测方法的建立

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中国预防兽医学报 2009年第8期31卷 623-626页

作者：徐敏王淑杰蔡雪辉刘永刚石文达武佳斌李丽琴中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪病研究室黑龙江哈尔滨150001

为建立猪链球菌快速诊断方法,本研究以纯化的原核表达的猪链球菌谷氨酸脱氢酶蛋白(GDH)为抗原,建立了检测猪链球菌抗体的间接ELISA诊断方法。实验确定了最佳抗原包被浓度为6μg/mL,待检血清最佳稀释倍数为1∶100,其作用时间为60min,兔... 详细信息

为建立猪链球菌快速诊断方法,本研究以纯化的原核表达的猪链球菌谷氨酸脱氢酶蛋白(GDH)为抗原,建立了检测猪链球菌抗体的间接ELISA诊断方法。实验确定了最佳抗原包被浓度为6μg/mL,待检血清最佳稀释倍数为1∶100,其作用时间为60min,兔抗猪酶标抗体的最佳稀释倍数为1∶2000,其作用时间为60min;判定标准为S/P值≥0.210时判为阳性,S/P值≤0.166时判为阴性,介于两者之间的判为可疑。实验结果表明该方法特异性、敏感性和重复性均较好,适用于猪链球菌所有亚型的抗体检测,为猪链球菌的流行病学调查提供了一种简便快速的血清学检测方法。

关键词：猪链球菌重组GDH蛋白间接ELISA 检测方法

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EIAV弱毒疫苗株和强毒株诱导的特异性体液免疫应答差别

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细胞与分子免疫学杂志 2009年第12期25卷 1079-1083页

作者：朱振营林跃智王宇宏赵立平朱远茂周建华中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物研究室哈尔滨医科大学第一医院黑龙江哈尔滨150001

目的:通过研究EIAV弱毒疫苗株和强毒株在诱导多种特异性抗体方面的差异,初步探讨特异性体液免疫应答在EIAV弱毒疫苗株保护性免疫中的作用。方法:试验马匹根据接种毒株分为疫苗组和强毒隐性感染组,应用ELISA方法对血清中病毒囊膜蛋白Env... 详细信息

目的:通过研究EIAV弱毒疫苗株和强毒株在诱导多种特异性抗体方面的差异,初步探讨特异性体液免疫应答在EIAV弱毒疫苗株保护性免疫中的作用。方法:试验马匹根据接种毒株分为疫苗组和强毒隐性感染组,应用ELISA方法对血清中病毒囊膜蛋白Env和衣壳蛋白P26结合抗体的滴度、亲和力及Env结合抗体的构象依赖性进行动态实相检测,同时采用细胞蚀斑染色和逆转录酶活性检测方法对中和抗体水平进行同期检测。结果:Env和P26结合抗体的滴度、亲和力、构象依赖性及中和抗体的中和活性均存在一个缓慢上升的过程。对于P26抗体滴度及Env抗体亲和力,疫苗组和强毒隐性感染组仅在病毒接种2个月内,表现为统计学差异(P<0.05)。疫苗组从接种后14d开始,Env抗体的构象依赖性高于强毒隐性感染组(P<0.05),并持续至最后一个监测点。最明显的是,疫苗组诱导产生具有中和强毒特性毒株(EIAVDLV34)和弱毒特性毒株(EIAVFDDV)活性的中和抗体均高于强毒隐性感染组(P<0.05)。结论:弱毒疫苗株和强毒株诱导机体产生结合抗体和中和抗体的时间、水平和性质均存在明显差异,其中中和抗体和构象依赖性抗体的差异,可能是EIAV弱毒疫苗诱导保护性免疫的主要因素之一。

关键词：马传染性贫血病毒弱毒疫苗株抗体亲和力构象依赖性中和抗体

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猪圆环病毒2型血清中和抗体阻断ELISA检测方法的建立及应用

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中国兽医科学 2009年第9期39卷 779-785页

作者：黄立平刘长明危艳武陆月华郭龙军中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

利用PCV2-Cap蛋白中和性单克隆抗体建立了一种检测猪血清中PCV2中和抗体的阻断ELISA方法。用该方法与免疫过氧化物酶单层细胞试验对353份试验猪血清样品进行平行检测,结果两种方法的符合率为96.0%;该方法的敏感性为97.9%,特异性为92.4%... 详细信息

