检索结果-内蒙古大学图书馆

中国畜牧兽医 2014年第10期41卷 33-37页

作者：徐天石达陈建飞谷凤丽时洪艳张鑫冯力中国农业科学院哈尔滨兽医研究所、兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学生命科学学院黑龙江哈尔滨150030

为了更系统的研究病毒在猪肠道内侵入及致病的分子机制,本试验以猪小肠上皮细胞（intestinal epithelial cells,IEC）为模型,应用RNeasy Min Kit从猪IEC中提取细胞总RNA,反转录后,利用SMART技术合成双链cDNA（ds-cDNA）,通过同源重组的... 详细信息

为了更系统的研究病毒在猪肠道内侵入及致病的分子机制,本试验以猪小肠上皮细胞（intestinal epithelial cells,IEC）为模型,应用RNeasy Min Kit从猪IEC中提取细胞总RNA,反转录后,利用SMART技术合成双链cDNA（ds-cDNA）,通过同源重组的方法构建猪IEC酵母双杂交cDNA文库。结果显示,文库的滴度为8.4×108 CFU/mL,插入的ds-cDNA片段大小为0.5~2.0kb,平均长度约为1.1kb,文库重组率为100%。此文库为筛选与猪腹泻病毒相互作用的宿主蛋白及进一步阐明病毒的致病机制奠定了基础,为研制有效的药物或疫苗提供了依据。

关键词：猪腹泻病毒猪小肠上皮细胞酵母双杂交 cDNA文库

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VeroE6细胞酵母双杂交cDNA文库的构建及鉴定

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中国畜牧兽医 2014年第3期41卷 124-127页

作者：迟延彬石达朱庆贺陈建飞时洪艳张鑫李长龙韩斅刘宁赵鑫冯力中国农业科学院哈尔滨兽医研究所、兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学生命科学学院黑龙江哈尔滨150030

为寻找与猪流行性腹泻病毒（porcineepidemicdiarrheavirus，PEDV）相互作用的VeroE6细胞蛋白，深入研究病毒感染机制，本试验建立了一个VeroE6细胞酵母杂交cDNA文库。采用Trizol试剂从培养的VeroE6细胞中提取细胞总RNA，通过SMART技术... 详细信息

为寻找与猪流行性腹泻病毒（porcineepidemicdiarrheavirus，PEDV）相互作用的VeroE6细胞蛋白，深入研究病毒感染机制，本试验建立了一个VeroE6细胞酵母杂交cDNA文库。采用Trizol试剂从培养的VeroE6细胞中提取细胞总RNA，通过SMART技术合成双链cDNA，并利用同源重组的方法构建VeroE6细胞的酵母cDNA文库。结果显示，文库滴度为9．7×10^8 CFU／mL，插入的双链cDNA片段大小为0．5～3kb，平均长度约为1．6kb，文库重组率为87％，此文库可以用来筛选与病毒相互作用的VeroE6蛋白。该文库的构建为发现和研究与PEDV结构蛋白相互作用的宿主细胞蛋白奠定基础。

关键词：猪流行性腹泻病毒 Vero E6细胞 cDNA文库 SMART技术酵母双杂交

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蓝舌病病毒VP2蛋白展示口蹄疫病毒中和表位的研究

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中国预防兽医学报 2014年第9期36卷 731-734页

作者：罗小暖王芳崔玉东于力黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院黑龙江大庆163319 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/牛羊传染病研究创新团队黑龙江哈尔滨150001

为在蓝舌病病毒(BTV)VP2蛋白中鉴定展示表达外源B细胞表位的位点,本研究通过同源建模预测VP2蛋白的结构,采用SOE-PCR方法,将O型口蹄疫病毒编码保守的中和表位(8E8)序列分别插入BTV-8 VP2基因编码的两个不同loop区序列中,并分别构建了两... 详细信息

为在蓝舌病病毒(BTV)VP2蛋白中鉴定展示表达外源B细胞表位的位点,本研究通过同源建模预测VP2蛋白的结构,采用SOE-PCR方法,将O型口蹄疫病毒编码保守的中和表位(8E8)序列分别插入BTV-8 VP2基因编码的两个不同loop区序列中,并分别构建了两种嵌合VP2基因。将嵌合表位编码序列的VP2基因克隆于杆状病毒转移载体pFastBac HTb中,转化感受态细胞DH10Bac,筛选阳性重组杆粒rBacmid-VP2-8E8,转染昆虫细胞Sf9,获得重组杆状病毒rBac-VP2-8E8。经western blot和间接免疫荧光验证,嵌合8E8表位的VP2蛋白在Sf9细胞中正确表达,并且8E8表位能够正确展示在VP2蛋白表面;VP2蛋白三聚体分析表明,嵌合8E8表位的VP2蛋白仍能形成三聚体。以上结果表明,BTV VP2蛋白至少存在两个插入位点,能够容纳12个氨基酸短肽的插入。该结果为BTV病毒样颗粒展示8E8表位的研究提供实验依据。

