检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医科学 2010年第4期40卷 410-414页

作者：彭金美李登云田志军安同庆刘恒贵周艳君童光志东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 中国农业科学院上海兽医研究所上海200241 香港大学李嘉诚医学院艾滋病研究所中国香港SAR

根据猪程序性死亡因子PD-1及其配体PD-L1和PD-L2的基因序列,分别设计了特异性引物和TaqMan探针,以10倍系列稀释的重组质粒pMD-PD-1、pMD-PD-L1和pMD-PD-L2为标准品,对实时荧光定量PCR的条件进行优化,以建立定量检测这3个基因的方法。结... 详细信息

根据猪程序性死亡因子PD-1及其配体PD-L1和PD-L2的基因序列,分别设计了特异性引物和TaqMan探针,以10倍系列稀释的重组质粒pMD-PD-1、pMD-PD-L1和pMD-PD-L2为标准品,对实时荧光定量PCR的条件进行优化,以建立定量检测这3个基因的方法。结果表明,建立的方法在1×10^2-1×10^8copies/μL模板范围内具有良好的线性关系（r^2〉0.99）,扩增效率均高于96%,可检测至少100 copies的阳性标准品。利用该方法对猪外周血单核细胞中这3个基因的表达情况进行了检测,结果也表明该方法具有良好的敏感性、特异性和重复性,可应用于临床样品的检测。

关键词：实时荧光定量聚合酶链反应 PD-1基因 PD-L1基因 PD-L2基因

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表达H5亚型禽流感病毒HA基因重组火鸡疱疹病毒的构建

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中国预防兽医学报 2010年第5期32卷 329-333页

作者：高宏博崔红玉石星明赵妍赵晓岩全炎铭董鹏闫帅黄婷婷杨瑞王玫王云峰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 河北北方学院动物科技学院/动物医学系河北张家口075131

为构建表达禽流感病毒(AIV)血凝素(HA)基因的重组疱疹病毒(HVT),本研究将AIV A/Goose/Guangdong/3/96(H5N1)的HA基因克隆于真核表达质粒中,构建了转移载体pUAB-gpt-HA。通过同源重组及霉酚酸筛选技术,将HA基因表达盒插入到HVT US10基因... 详细信息

为构建表达禽流感病毒(AIV)血凝素(HA)基因的重组疱疹病毒(HVT),本研究将AIV A/Goose/Guangdong/3/96(H5N1)的HA基因克隆于真核表达质粒中,构建了转移载体pUAB-gpt-HA。通过同源重组及霉酚酸筛选技术,将HA基因表达盒插入到HVT US10基因区,构建了一株表达H5亚型AIV HA基因的重组病毒HVT(rHVT-US10-HA)。经PCR、间接免疫荧光、western blot及红细胞凝集试验鉴定,重组病毒能稳定表达具有生物学活性的HA蛋白。rHVT-US10-HA的构建为禽流感基因工程病毒活载体疫苗的研究奠定了基础。

关键词：禽流感病毒重组火鸡疱疹病毒 HA基因

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Asia 1型口蹄疫病毒VP1基因的表达鉴定及其多抗制备

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中国预防兽医学报 2010年第4期32卷 285-288页

作者：朱远茂任宪刚史鸿飞高欲燃于作冯军科相文华薛飞东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 哈药集团生物疫苗有限公司黑龙江哈尔滨150030

本研究旨在表达口蹄疫病毒(FMDV)的VP1全基因并制备特异性的多克隆抗体。利用PCR方法扩增Asia 1 IND 49197株VP1全基因,将其克隆至原核表达载体pET-30a(+)中,在大肠杆菌BL21中进行表达。SDS-PAGE结果显示表达产物分子量约为31.6ku,以包... 详细信息

本研究旨在表达口蹄疫病毒(FMDV)的VP1全基因并制备特异性的多克隆抗体。利用PCR方法扩增Asia 1 IND 49197株VP1全基因,将其克隆至原核表达载体pET-30a(+)中,在大肠杆菌BL21中进行表达。SDS-PAGE结果显示表达产物分子量约为31.6ku,以包涵体的形式存在。通过Ni-NTA Purification System纯化后进行western blot和间接ELISA分析,结果显示重组蛋白能够被FMD阳性血清识别,具有良好的反应性。将纯化的重组蛋白免疫新西兰白兔制备多克隆抗体,ELISA测定抗体效价为1∶20480,病毒中和试验测定抗体效价为1∶64。本研究所表达的VP1蛋白可用于开发检测Asia1口蹄疫抗体的诊断试剂,所制备的多克隆抗体为进一步研究VP1的结构、功能以及抗原表位的鉴定提供了条件。

