检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医科学 2009年第5期39卷 416-420页

作者：李媛董惠张美晶陈超曹培丽郭丹姜海芳辛九庆中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室国家牛传染性胸膜肺炎指定检测实验室黑龙江哈尔滨150001

参考GenBank中牛霉形体和无乳霉形体P81基因的序列差异,设计了针对牛霉形体P81基因的PCR引物,建立了牛霉形体PCR检测方法,并对该方法进行了敏感性和特异性试验。该方法可以从100ccu/mL(ccu:color change unit,颜色变化单位)的牛霉形体... 详细信息

参考GenBank中牛霉形体和无乳霉形体P81基因的序列差异,设计了针对牛霉形体P81基因的PCR引物,建立了牛霉形体PCR检测方法,并对该方法进行了敏感性和特异性试验。该方法可以从100ccu/mL(ccu:color change unit,颜色变化单位)的牛霉形体培养物中检出目的片段;经对丝状霉形体丝状亚种SC型(MmmSC)PG1株、丝状霉形体丝状亚种LC型(MmmLC)Y-goat株、山羊霉形体山羊亚种(Mccp)87001株、无乳霉形体(***)PG2株、绵羊肺炎霉形体Y-98株等亲缘关系相近的霉形体纯培养物检测,结果证实该方法具有良好的特异性。利用建立的PCR检测方法可以从人工感染牛的鼻拭子和临床发病牛肺中扩增出目的片段,与分离培养结果完全符合,本方法为国内首次建立的敏感、特异、快速的牛霉形体PCR检测方法。

关键词：牛霉形体牛传染性胸膜肺炎聚合酶链式反应

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带BAC质粒的重组伪狂犬病毒的构建及其体外生长特性研究

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中国预防兽医学报 2009年第1期31卷 10-15页

作者：彭金美王瑜田志军周艳君陈瑾安同庆童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 华中农业大学湖北武汉430070 中国农业科学院上海兽医研究所上海200232

本研究通过基因克隆技术以伪狂犬病病毒(PRV)弱毒疫苗株Bartha K61株的部分TK基因作为同源重组序列,以绿色荧光蛋白基因(EGFP)作为筛选标记,构建了带LoxP位点的pUCTKAB-EGFP质粒,将pBeloBACII线性化后插入到pUCTKAB-EGFP中构建了转移载... 详细信息

本研究通过基因克隆技术以伪狂犬病病毒(PRV)弱毒疫苗株Bartha K61株的部分TK基因作为同源重组序列,以绿色荧光蛋白基因(EGFP)作为筛选标记,构建了带LoxP位点的pUCTKAB-EGFP质粒,将pBeloBACII线性化后插入到pUCTKAB-EGFP中构建了转移载体pUCTK-EGFP-BACII。将PRV基因组和转移载体共转染Vero细胞,利用同源重组在Bartha K61株的TK基因中插入了BAC质粒和绿色荧光蛋白筛选标记,经过11轮噬斑纯化和鉴定证实获得了带BAC质粒的重组伪狂犬病毒rv-PRVBAC。通过噬斑试验和一步生长曲线测定等方法对重组伪狂犬病毒rv-PRVBAC的生长特性进行研究,结果发现带有BAC质粒及筛选标记的重组病毒rv-PRVBAC在体外细胞培养中的增殖速度与亲本毒Bartha K61株相比没有明显差别,说明大的基因片段的插入没有影响重组病毒在体外的繁殖速度。重组病毒rv-PRVBAC在Vero细胞上盲传18代,其绿色荧光蛋白仍能够稳定表达,通过PCR鉴定可以检测到插入的外源片段和插入位点两侧的病毒基因序列,表明所获得的重组病毒rv-PRVBAC得到了稳定遗传。本研究成功获得了带BAC质粒的重组伪狂犬病毒rv-PRVBAC,为进一步开展PRV的细菌人工染色体的构建奠定了基础。

