检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2007年第6期29卷 409-413页

作者：王清华胡森王喜军步志高中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

裂谷热(Rift valley fever,RVF)是由裂谷热病毒(Rift valley fever virus,RVFV)引起的烈性人畜共患传染病。囊膜糖蛋白G是病毒的主要结构蛋白,由基因组M节段编码,翻译后裂解为Gn和Gc,其中Gn为诱导中和抗体的主要免疫原。本研究分别构建... 详细信息

裂谷热(Rift valley fever,RVF)是由裂谷热病毒(Rift valley fever virus,RVFV)引起的烈性人畜共患传染病。囊膜糖蛋白G是病毒的主要结构蛋白,由基因组M节段编码,翻译后裂解为Gn和Gc,其中Gn为诱导中和抗体的主要免疫原。本研究分别构建了表达RVFV囊膜蛋白G(n+c)和Gn的重组痘病毒rVV-G (n+c)和rVV-Gn。SDS-PAGE、Western blot结果表明分子量分别为56 Ku(Gn)、58 Ku(Gc)左右的重组蛋白在rVV-G(n+c)和rVV-Gn哺乳动物细胞获得准确表达[G(n+c)裂解为Gn和Gc],并具有特异免疫反应原性。以rBac-G(n+c)和rBac-Gn感染的昆虫细胞裂解物为包被抗原,间接ELISA检测血清抗体结果显示,rVV-G (n+c)和rVV-Gn免疫小鼠可诱导显著的Gn、Gc特异抗体反应,并且rVV-G(n+c)免疫诱导主要保护性免疫原Gn特异抗体反应效果优于rVV-Gn。结果表明,表达全长囊膜糖蛋白重组痘病毒rG(n+c)具有作为安全有效的重组病毒活载体疫苗的潜力,为RVF重组亚单位疫苗的探索研究奠定了基础。

关键词：裂谷热病毒囊膜蛋白重组痘病毒 ELISA

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猪瘟E^(rns)基因在大肠杆菌中的高效表达

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中国预防兽医学报 2005年第3期27卷 161-163页

作者：贾洪林仇华吉李娜朱庆虎罗玉子童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

提取猪瘟病毒石门系强毒株的基因组RNA,用RT_PCR扩增其Erns基因的cDNA,将其克隆到原核表达载体pPROEXTMHTc中,然后转化大肠杆菌DH5α,经IPTG诱导,Erns基因获得高效表达。SDS_PAGE分析显示,表达的重组融合蛋白表现分子量约为31ku。Wester... 详细信息

提取猪瘟病毒石门系强毒株的基因组RNA,用RT_PCR扩增其Erns基因的cDNA,将其克隆到原核表达载体pPROEXTMHTc中,然后转化大肠杆菌DH5α,经IPTG诱导,Erns基因获得高效表达。SDS_PAGE分析显示,表达的重组融合蛋白表现分子量约为31ku。Westernblot分析表明,重组蛋白具有良好的免疫原性。重组蛋白可用于制备诊断抗原,用于标记疫苗接种和野毒感染的鉴别诊断。

关键词：猪瘟病毒 RT-PCR 原核表达 E^rns基因大肠杆菌鉴别诊断

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猪瘟兔化弱毒疫苗株基因组的遗传变异分析

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中国预防兽医学报 2007年第1期29卷 9-12,26页

作者：王明杰李娜仇华吉朱庆虎李艳李国新童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

参照已发表的猪瘟病毒基因组序列设计了9对引物,用RT-PCR从猪瘟兔化弱毒疫苗株细胞培养物中扩增得到了覆盖猪瘟病毒基因组全长的9个cDNA片段,将所得cDNA片段分别克隆至pMD18-T载体中,经测序和拼接后,获得了猪瘟兔化弱毒疫苗株基因组全... 详细信息

参照已发表的猪瘟病毒基因组序列设计了9对引物,用RT-PCR从猪瘟兔化弱毒疫苗株细胞培养物中扩增得到了覆盖猪瘟病毒基因组全长的9个cDNA片段,将所得cDNA片段分别克隆至pMD18-T载体中,经测序和拼接后,获得了猪瘟兔化弱毒疫苗株基因组全序列。序列分析表明,猪瘟兔化弱毒疫苗株基因组全长12310个碱基,其5'非编码区(5'-NCR)和3'-NCR分别由373和239个碱基组成,在3'末端有富含T的碱基插入,其间为1个大的开放阅读框架,编码3898个氨基酸残基的多聚蛋白,与国内外已发表的另外7个猪瘟兔化弱毒疫苗株基因组全序列相比,核苷酸同源性为98.7%～99.9%,氨基酸同源性为98.6%～99.9%。基因组全序列比较显示,猪瘟兔化弱毒疫苗株基因组在遗传上相当稳定。