关键词： Asia I口蹄疫病毒 VP1基因多克隆抗体

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四株新城疫病毒NP基因的克隆与序列分析

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黑龙江畜牧兽医 2010年第8期 106-108页

作者：刘培欣刘怀然石跃刘胜旺孔宪刚东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

为了比较新城疫病毒(NDV)不同毒株之间在NP基因序列上的差异,探讨NP蛋白与NDV毒力的关系,研究以新城疫病毒分离株Go/CH/FJ/1/06(F1)、Mallard/CH/HLJ/1/06(JL01)、CK/CH/HLJ/1/06(ZY)和QY97为研究对象,应用RT-PCR技术扩增出其NP基因片段,对NP基因的全长序列进行了分析。结果表明:NP全长基因共1 470 nt,编码489个氨基酸;NP全长氨基酸同源性在89%～100%之间,其5′端序列高度保守,而3′端400～489位氨基酸之间差异较大,3′端的序列同源性为67.5%～100%,且不同毒株之间存在一定的变异规律,弱毒株之间序列相对保守,而强毒株在同一基因型内部序列相对保守,同源性均在84.4%以上。说明NP基因在病毒的进化过程中呈现一定的变异规律,可以用于区分NDV强毒株感染与疫苗免疫的鉴别诊断方法的研究。

关键词：新城疫病毒 NP基因序列分析

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鸡马立克氏病病毒细菌人工染色体技术展望

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中国家禽 2010年第3期32卷 8-12页

作者：董鹏崔红玉王云峰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 河北北方学院动物科技学院河北张家口075131

鸡马立克氏病病毒反向遗传操纵技术的发展促进了对其生物学特性研究的不断深入,文章回顾了MDV基因操纵技术的发展历程,综述了MDV细菌人工染色体的特点、构建策略、研究进展、应用局限性及未来发展潜力。

关键词：鸡马立克氏病病毒细菌人工染色体

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禽网状内皮组织增生症流行现状及检测技术研究进展

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动物医学进展 2010年第9期31卷 93-96页

作者：邓小芸祁小乐高玉龙高宏雷秦立廷王永强王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 黑龙江畜牧兽医职业学院黑龙江双城150111

禽网状内皮组织增生症(RE)是禽类一种重要的致瘤性和免疫抑制性疾病。近年来,国内外鸡群中网状内皮组织增生症病毒(REV)流行比较严重;REV与马立克病病毒(MDV)、鸡贫血病病毒(CAV)和J亚群禽白血病病毒(Avianleukosis virus subgroup J,AL... 详细信息

禽网状内皮组织增生症(RE)是禽类一种重要的致瘤性和免疫抑制性疾病。近年来,国内外鸡群中网状内皮组织增生症病毒(REV)流行比较严重;REV与马立克病病毒(MDV)、鸡贫血病病毒(CAV)和J亚群禽白血病病毒(Avianleukosis virus subgroup J,ALV-J)几种免疫抑制性病毒的混合感染在我国部分养鸡场中均普遍存在,使得鸡群处于免疫力低下的状态,导致禽流感、新城疫等重要疫苗免疫失败,并容易造成继发感染,使疫病的诊断和防控难度加大。另外,REV可以整合到MDV和鸡痘病毒(Fowlpox virus,FPV)基因组中,从而导致商品化疫苗受到污染,并可用做将外源基因插入到鸡和哺乳动物细胞内的表达载体;基于REV传统检测方法的基础上,新型的分子生物学检测技术如PCR、实时荧光PCR、LAMP提高了诊断REV的敏感性和特异性。