关键词：伪狂犬病毒 Bartha K61株 BAC 重组病毒

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牛支原体套式PCR检测方法的建立

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中国预防兽医学报 2009年第9期31卷 709-711页

作者：李媛董惠张美晶陈超曹培丽郭丹姜海芳辛九庆中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室/国家牛传染性胸膜肺炎指定检测实验室黑龙江哈尔滨150001

为建立牛支原体检测方法,本研究采用牛支原体的oppD/F基因的两对特异性引物,建立了牛支原体的套式PCR检测方法。该套式PCR可以从100ccu/mL(color change unit颜色变化单位)的牛支原体培养物中检出目的片段;同时还可以从病牛肺脏、病牛... 详细信息

为建立牛支原体检测方法,本研究采用牛支原体的oppD/F基因的两对特异性引物,建立了牛支原体的套式PCR检测方法。该套式PCR可以从100ccu/mL(color change unit颜色变化单位)的牛支原体培养物中检出目的片段;同时还可以从病牛肺脏、病牛鼻拭子中扩增出目的片段,而且结果与病原分离结果一致。特异性试验结果表明,该方法与其它支原体无交叉反应,是一种特异性强、敏感性高的牛支原体检测方法。

关键词：牛支原体无乳支原体牛传染性胸膜肺炎套式PCR

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猪流行性腹泻病毒S蛋白受体结合域的分析

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畜牧兽医学报 2009年第4期40卷 528-532页

作者：孙东波陈建飞时洪艳申识川吕茂杰范秀萍陈洪岩冯力中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／猪传染病研究室哈尔滨150001 黑龙江八一农垦大学动物科技学院大庆163319

以猪流行性腹泻病毒(PEDV)可溶性的猪氨基肽酶N受体为靶蛋白对PEDV S1基因特异性肽库进行3轮生物淘选,然后对30个淘选的噬菌体克隆进行测序。序列分析发现,2个噬菌体克隆展示无义氨基酸序列,其余28个噬菌体克隆展示的氨基酸序列位于PED... 详细信息

以猪流行性腹泻病毒(PEDV)可溶性的猪氨基肽酶N受体为靶蛋白对PEDV S1基因特异性肽库进行3轮生物淘选,然后对30个淘选的噬菌体克隆进行测序。序列分析发现,2个噬菌体克隆展示无义氨基酸序列,其余28个噬菌体克隆展示的氨基酸序列位于PEDV S蛋白的第249-529位氨基酸区域,这个区域被命名为MRR。利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统对MRR基因进行真核表达。Western blot结果表明,表达的MRR重组蛋白能够与兔抗PEDV多克隆抗体反应。

关键词：猪流行性腹泻病毒 S蛋白受体结合域

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马传染性贫血病毒疫苗株S2基因不同变异位点逆向突变感染性克隆的体外复制特性分析

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中国预防兽医学报 2009年第12期31卷 919-924页

作者：高旭姜成刚高华林跃智赵立平相文华周建华中国农业科学院哈尔滨兽医研究所/兽医生物技术国家重点实验室大动物病研究室黑龙江哈尔滨15000 延边大学农学院动物医学系吉林延吉133002

为研究EIAV弱毒疫苗株(EIAVFDDV15)S2基因发生的稳定性突变对疫苗株特性的作用以及S2基因的功能,以EIAVFDDV15感染性克隆质粒pFDDV3-8为模板,根据疫苗研制过程中S2基因发生的4个主要稳定性变异位点,构建及拯救出S2基因不同差异位点逆向... 详细信息