关键词：猪瘟病毒基因组序列同源性分析

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伪狂犬病病毒Bartha-K61株UL49基因的克隆和序列分析

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中国预防兽医学报 2005年第4期27卷 269-272页

作者：刘建华李娜仇华吉田志军童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

根据已经发表的伪狂犬病病毒(PRV)国内Ea株UL49基因序列,设计并合成了1对引物,通过PCR方法扩增到了PRVBartha-K61株UL49基因的编码区,并克隆到pMD18_T载体中。重组质粒pMD_UL49经XhoI酶切和PCR鉴定后,进行了序列测定和分析。结果表明,... 详细信息

根据已经发表的伪狂犬病病毒(PRV)国内Ea株UL49基因序列,设计并合成了1对引物,通过PCR方法扩增到了PRVBartha-K61株UL49基因的编码区,并克隆到pMD18_T载体中。重组质粒pMD_UL49经XhoI酶切和PCR鉴定后,进行了序列测定和分析。结果表明,重组质粒pMD_UL49含有PRVBartha_K61株UL49基因的编码区。同源性分析显示,PRVBartha_K61株UL49基因序列与国外Kaplan株、国内Ea株相应基因的核苷酸同源性分别为98.9%和94.1%,推导的氨基酸序列同源性分别为96.7%和87.2%。

关键词：伪狂犬病病毒 UL49基因克隆序列分析

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传染性支气管炎病毒S_1基因DNA免疫质粒的构建及其免疫原性

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中国兽医学报 1998年第6期18卷 527-530页

作者：步志高江国托王秀荣康丽娟祁贤陈万芳卢景良中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

为探讨ＤＮＡ免疫防制传染性支气管炎（ＩＢ）的可能性，以克隆的Ｍａｓｓｃｈｕｓｅｔｅ型类Ｍ４１地方分离ＱＤ株Ｓ１基因为免疫原基因，引入终止密码后插入ＳＶ４０启动子、增强子下游和ＳＶ４０ｐｏｌｙＡ信号上游，构建了Ｓ１基因... 详细信息

为探讨ＤＮＡ免疫防制传染性支气管炎（ＩＢ）的可能性，以克隆的Ｍａｓｓｃｈｕｓｅｔｅ型类Ｍ４１地方分离ＱＤ株Ｓ１基因为免疫原基因，引入终止密码后插入ＳＶ４０启动子、增强子下游和ＳＶ４０ｐｏｌｙＡ信号上游，构建了Ｓ１基因ＤＮＡ免疫表达质粒ｐＳＶＱＤＳ１。将大量扩增并经聚乙二醇纯化的ｐＳＶＱＤＳ１溶于ＰＢＳ，以３００μｇ／只的剂量肌肉注射免疫小鼠，于４周后采集分离免疫小鼠血清进行鸡胚病毒中和试验。结果表明，ｐＳＶＱＤＳ１能够诱导产生针对传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）Ｍ４１株的中和抗体，具有良好的免疫原性。

关键词：传染性支气管炎病毒 S1基因 DAN免疫家畜

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禽流感病毒血凝素基因的克隆及其DNA疫苗的免疫原性

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中国兽医学报 1997年第6期17卷 555-558页

作者：陈化兰于康震田国斌唐秀英卢景良中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

禽流感病毒（ＡＩＶ）的表面结构蛋白血凝素（ＨＡ）是其主要保护性抗原。本研究参考已发表的Ｈ７亚型ＡＩＶ的ＨＡ基因序列，设计合成了１对Ｈ７ＨＡ特异引物，以ＡＩＶＡ／Ａｆｒｉ．Ｓｔａｒ．／Ｅｎｇ－Ｑ／９８３／７９／（Ｈ７Ｎ... 详细信息

禽流感病毒（ＡＩＶ）的表面结构蛋白血凝素（ＨＡ）是其主要保护性抗原。本研究参考已发表的Ｈ７亚型ＡＩＶ的ＨＡ基因序列，设计合成了１对Ｈ７ＨＡ特异引物，以ＡＩＶＡ／Ａｆｒｉ．Ｓｔａｒ．／Ｅｎｇ－Ｑ／９８３／７９／（Ｈ７Ｎ１）（Ａ／Ａｆｒｉ．Ｓｔａｒ．／Ｅｎｇ）核酸为模板，通过ＲＴ－ＰＣＲ扩增出１条１．７ｋｂｃＤＮＡ片段。将这一片段定向克隆到ｐＵＣ１８中，对其５′端及３′端部分序列测定后，确证其为ＨＡｃＤＮＡ。将ＨＡ基因置于ＳＶ４０启动子和增强子下游，构建了这一基因的真核表达质粒ｐＳＶＨ７。以此质粒１００μｇ肌肉注射免疫３周龄ＳＰＦ鸡６只，４周后以１００倍鸡胚感染剂量（ＥＩＤ）的ＨＡ基因同源病毒对所有鸡进行攻毒，１周后以棉拭子进行泄殖腔病毒分离；免疫后１～６周每周对所有鸡翅静脉采血，分离血清，检测ＨＩ抗体。结果，１００μｇ免疫组鸡病毒分离数为０／６，对照组为６／６；攻毒后１周免疫组鸡ＨＩ效价为１∶３２～１∶６４，对照组为１∶４～１∶１６。表明所构建的ＨＡ基因表达质粒可作为基因疫苗诱导鸡产生免疫保护反应。