关键词：蓝舌病病毒 VP2蛋白 O型口蹄疫病毒8E8表位杆状病毒表达

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两种阿卡斑病毒抗体ELISA检测方法的建立与初步应用

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中国预防兽医学报 2014年第4期36卷 289-292页

作者：刘晓婧王芳赵权于力吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/牛羊传染病研究创新团队黑龙江哈尔滨150001

为建立阿卡斑病ELISA血清学诊断方法,本研究利用原核表达的阿卡斑病毒(AKAV)核衣壳(N)蛋白和全病毒作为包被抗原,分别建立两种AKAV抗体的间接ELISA检测方法,并对其反应条件进行优化。应用两种间接ELISA检测方法分别对不同省份来源的247... 详细信息

为建立阿卡斑病ELISA血清学诊断方法,本研究利用原核表达的阿卡斑病毒(AKAV)核衣壳(N)蛋白和全病毒作为包被抗原,分别建立两种AKAV抗体的间接ELISA检测方法,并对其反应条件进行优化。应用两种间接ELISA检测方法分别对不同省份来源的247份牛血清样本进行检测,与中和试验结果进行比较。结果表明,中和试验抗体检出阳性率为29.55%,N蛋白间接ELISA(N-ELISA)和AKAV全病毒间接ELISA(AKAV-ELISA)与中和试验的符合率分别为72.5%和76.5%。本研究建立的N-ELISA及AKAV-ELISA方法均可以用于AKAV感染的流行病学调查。其中,N-ELISA方法安全性好,更适合推广应用。

关键词：阿卡斑病毒核衣壳N蛋白间接ELISA 中和试验

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J亚群禽白血病流行病学研究新进展

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中国家禽 2014年第16期36卷 38-40页

作者：邓小芸祁小乐张久丽华育平高玉龙王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 黑龙江职业学院黑龙江哈尔滨150111 东北林业大学林学博士后流动站黑龙江哈尔滨150040

J亚群禽白血病是禽类一种重要的致瘤性和免疫抑制性疾病。近年来,J亚群禽白血病病毒(ALV-J)宿主范围开始扩展,已由肉种鸡扩大到蛋鸡以及地方品种鸡,对鸡群的致病性提高,发病鸡的临床表现越来越多样化,出现了血管瘤,严重威胁养禽业健康... 详细信息

J亚群禽白血病是禽类一种重要的致瘤性和免疫抑制性疾病。近年来,J亚群禽白血病病毒(ALV-J)宿主范围开始扩展,已由肉种鸡扩大到蛋鸡以及地方品种鸡,对鸡群的致病性提高,发病鸡的临床表现越来越多样化,出现了血管瘤,严重威胁养禽业健康发展。ALV-J与其他免疫抑制性病毒的混合感染在我国部分养鸡场中普遍存在,使得鸡群免疫力低下,导致禽流感、新城疫等重要疫苗免疫失败,使疫病的诊断和防控难度加大。本文从分子流行病学的角度对ALV-J的发生发展进行综述,以期揭示ALV-J致病性增强的分子机制。

关键词： J亚群禽白血病流行病学进展

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鉴别猪伪狂犬病病毒强弱毒的高效纳米PCR检测试剂盒及初步应用

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养猪 2014年第5期 100-104页

作者：马兴杰仇铮崔宇超王晓玲张晶朱宝孔苗苗罗亚坤崔尚金中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

试验建立了鉴别猪伪狂犬病病毒（PRV）强弱毒高效纳米PCR检测方法，并对相关条件进行优化，组装了试剂盒。根据PRV保守序列设计3对引物分别扩增PRV基因组的gB（431 bp）、gE（316 bp）和gG（202 bp）3个基因，用于区分PRV强毒与基因缺... 详细信息