为研究EIAV弱毒疫苗株(EIAVFDDV15)S2基因发生的稳定性突变对疫苗株特性的作用以及S2基因的功能,以EIAVFDDV15感染性克隆质粒pFDDV3-8为模板,根据疫苗研制过程中S2基因发生的4个主要稳定性变异位点,构建及拯救出S2基因不同差异位点逆向突变为强毒株相应氨基酸的6株感染性克隆衍生毒株。经实时定量PCR、逆转录酶活性和western blot等检测表明,疫苗株S2基因4个稳定性变异位点全部逆向突变的感染性克隆衍生毒vpFDDVS2r1-3-4-5在体外培养靶细胞中的复制水平低于亲本疫苗株感染性克隆衍生病毒和其他组合的逆向突变的感染性克隆衍生病毒,提示EIAV疫苗株S2蛋白4个稳定突变位点的综合作用可能是决定疫苗株和强毒株特性差异的因素之一。以上结果为体内感染S2基因逆向突变感染性克隆衍生病毒,进一步揭示S2基因在EIAV弱毒疫苗致弱过程中的作用提供了依据。

关键词：马传染性贫血病毒 S2基因逆向突变感染性克隆复制特性

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抗鸡传染性支气管炎病毒N蛋白单克隆抗体制备与鉴定

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中国预防兽医学报 2009年第8期31卷 654-656页

作者：于丹韩宗玺邵昱昊李慧昕金鑫孔宪刚刘胜旺中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 延边大学农学院吉林延边134000

为建立抗鸡传染性支气管炎病毒(IBV)的单克隆抗体(MAb),利用浓缩的IBV致弱株CK/CH/LDL97ⅠF115病毒免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术,经间接ELISA和有限稀释法,经筛选和克隆后获得了一株抗IBV N蛋白MAb的杂交瘤细胞系(2D2)。经鉴定,其MAb... 详细信息

为建立抗鸡传染性支气管炎病毒(IBV)的单克隆抗体(MAb),利用浓缩的IBV致弱株CK/CH/LDL97ⅠF115病毒免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术,经间接ELISA和有限稀释法,经筛选和克隆后获得了一株抗IBV N蛋白MAb的杂交瘤细胞系(2D2)。经鉴定,其MAb的重链为IgG1亚型,轻链为κ链。ELISA和western blot试验结果表明,所获得的这株2D2 MAb可特异性识别IBV N蛋白。2D2 MAb可与多种血清型IBV发生反应,表明该MAb识别的表位可能位于N蛋白的保守区域。为进一步鉴定IBV的表位及诊断试剂的研究奠定了基础。

关键词：传染性支气管炎病毒 N蛋白单克隆抗体

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A型流感病毒核蛋白结构和功能的研究进展

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黑龙江畜牧兽医 2009年第9期 17-19页

作者：杜金玲刘春国刘明李洪涛张新涛石薇琳中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

A型流感病毒为重要的传染性病原。流感病毒核蛋白是病毒转录装置中的结构成分,在病毒生活周期中执行多种重要功能,文章简要综述了核蛋白在流感病毒结构和功能方面的研究进展,以便为促进疫苗的设计和抗病毒治疗药物的研制提供借鉴。

关键词：流感病毒核蛋白结构与功能

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抗乙型脑炎病毒非结构蛋白NS1单克隆抗体的制备与鉴定

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中国预防兽医学报 2009年第1期31卷 74-77页

作者：王斌华荣虹赵付荣刘天强于海杜鹃童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 新疆农业大学动物医学学院新疆乌鲁木齐830052 黑龙江大学黑龙江哈尔滨150020 中国农业科学院上海兽医研究所上海200232

本研究利用原核表达的乙型脑炎病毒(JEV)SA14-14-2株非结构蛋白NS1作为免疫原,免疫8周龄BALB/c小鼠,采用淋巴细胞杂交瘤技术进行融合,共获得4株特异性针对JEV NS1的杂交瘤细胞,分别命名为1H6、2C3、3A7、4C8,经测定1H6单抗亚类属于IgG2b... 详细信息