关键词：禽网状内皮组织增生症流行感染基因重组检测技术

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猪流行性腹泻疫苗的研究

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猪业科学 2010年第12期27卷 50-51页

作者：陈建飞冯力时洪艳崔尚金中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

猪流行性腹泻（porcine epidemic diarrhea，PED）是由尼多目（Nidovirales）、冠状病毒科（Comnaviridae）、冠状病毒属（Coronavirus）α-冠状病毒中的猪流行性腹泻病毒（porcine epidemic diarrhea virus，PEDV）引起的猪的一种急性、高度传染性的肠道疾病，该病以急性肠炎、呕吐、水样腹泻和脱水为主要特征。各种日龄的猪均易感，尤其是哺育仔猪，发病率高达100％，死亡率为30％～80％。

关键词：猪流行性腹泻病毒冠状病毒科疫苗急性肠炎冠状病毒属 virus 肠道疾病水样腹泻

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猪圆环病毒2型感染引起相关疾病的诊断技术

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兽医导刊 2010年第7期 24-27页

作者：黄立平刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所猪传染病研究室兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

1991年,加拿大首次报道了一种新的称为断奶仔猪多系统衰竭综合征（PMWS）的病症,该病可发生于健康状况良好的猪场,以5～12周龄的猪发病率较高,临床主要表现为生长迟缓、进行性消瘦、呼吸困难、贫血、黄疸和腹泻等。急性暴发猪群的死亡... 详细信息

1991年,加拿大首次报道了一种新的称为断奶仔猪多系统衰竭综合征（PMWS）的病症,该病可发生于健康状况良好的猪场,以5～12周龄的猪发病率较高,临床主要表现为生长迟缓、进行性消瘦、呼吸困难、贫血、黄疸和腹泻等。急性暴发猪群的死亡率可达10％，个别情况可高达50％，经病原学证明由PCV2感染所致。PCV2不但是PMWS的主要病原，而且还与其他几种病症有关系，

关键词：猪圆环病毒2型诊断技术相关疾病断奶仔猪多系统衰竭综合征感染 PCV2 健康状况生长迟缓

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鸡传染性喉气管炎及其防治

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兽医导刊 2010年第2期 31-32,63页

作者：赵妍石星明王云峰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

鸡传染性喉气管炎（ILT）是由鸡传染性喉气管炎病毒（ILTV）引起的一种急性、高度接触性呼吸道传染病。其特征是呼吸困难，咳嗽和咳出血样渗出物或黄色干酪样假膜，剖检可见喉头、气管黏膜肿胀、大面积出血，最终糜烂、坏死。

关键词：鸡传染性喉气管炎病毒防治呼吸道传染病呼吸困难接触性渗出物黏膜血样

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猪圆环病毒2型不同基因型毒株感染性克隆的构建及拯救病毒的体外生物学特性研究

猪圆环病毒2型不同基因型毒株感染性克隆的构建及拯救病毒的体外...

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第八次学术研讨会

作者：郭龙军陆月华危艳武黄立平刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨 150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究黑龙江哈尔滨 150001

环病毒2型(PCV2)感染引起的相关疾病日益严重，流行毒株基因不断发生变异，根据病毒基因组差异分为PCV2a、PCV2b和PCV2c 3个基因型，还有PCV2d基因型新报道，这些不同基因型PCV2毒株的致病性差异有待阐明。采用感染性克隆技术构建了不...

环病毒2型(PCV2)感染引起的相关疾病日益严重，流行毒株基因不断发生变异，根据病毒基因组差异分为PCV2a、PCV2b和PCV2c 3个基因型，还有PCV2d基因型新报道，这些不同基因型PCV2毒株的致病性差异有待阐明。采用感染性克隆技术构建了不同基因型代表性毒株，对拯救的毒株进行体外生物学特性试验。本研究构建了4个不同基因型的PCV2感染性分子克隆，经转化细胞后拯救4个克隆毒株，经核酸序列分析、病毒形态学观察、免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)等证实属于不同基因型的PCV2毒株;拯救的毒株均通过细胞连续传10代，病毒增殖能力稳定，毒价均可达到105.0 TCID50/mL;用具有中和病毒活性的单克隆抗体(1D2株)进行抗原捕获ELISA检测，拯救的PCV2a/rCL毒株与该单抗产生特异性反应，另3个克隆毒株(PCV2b/rYJ、rYJ和PCV2d/rBDH)与该单抗均无反应，表明它们属于不同基因型代表毒株。这表明我国猪群中PCV2流行毒株存在不同基因型，其病毒抗原特性各异，构建和拯救了4个代表不同基因型PCV2克隆毒株，为进一步研究其致病性差异奠定了基础。

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