检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2009年第6期31卷 415-420页

作者：曲林茂陈伟业胡倩倩胡森张倩支海兵黄克和步志高南京农业大学动物医学院江苏南京210095 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／农业部兽医公共卫生重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001 中国兽医药品监察所北京100081

本研究利用gpt筛选基因和eGFP报告基因纯化筛选重组小反刍兽疫病毒(PPRV)F基因的重组山羊痘病毒(rGPV-PPRV-F),并经过PCR鉴定。免疫荧光和蛋白印迹试验都证实重组病毒能够感染绵羊羔羊睾丸细胞并表达PPRVF蛋白。以2×106PFU的rGPV-P... 详细信息

本研究利用gpt筛选基因和eGFP报告基因纯化筛选重组小反刍兽疫病毒(PPRV)F基因的重组山羊痘病毒(rGPV-PPRV-F),并经过PCR鉴定。免疫荧光和蛋白印迹试验都证实重组病毒能够感染绵羊羔羊睾丸细胞并表达PPRVF蛋白。以2×106PFU的rGPV-PPRV-F皮内注射免疫山羊3只,并于首次免疫后第28d以相同剂量进行二次免疫。分别于一免后21d和二免后14d采血后分离血清进行病毒中和试验。结果表明,一免后21d山羊痘病毒(GPV)中和抗体效价依次为1∶40、≥1∶80、≥1∶80,PPRV中和抗体效价依次别为1∶20、1∶40、1∶20,全部阳转;二免后14d,GPV中和抗体效价≥1∶80,PPRV中和抗体效价依次为1∶20、1∶80、1∶40。本研究为小反刍兽疫重组山羊痘疫苗的产业化奠定了基础。

关键词：小反刍兽疫 F蛋白山羊痘病毒载体重组疫苗中和抗体

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猪流感疫苗的研究进展

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黑龙江畜牧兽医 2009年第6期 32-33页

作者：刘大飞刘明刘春国杨涛刘大程中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001 莱阳市城厢兽医站山东莱阳265200

猪流感（swine influenza，SI）是由流感病毒引起的一种严重呼吸道疾病，临床以突发、高热、咳嗽、呼吸困难、衰竭、高发病率、低死亡率为特征。迄今已发现的A型猪流感病毒（swine influenza virus，SIV）有H1N1、H1N2、H1N7、H3N1、H3N... 详细信息

猪流感（swine influenza，SI）是由流感病毒引起的一种严重呼吸道疾病，临床以突发、高热、咳嗽、呼吸困难、衰竭、高发病率、低死亡率为特征。迄今已发现的A型猪流感病毒（swine influenza virus，SIV）有H1N1、H1N2、H1N7、H3N1、H3N2、 H3N3、H3N6、H4N6、H5N1和H9N2等10种不同血清亚型。自被发现以来，猪流感已成为严重危害猪群的疾病之一，已遍及亚洲、欧洲、非洲、南美洲、北美洲等，可谓全球流行。目前，世界范围内流行的猪流感血清型主要有人源H3N2、经典猪H1N1和类禽源H1N13种。

关键词：猪流感病毒流感疫苗呼吸道疾病 virus 呼吸困难血清亚型 H9N2 H5N1

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抗鸡传染性支气管炎病毒核蛋白单链抗体的构建及初步鉴定

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中国预防兽医学报 2009年第10期31卷 800-803,832页

作者：徐佳韩宗玺杨光邵昱昊李慧昕孔宪刚刘胜旺中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 吉林省四平市动物疫病预防控制中心吉林四平136000

为了构建鸡传染性支气管炎病毒(IBV)核蛋白(N)单链抗体(scFv),本研究通过提取杂交瘤细胞株6H3的总mRNA,采用RT-PCR法扩增出抗IBVN蛋白抗体的重链和轻链可变区基因,利用重叠延伸PCR将其重链和轻链通过一条寡核苷酸链连接起来扩增了单链... 详细信息

为了构建鸡传染性支气管炎病毒(IBV)核蛋白(N)单链抗体(scFv),本研究通过提取杂交瘤细胞株6H3的总mRNA,采用RT-PCR法扩增出抗IBVN蛋白抗体的重链和轻链可变区基因,利用重叠延伸PCR将其重链和轻链通过一条寡核苷酸链连接起来扩增了单链抗体基因,并将其克隆于原核表达载体pET-30a,构建重组质粒,转化***21(DE3),经IPTG诱导表达。对表达产物进行纯化复性后,用夹心ELISA和westernblot检测表明scFv可与传染性支气管炎病毒核蛋白发生特异性结合。

关键词：鸡传染性支气管炎病毒核蛋白单链抗体原核表达

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禽流感、新城疫可目视化诊断蛋白芯片的制备及初步应用

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中国预防兽医学报 2009年第1期31卷 60-64页

作者：石霖王秀荣杨忠苹陶启蒙王煜武嘉男蔡冬冬包红梅陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室／兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 重庆出入境检验检疫局重庆400020