本研究利用原核表达的乙型脑炎病毒(JEV)SA14-14-2株非结构蛋白NS1作为免疫原,免疫8周龄BALB/c小鼠,采用淋巴细胞杂交瘤技术进行融合,共获得4株特异性针对JEV NS1的杂交瘤细胞,分别命名为1H6、2C3、3A7、4C8,经测定1H6单抗亚类属于IgG2b,其他3株为IgG1,轻链均为κ链。4株杂交瘤细胞诱生小鼠腹水效价分别达1∶20480、1∶2560、1∶20480、1∶10240,western blot证实所得杂交瘤细胞分泌的抗体均可与JEV NS1蛋白发生特异性反应,间接免疫荧光试验表明1H6、3A7、4C83株单抗能够识别天然的JEV NS1蛋白。本研究为进一步探究JEV NS1蛋白结构及其功能奠定了基础。

关键词：乙型脑炎病毒非结构蛋白单克隆抗体

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应用TaqMan荧光定量PCR检测H3N8亚型马流感病毒

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中国预防兽医学报 2009年第8期31卷 614-617,626页

作者：戴伶俐郭巍李雪峰黄文强赵立平阿依吐拉.肉孜相文华中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/马病研究中心黑龙江哈尔滨150001 新疆动物卫生监督所新疆乌鲁木齐830001

为建立马流感病毒(EIV)的检测方法,本试验针对H3N8亚型EIV血凝素(HA)基因高度保守序列设计并合成了2对引物和1条TaqMan荧光探针,建立了TaqMan荧光定量PCR方法。经用TaqMan荧光定量PCR、RT-PCR和病毒分离方法分别检测新疆等省135份疑似EI... 详细信息

为建立马流感病毒(EIV)的检测方法,本试验针对H3N8亚型EIV血凝素(HA)基因高度保守序列设计并合成了2对引物和1条TaqMan荧光探针,建立了TaqMan荧光定量PCR方法。经用TaqMan荧光定量PCR、RT-PCR和病毒分离方法分别检测新疆等省135份疑似EIV马鼻拭子样品,其结果表明:3种方法的马流感检出率分别为54.07%、37.78%、0.89%;TaqMan荧光定量PCR可检出马流感病毒基因组RNA的灵敏度可达10拷贝/反应,而且与其他马呼吸道病毒均无交叉反应,具有良好的特异性、敏感性和重复性。该方法为H3N8亚型马流感的早期诊断及分子流行病学调查等提供了一种新的快速、准确的定量检测技术。

关键词： TaqMan探针荧光定量PCR H3N8亚型马流感病毒

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猪瘟病毒野毒株RT-LAMP可视化检测方法的建立

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中国预防兽医学报 2009年第11期31卷 864-868页

作者：张兴娟孙元刘大飞仇华吉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 扬州大学兽医学院江苏扬州225009

本研究旨在建立一种可视化检测猪瘟病毒(CSFV)野毒株的反转录-环介导等温扩增方法(RT-LAMP)。根据CSFV的NS5B基因序列设计一套RT-LAMP引物,以样品的cDNA为模板,利用BstDNA聚合酶,在62℃恒温条件下进行扩增,扩增产物中加入SYBR GreenⅠ... 详细信息

本研究旨在建立一种可视化检测猪瘟病毒(CSFV)野毒株的反转录-环介导等温扩增方法(RT-LAMP)。根据CSFV的NS5B基因序列设计一套RT-LAMP引物,以样品的cDNA为模板,利用BstDNA聚合酶,在62℃恒温条件下进行扩增,扩增产物中加入SYBR GreenⅠ染料直接或在紫外光下观察判定扩增结果。该方法可检测出不同基因型的CSFV野毒株,其检出极限为2.5TCID50的CSFV,与实时荧光定量RT-PCR方法的敏感性相当;特异性试验表明,该方法对猪瘟兔化弱毒疫苗株(HCLV)、牛病毒性腹泻病毒以及其它常见猪源病毒均无扩增反应;通过对126份不同样品进行检测比较,该方法与实时荧光定量RT-PCR检测方法的符合率达100%,与引物-探针能量转移PCR方法的符合率为98.4%。该方法无需特殊仪器,是一种适用于基层的快速、简便的CSFV野毒鉴别检测方法。

关键词：猪瘟病毒野毒株 RT-LAMP 鉴别诊断

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