试验建立了鉴别猪伪狂犬病病毒（PRV）强弱毒高效纳米PCR检测方法，并对相关条件进行优化，组装了试剂盒。根据PRV保守序列设计3对引物分别扩增PRV基因组的gB（431 bp）、gE（316 bp）和gG（202 bp）3个基因，用于区分PRV强毒与基因缺失毒株，优化反应条件后建立了纳米PCR检测PRV强弱毒的方法并组装试剂盒，对试剂盒进行了特异性、敏感性、批内批间可重复性及保存期评估试验，并对临床样品进行检测。特异性试验表明，此试剂盒对于PRV能够扩增出431（gB）、316（gE）和202 bp（gG）的目的片段，对于PRV-Bartha-K61能够扩增出431和202 bp的目的片段，对于猪捷申病毒、非洲猪瘟病毒、猪圆环病毒2型、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪细小病毒及大肠杆菌等DNA或cDNA均未扩增出条带。敏感性试验表明，此试剂盒的方法比常规PCR方法敏感100-1000倍，最低核酸拷贝数检出量可以达到101 copy/μL数量级。试剂盒的批内、批间检测结果无明显差异，稳定性良好。-20℃至少可保存12个月。在对中国黑龙江、吉林等7个省市的临床送检的117份样品进行检测，结果显示，PRV强毒阳性率为51%，阴性率为49%，未发现有弱毒感染。鉴别PRV强弱毒纳米PCR试剂盒的研制，对PRV感染的早期检测、野毒株和疫苗株的鉴别、疾病控制等都有重要意义，而且也可以用于其他动物PRV感染的检测和早期诊断。

关键词：检测猪伪狂犬病病毒

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马动脉炎病毒Eva Green荧光定量RT-PCR检测方法的建立及初步应用

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中国预防兽医学报 2014年第12期36卷 943-947页

作者：胡月戚亭胡哲关平原王晓钧内蒙古农业大学兽医学院/农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室内蒙古呼和浩特010018 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/马传染病与慢病毒创新团队黑龙江哈尔滨150001

为建立马动脉炎病毒(EAV)的快速检测方法,本研究设计了一对针对EAV Bucyrus株ORF7基因序列的特异性引物,建立了检测EAV的Eva Green荧光定量RT-PCR(q RT-PCR)方法。结果表明,该方法在102拷贝/μL^107拷贝/μL范围内具有良好的线性关系;... 详细信息

为建立马动脉炎病毒(EAV)的快速检测方法,本研究设计了一对针对EAV Bucyrus株ORF7基因序列的特异性引物,建立了检测EAV的Eva Green荧光定量RT-PCR(q RT-PCR)方法。结果表明,该方法在102拷贝/μL^107拷贝/μL范围内具有良好的线性关系;最低检出量为101.5TCID50/m L病毒,敏感性为常规RT-PCR的100倍,与其他马常见病毒无交叉反应;组内及组间重复性试验的变异系数均小于2%,具有较好的重复性。此外,采用该方法测定了EAV Bucyrus株及其拯救病毒ic EAV感染RK-13细胞后的复制动态,并与TCID50方法进行了比较。结果显示ic EAV与其亲本病毒接种RK-13细胞后,0 h测定病毒TCID50及拷贝数分别为103.33TCID50/m L(104.65拷贝/2μL)和103.50TCID50/m L(104.70拷贝/2μL);60 h时,细胞病变达到100%,ic EAV及其亲本病毒的TCID50及拷贝数分别为105.67TCID50/m L(107.0拷贝/2μL)和105.57TCID50/m L(106.98拷贝/2μL),两株病毒在RK-13细胞内的复制效率相似。本研究建立的Eva Green q RT-PCR方法可以为细胞培养物中EAV的检测提供有效的技术手段。

关键词：马动脉炎病毒 qRT-PCR Eva Green 病毒含量

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马动脉炎病毒双抗体夹心ELISA检测方法的建立

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中国预防兽医学报 2014年第8期36卷 651-654页

作者：胡月戚亭赵世华关平原王晓钧内蒙古农业大学兽医学院/农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室内蒙古呼和浩特010018 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/马传染病与慢病毒创新团队黑龙江哈尔滨150001

为建立马动脉炎病毒(EAV)的快速检测方法,本实验以EAV N蛋白单克隆抗体(MAb)2B9为捕获抗体,辣根过氧化物酶(HRP)标记的EAV N蛋白MAb 2B3(HRP-2B3)为检测抗体,建立EAV双抗体夹心ELISA检测方法。结果显示,该方法的最佳工作条件为:MAb 2B9... 详细信息

为建立马动脉炎病毒(EAV)的快速检测方法,本实验以EAV N蛋白单克隆抗体(MAb)2B9为捕获抗体,辣根过氧化物酶(HRP)标记的EAV N蛋白MAb 2B3(HRP-2B3)为检测抗体,建立EAV双抗体夹心ELISA检测方法。结果显示,该方法的最佳工作条件为:MAb 2B9的包被浓度为2μg/mL,HRP-2B3的工作浓度为2μg/mL,以OD450nm≥0.124为阳性判定标准。该方法对马传染性贫血病毒、马疱疹病毒I型和IV型、马流感病毒等均无交叉反应,特异性好;最低检出限为病毒标准品200倍稀释(103.2TCID50),敏感性高。3次重复试验建立的标准曲线的相关系数(R2)均大于0.997。本实验建立的EAV双抗体夹心ELISA方法具有特异性好、敏感性高等优点,适于EAV的快速检测。

关键词：马动脉炎病毒双抗体夹心ELISA 单克隆抗体检测

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猪IFN-γ、IL-2及GM-CSF对猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白亚单位疫苗免疫增强作用的研究

猪IFN-γ、IL-2及GM-CSF对猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白亚单位疫苗...