利用PCV2-Cap蛋白中和性单克隆抗体建立了一种检测猪血清中PCV2中和抗体的阻断ELISA方法。用该方法与免疫过氧化物酶单层细胞试验对353份试验猪血清样品进行平行检测,结果两种方法的符合率为96.0%;该方法的敏感性为97.9%,特异性为92.4%,且与其他几种猪病毒参考阳性血清无交叉反应。该阻断ELISA与血清中和试验的检测结果呈显著正相关(r=0.997 0),其敏感性还优于血清中和试验。用阻断ELISA对PCV2灭活疫苗免疫与攻毒试验猪血清样品进行检测,结果显示,疫苗接种后第2周就能检测到PCV2中和抗体,4周后阳转率达100%。另外,用该方法对东北三省不同地区送检的703份血清样品进行检测,结果阳性检出率为73.0%。表明,东北三省猪场中的PCV2感染率较高,危害严重。

关键词：猪圆环病毒2型中和抗体单克隆抗体阻断ELISA

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猪繁殖与呼吸综合征病毒GD3株的分离鉴定及其分子特征

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中国预防兽医学报 2009年第1期31卷 28-33页

作者：马平蔡雪辉刘永刚石文达王淑杰王洪峰李成君张琪中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

2005年从广东发病猪场采集的猪繁殖与呼吸综合征疑似病料中,分离到1株猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),命名为GD3株。采用RT-PCR、IFA对分离毒株进行鉴定,并在Marc-145细胞上完成了病毒的增殖和理化性质的鉴定。应用RT-PCR方法扩增出GD3... 详细信息

2005年从广东发病猪场采集的猪繁殖与呼吸综合征疑似病料中,分离到1株猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),命名为GD3株。采用RT-PCR、IFA对分离毒株进行鉴定,并在Marc-145细胞上完成了病毒的增殖和理化性质的鉴定。应用RT-PCR方法扩增出GD3株的6条基因大片段,扩增产物克隆于pMD18-T载体鉴定后测序,同时应用RACE技术对GD3株的5'末端进行扩增和测序。结果表明GD3株基因组全长15425nt,包含个9开放阅读框,5'UTR长189nt,3'UTR长150nt。序列分析结果表明,GD3株在分子遗传演化上介于PRRSV变异毒株(HuN4株、JXA1株)和CH-1a之间,与HuN4和JXA1之间的相似性为97.1%和97.2%;与CH-1a的核苷酸相似性为94.9%。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒分离鉴定

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猪流感病毒H1亚型HA蛋白特异性单克隆抗体的研制

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细胞与分子免疫学杂志 2009年第3期25卷 233-235页

作者：李洪涛刘明刘春国杜金玲中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030

目的:研制猪流感病毒抗H1亚型HA特异性单克隆抗体(mAb)。方法:构建H1亚型猪流感病毒A/Swine/Guangdong/LM/2004(H1N1)HA基因表达质粒,基因免疫6～8周龄雌性BALB/c小鼠,加强免疫后取其脾细胞与骨髓瘤细胞Sp2/0进行融合。通过ELISA、HI试... 详细信息

目的:研制猪流感病毒抗H1亚型HA特异性单克隆抗体(mAb)。方法:构建H1亚型猪流感病毒A/Swine/Guangdong/LM/2004(H1N1)HA基因表达质粒,基因免疫6～8周龄雌性BALB/c小鼠,加强免疫后取其脾细胞与骨髓瘤细胞Sp2/0进行融合。通过ELISA、HI试验筛选阳性克隆。应用ELISA、HI试验和Western blot试验测定mAb的反应性和特异性。结果:共获得3株分泌抗H1亚型猪流感病毒HA蛋白的杂交瘤细胞株,分别命名为8C4、8C6、9D6。mAb腹水ELISA效价在1∶16000～1∶256000之间;HI效价为1∶512～1∶256000;对A/Swine/Guangdong/LM/2004的中和效价分别为:10-2.83、10-6.4、10-5.8。Westernblot分析结果显示,3株mAb只与H1亚型猪流感病毒HA蛋白反应。结论:HA蛋白特异性mAb的研制为H1抗原变异分析及H1亚型猪流感诊断方法的建立奠定了物质基础。

关键词：猪流感基因免疫单克隆抗体血凝抑制

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牛分枝杆菌Spoligotyping和VNTR-MIRU的基因分型研究

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中国预防兽医学报 2009年第2期31卷 114-116,126页

作者：杜艳芬林靖凯刘思国王春来刘慧芳司微王聃赵海玲中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室细菌病研究室黑龙江哈尔滨150001