本研究制备了可以同时鉴别诊断禽流感(AI)、新城疫(ND)2种禽病血清抗体的可视化蛋白芯片。以超速离心法和蔗糖密度梯度法分别纯化了2种病毒蛋白抗原,用点样缓冲液稀释后点于醛基修饰的片基上,制备蛋白芯片;将芯片与待检血清杂交后,再与... 详细信息

本研究制备了可以同时鉴别诊断禽流感(AI)、新城疫(ND)2种禽病血清抗体的可视化蛋白芯片。以超速离心法和蔗糖密度梯度法分别纯化了2种病毒蛋白抗原,用点样缓冲液稀释后点于醛基修饰的片基上,制备蛋白芯片;将芯片与待检血清杂交后,再与胶体金标记的二抗杂交,银染显色后根据灰度值判定结果,从而建立了2种禽病的可视化蛋白芯片鉴别诊断方法。采用该方法对18份现地血清样品进行初步检测,结果显示该芯片可特异性的与相应的抗体杂交,无交叉反应,而且呈现较强的杂交信号,其信号灰度值在阳性血清浓度为50μg/mL～300μg/mL范围内成线性关系(Y=0.426X+4.225)。用该芯片方法和琼扩(AGP)抗体检测方法对18份现地样品进行符合率检测,结果表明该可视化蛋白芯片具有很好的特异性,并且检测灵敏度为是AGP方法的400倍以上。研究表明该方法可用于同步鉴别2种禽病,是一种有效的抗体检测新方法。

关键词：禽流感新城疫可视化诊断蛋白芯片

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猪流感病毒NP基因的克隆及杆状病毒转移载体的构建

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西南农业学报 2009年第5期22卷 1453-1455页

作者：赵朴郑玉姝贾贝贝乔传玲陈化兰刘兴友李海燕河南科技学院动物科学学院河南新乡453003 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

本研究通过RT-PCR扩增了猪流感病毒A/Swine/Inner Mongolia/547/01(H3N2)的NP基因,并将其克隆入pMD18-T载体。重组pMD18-T经SalI和EcoR I酶切后得到的NP基因插入pMelBacB载体的SalI/EcoRI位点。PCR和限制性内切酶分析鉴定表明成功构建了... 详细信息

关键词：猪流感病毒 NP基因克隆转移载体

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马传染性贫血病毒受体插入型基因的原核表达

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动物医学进展 2009年第3期30卷 36-39页

作者：杨旭艳张淑琴王雪峰曹贵方周建华内蒙古农业大学动物科学与医学学院内蒙古呼和浩特010018 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

采用PCR方法扩增出马传染性贫血病毒受体(EIAVR1)插入型(INR)的基因,将INR基因分别亚克隆到原核表达载体pGEX-6p-1和pET-30a中,经PCR和双酶切鉴定以及序列测定,构建其并将其转化到大肠埃希菌BL21(DE3)中进行表达。结果显示,在pET-30a-IN... 详细信息

采用PCR方法扩增出马传染性贫血病毒受体(EIAVR1)插入型(INR)的基因,将INR基因分别亚克隆到原核表达载体pGEX-6p-1和pET-30a中,经PCR和双酶切鉴定以及序列测定,构建其并将其转化到大肠埃希菌BL21(DE3)中进行表达。结果显示,在pET-30a-INR的表达量高于pGEX-INR,且经过优化表达条件,只在pET-30a-INR以部分可溶蛋白的形式表达,而pGEX-INR仍以包涵体形式表达;经Western blot检测,不同载体表达的蛋白均可被相应的小鼠单克隆抗体特异性识别,具有良好的抗原性。

关键词：马传染性贫血病毒受体插入型基因原核表达

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H3N8亚型马流感病毒内蒙古株NS基因的克隆及序列分析

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黑龙江畜牧兽医 2009年第6期 87-89页

作者：李雪峰戴伶俐郭巍相文华曹贵方苏布达内蒙古农业大学动物科学与医学学院内蒙古呼和浩特010018 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

马流感病毒（Equine influenza virus，EIV）是马流行性感冒的病原体。马流感病毒的基因组为单股负链RNA，含有大小不同的8个独立的RNA片段，其第8片段为非结构蛋白基因，基因长890bp，编码非结构蛋白NS1和NS2。两者的相对分子质量分别... 详细信息

马流感病毒（Equine influenza virus，EIV）是马流行性感冒的病原体。马流感病毒的基因组为单股负链RNA，含有大小不同的8个独立的RNA片段，其第8片段为非结构蛋白基因，基因长890bp，编码非结构蛋白NS1和NS2。两者的相对分子质量分别为25ku和14ku。编码NS1的读码框连续，而编码NS2的mRNA需要剪切。序列分析表明，NS1和NS2有70个氨基酸重叠，并且在氨基端有9个氨基酸是相同的。在感染早期NS1被大量合成，

关键词：马流感病毒致病性大肠杆菌 NS基因鸡传染性支气管炎序列分析人工感染奶牛子宫内膜炎金黄色葡萄球菌

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几种中国鸡传染性支气管炎致弱毒株对流行毒株CK/CH/LDL/97Ⅰ保护作用的评价