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十次学术研讨会

作者：王一平刘丹郭龙军危艳武吴红丽刘建波李胜斌黄立平刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

猪圆环病毒2型(PCV2)是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的主要病原,该病原现已在世界各地广泛流行,给养猪业造成巨大经济损失.PCV2 Cap蛋白是病毒的主要免疫原性蛋白,能诱导产生PCV2特异性中和抗体和保护性免疫力,是研制PCV2基因工... 详细信息

猪圆环病毒2型(PCV2)是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的主要病原,该病原现已在世界各地广泛流行,给养猪业造成巨大经济损失.PCV2 Cap蛋白是病毒的主要免疫原性蛋白,能诱导产生PCV2特异性中和抗体和保护性免疫力,是研制PCV2基因工程疫苗的理想靶抗原.研究表明,IFN-γ、IL-2和GM-CSF等细胞因子佐剂对疫苗具有免疫增强作用,可显著增强疫苗的免疫保护效力.本研究采用细胞因子佐剂与PCV2-Cap蛋白组合的策略来研制预防PCV2感染的新型基因工程亚单位疫苗,目的是验证猪源WN-γ(PoIFN-γ)、IL-2 (PoIL-2)和GM-CSF(PoGM-CSF)这3种细胞因子能否增强PCV2-Cap蛋白亚单位疫苗的免疫效力. 研究表明，用PoIFN-与PCV2-Cap蛋白混合免疫时，PoIFN-能显著增强PCV2-Cap蛋白亚单位疫苗的免疫保护效力，但以Cap-PoIFN-γ融合蛋白免疫时，PoIFN-对PCV2-Cap蛋白无免疫增强作用;用PoIL-2或PoGM-CSF与PCV2-Cap蛋白混合免疫或以Cap-PoGM-CSF融合蛋白免疫时，PoIL-2和PoGM-CSF对PCV2-Cap蛋白亚单位疫苗的抗体应答均无增强作用，但可促进免疫应答向Th1型免疫应答转变，从而增强疫苗的免疫保护效力，然而以Cap-PoIL-2融合蛋白免疫时，PoIL-2对PCV2-Cap蛋白无免疫增强作用。

关键词：对猪圆环病毒2型 Cap蛋白亚单位疫苗免疫增强作用

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猪鼻支原体的分离鉴定及其对巴马猪的致病性试验

猪鼻支原体的分离鉴定及其对巴马猪的致病性试验

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十次学术研讨会

作者：危艳武夏伟刘长明张志慧黄立平刘建波吴洪丽刘丹李胜斌王一平张辉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

为了探索猪鼻支原体(Mhr)对仔猪的致病性,本试验从临床呼吸道疾病的患猪肺脏分离到一株Mhr,命名为Mhr-DL株.对该菌株16S rRNA序列分析证实,它与GenBank下载的Mhr(AB680688)、猪肺炎支原体(Mhp:NR_074745)和猪滑液支原体(My:KC512403)的... 详细信息

为了探索猪鼻支原体(Mhr)对仔猪的致病性,本试验从临床呼吸道疾病的患猪肺脏分离到一株Mhr,命名为Mhr-DL株.对该菌株16S rRNA序列分析证实,它与GenBank下载的Mhr(AB680688)、猪肺炎支原体(Mhp:NR_074745)和猪滑液支原体(My:KC512403)的同源性分别为99.3％、92.8％和74.0％.电镜负染观察该菌为多形性,大小为500 nm～600 nm.取Mhr-DL株培养物(1.8×109 ccu/mL)经腹腔和气管途径接种SPF小型巴马猪,临床症状表现为精神沉郁、粪便干燥、食欲不振、结膜炎、体温高达41.6℃;剖检病理表现为肺脏、肝脏、脾脏等器官纤维渗出,淋巴结充血肿胀、胸膜炎、腹膜炎、肺脏呈虾内样病变.菌株核酸检测发现,肺脏和扁桃体检出率最高;组织病理表现为间质性肺炎,淋巴细胞增生、坏死、崩解,肾毛细血管淤血,小肠固有层大量嗜酸性粒细胞浸润、肠绒毛结构不完整,心脏小血管淤血,脾白髓内淋巴细胞增生.本研究获得的Mhr-DL菌株对巴马猪具有显著的致病性,为今后深入开展Mhr的致病机理和防控技术的研究奠定了基础.

关键词：巴马猪猪鼻支原体分离鉴定致病性分析

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