为了探讨间隔区寡核苷酸分型(Spoligotyping)和数目可变串联重复序列-结核分枝杆菌散在分布重复单元(VNTR-MIRU)基因分型法用于国内牛分枝杆菌的基因分型研究,初步了解我国牛分枝杆菌基因型种类、分布以及2种方法在我国应用的可行性。... 详细信息

为了探讨间隔区寡核苷酸分型(Spoligotyping)和数目可变串联重复序列-结核分枝杆菌散在分布重复单元(VNTR-MIRU)基因分型法用于国内牛分枝杆菌的基因分型研究,初步了解我国牛分枝杆菌基因型种类、分布以及2种方法在我国应用的可行性。本研究收集东北、西北、华北、华南4个地区分离的10株牛分枝杆菌分离株,分别采用Spoligotyping和VNTR-MIRU对这些分离株进行基因分型,比较两种方法的分型效果,评价其在牛分枝杆菌基因分型中的应用。结果表明,使用Spoligotyping方法,10株牛分枝杆菌呈现出4种基因型,使用VNTR-MIRU方法,10株分离株也呈现4种基因型;当两种方法联合使用时,可以分为5种基因型,其中的2个菌株具有独特的基因型,显示来自不同地区的牛分枝杆菌存在主要的流行型为BCG家族。将Spoligotyping和VNTR-MIRU联合使用,可有效提高牛结核病的分子流行病学调查和病原学的监测效果。

关键词：牛分枝杆菌 Spoligotyping VNTR MIRU 基因分型

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山羊痘病毒p32基因原核表达及间接ELISA抗体检测方法的建立

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中国预防兽医学报 2009年第12期31卷 945-948页

作者：王芳雷震于力中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

为了建立山羊痘病毒(GPV)抗体快速检测方法,本研究通过人工合成密码子优化的GPVp32基因,并在大肠杆菌中进行截短表达(p32-opti)。表达的重组p32-opti蛋白主要以包涵体形式存在,Western blot分析表明,p32-opti与GPV标准阳性血清具有良好... 详细信息

为了建立山羊痘病毒(GPV)抗体快速检测方法,本研究通过人工合成密码子优化的GPVp32基因,并在大肠杆菌中进行截短表达(p32-opti)。表达的重组p32-opti蛋白主要以包涵体形式存在,Western blot分析表明,p32-opti与GPV标准阳性血清具有良好的抗原性。以纯化的重组p32-opti蛋白作为ELISA包被抗原,建立间接ELISA抗体检测方法。该方法检测小反刍兽疫、蓝舌病和口蹄疫阳性血清均无交叉反应;与中和试验(VNT)比较,两者的符合率为95.7%;ELISA批内和批间重复性试验显示,OD值的变异系数小于10%。上述结果表明,该ELISA检测方法具有良好的特异性、敏感性和重复性。对来自黑龙江、内蒙古和新疆自治区的390份山羊和绵羊血清进行检测,抗体阳性率为80.2%,表明这些地区的山羊和绵羊群普遍存在羊痘病毒抗体。本研究建立的间接ELISA方法可用于GPV感染的流行病学调查以及疫苗接种动物的抗体水平监测。

关键词： GPV p32基因大肠杆菌表达 ELISA

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Asia1型和O型口蹄疫病毒中和性单克隆抗体的免疫保护性

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中国预防兽医学报 2009年第4期31卷 300-304页

作者：周国辉于力中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

本研究用微量中和试验鉴定具有中和活性的口蹄疫病毒(FMDV)单克隆抗体,进而用乳鼠保护试验在体内验证单克隆抗体对FMDV感染的免疫保护作用。结果表明,针对Asia1型和O型FMDV的单克隆抗体3E11和8E8腹水的半数保护量(PD50)分别为1995和2371... 详细信息

本研究用微量中和试验鉴定具有中和活性的口蹄疫病毒(FMDV)单克隆抗体,进而用乳鼠保护试验在体内验证单克隆抗体对FMDV感染的免疫保护作用。结果表明,针对Asia1型和O型FMDV的单克隆抗体3E11和8E8腹水的半数保护量(PD50)分别为1995和2371;仅用8PD50单抗3E11和11PD50单抗8E8,就可完全保护乳鼠耐受致死剂量Asia1型和O型FMDV的攻击。被动免疫的乳鼠在攻毒后体重增长的百分率随单抗腹水浓度的升高而增加,而且随着单抗腹水浓度的升高,乳鼠的起始死亡时刻后延、终点死亡时刻前移。

关键词：口蹄疫病毒中和性单克隆抗体保护性免疫

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