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中国兽医学报 2009年第4期29卷 389-393页

作者：张晓楠王滨李成仁王钰刘乔然韩宗玺邵昱昊刘胜旺孔宪刚中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学黑龙江哈尔滨150030 青岛市动物卫生监督所山东青岛266071 黑龙江八一农垦大学黑龙江大庆163319

选择2株鸡传染性支气管炎异种致弱毒株CK/CH/LHLJ/04ⅤF110、tl/CH/LDT3/03 F120和1株同种毒株CK/CH/LDL97ⅠF115,研究其对中国流行强毒株CK/CH/LDL97Ⅰ的保护效果。首先对不同毒株及参考毒株的S1基因进行比较和系统进化树分析,研究了CK... 详细信息

选择2株鸡传染性支气管炎异种致弱毒株CK/CH/LHLJ/04ⅤF110、tl/CH/LDT3/03 F120和1株同种毒株CK/CH/LDL97ⅠF115,研究其对中国流行强毒株CK/CH/LDL97Ⅰ的保护效果。首先对不同毒株及参考毒株的S1基因进行比较和系统进化树分析,研究了CK/CH/LDL97Ⅰ与其他病毒的基因型关系。结果显示,CK/CH/LDL97Ⅰ属于有别于其他IBV毒株的一个独立的基因群。在此基础上,通过血清抗体检测、攻毒后发病率、死亡率、临床症状、病理变化观察以及气管和肾脏中病毒分离等方面研究了同种致弱毒株和异种致弱毒株对CK/CH/LDL97Ⅰ的免疫效力。结果显示,同种致弱毒株对CK/CH/LDL97Ⅰ强毒的攻击可提供100%的临床和病毒分泌的保护性。异种毒株tl/CH/LDT3/03 F120可提供100%的临床保护,但呼吸道病毒检出率达50%,表明对呼吸系统的保护效果不好。异种毒株CK/CH/LHLJ/04ⅤF110免疫组临床发病率为50%,气管样品病毒检出率为100%,可见临床和对病毒分泌的保护效果均较差。

关键词：鸡传染性支气管炎病毒 S1基因交叉保护同种异种

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抗新城疫病毒糖蛋白单克隆抗体的研制及在免疫组化中的应用

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动物医学进展 2009年第4期30卷 1-4页

作者：董俊斌王海峰步志高内蒙古农业大学动物科学与医学学院内蒙古呼和浩特010018 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

应用纯化的新城疫病毒(NDV)La Sota野毒株免疫Balb/c小鼠,最后一次免疫后3 d取小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,经间接ELISA筛选到3株分泌抗NDV单克隆抗体的杂交瘤细胞株,对各株单克隆抗体免疫球蛋白亚类及ELISA效价进行测定。结合单... 详细信息

应用纯化的新城疫病毒(NDV)La Sota野毒株免疫Balb/c小鼠,最后一次免疫后3 d取小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,经间接ELISA筛选到3株分泌抗NDV单克隆抗体的杂交瘤细胞株,对各株单克隆抗体免疫球蛋白亚类及ELISA效价进行测定。结合单克隆抗体反应结果,鉴定出抗NDV NP蛋白的单克隆抗体,利用该单克隆抗体s3e1做免疫组化试验,用rLa Sota(重组La Sota第2代毒株)免疫2日龄雏鸡,接种后第5天检测到肝脏的部分肝细胞呈阳性反应。

关键词：新城疫病毒单克隆抗体免疫组化

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番鸭呼肠孤病毒p10.8蛋白致细胞凋亡功能

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中国预防兽医学报 2009年第10期31卷 766-769页

作者：张云郭东春耿宏伟王钰魏萍东北农业大学动物医学院博士后流动站黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 黑龙江省农科院植物脱毒苗木研究所黑龙江哈尔滨150086

为确定番鸭呼肠孤病毒(DRV)p10.8蛋白的生物学功能,本研究采用RT-PCR方法扩增DRVS14株p10.8编码基因,将其克隆到真核表达载体中,构建了重组表达质粒pcDNA-p10.8;通过转染鸭胚成纤维细胞(DEF),首次对p10.8蛋白的凋亡功能进行了研究。细... 详细信息

为确定番鸭呼肠孤病毒(DRV)p10.8蛋白的生物学功能,本研究采用RT-PCR方法扩增DRVS14株p10.8编码基因,将其克隆到真核表达载体中,构建了重组表达质粒pcDNA-p10.8;通过转染鸭胚成纤维细胞(DEF),首次对p10.8蛋白的凋亡功能进行了研究。细胞转染48h后,Hoechest、DNALadder和TUNEL法的细胞凋亡检测结果显示:光镜下可见细胞形态学上出现的细胞皱缩,Hoechest染色后可见细胞核固缩,染色质凝固成团块状;DNALadder法可检测到凋亡细胞DNA样品呈梯形条带;TUNEL法可观察到褐色调亡细胞的存在。以上结果均表明,p10.8在DEF中的表达具有诱导宿主细胞凋亡的作用,是番DRV的凋亡蛋白。

关键词：番鸭呼肠孤病毒 p10.8蛋白凋亡细胞鸭胚原代成纤维细胞

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