关键词：禽流感病毒血凝素基因 RT-PCR 克隆 DNA疫苗

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基于重组E^(rns)蛋白的猪瘟E^(rns)-ELISA的建立和优化

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畜牧兽医学报 2005年第10期36卷 1028-1032页

作者：贾洪林仇华吉朱庆虎李国新李娜罗玉子刘永刚李艳童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

将大肠杆菌表达的猪瘟病毒重组Erns蛋白经纯化后作为包被抗原,建立了检测猪瘟抗体的Erns-ELISA方法。经优化试验,确定了最适抗原包被量为0.15μg;血清最适稀释度为1∶100。经阻断试验、交叉反应试验和重复性试验证明,建立的Erns-ELISA... 详细信息

将大肠杆菌表达的猪瘟病毒重组Erns蛋白经纯化后作为包被抗原,建立了检测猪瘟抗体的Erns-ELISA方法。经优化试验,确定了最适抗原包被量为0.15μg;血清最适稀释度为1∶100。经阻断试验、交叉反应试验和重复性试验证明,建立的Erns-ELISA简便、特异、稳定,与基于重组E2蛋白的E2-ELISA的符合率高达96.7%,与基于全病毒抗原的Dot-ELISA符合率为77.5%。可以用于猪瘟抗体的血清学监测以及用作基于E2蛋白的标记疫苗配套的鉴别诊断。

关键词：猪瘟 E^rns-ELISA 鉴别诊断

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CpG DNA对鸡传染性喉气管炎病毒DNA疫苗免疫效果的影响

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中国农业科学 2001年第3期34卷 342-344页

作者：孟松树李曦智海东王云峰王柳童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

将分别构建的含有鸡传染性喉气管炎病毒（ＩＬＴＶ）王岗株ｇＢｇＣ和ｇＤ基因的重组真核表达质粒及ＣＰＧＤＮＡ佐剂分组肌肉注射ＳＰＦ鸡，检测了免疫后的抗体水平，并观测了攻毒后的免疫保护效果。实验结果显示，ＣｐＧＤＮＡ佐剂... 详细信息

将分别构建的含有鸡传染性喉气管炎病毒（ＩＬＴＶ）王岗株ｇＢｇＣ和ｇＤ基因的重组真核表达质粒及ＣＰＧＤＮＡ佐剂分组肌肉注射ＳＰＦ鸡，检测了免疫后的抗体水平，并观测了攻毒后的免疫保护效果。实验结果显示，ＣｐＧＤＮＡ佐剂和ＤＮＡ疫苗联合免疫后的抗体水平比单一使用ＤＮＡ疫苗的要高，而佐剂组的发病率、死亡率均低于非佐剂组，保护率则高于非佐剂组。这表明ＣｐＧＤＮＡ佐剂增强了ＩＬＴＶＤＮＡ疫苗的免疫效果。

关键词：传染性喉气管炎病毒 DNA疫苗 CpG DNA 免疫效果

来源：评论

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鸡传染性法氏囊病病毒的反向遗传研究

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病毒学报 2006年第3期22卷 237-240页

作者：祁小乐王笑梅高宏雷高玉龙中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

鸡传染性法氏囊病(infectious bursal disease,IBD)是由传染性法氏囊病病毒(infectious bursal disease virus,IBDV)引起的一种危害鸡的急性、高度接触性、免疫抑制性传染病。该病由Cosgrove于1962年作为一种新的疾病首次报道,最初病死... 详细信息

鸡传染性法氏囊病(infectious bursal disease,IBD)是由传染性法氏囊病病毒(infectious bursal disease virus,IBDV)引起的一种危害鸡的急性、高度接触性、免疫抑制性传染病。该病由Cosgrove于1962年作为一种新的疾病首次报道,最初病死率并不高(5%左右),但到了上世纪80年代末90年代初,陆续出现了变异株和超强毒株,病死率大大提高(80%左右)。该病现已大面积流行于欧州、东南北、非州、南美洲等。我国的流行情况也十分复杂,变异株和超强毒株均有报道。[第一段]

关键词：鸡传染性法氏囊病病毒遗传研究免疫抑制性传染病反向超强毒株 virus 流行情况病死率变异株接触性

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表达传染性支气管炎病毒S1基因重组鸡痘病毒的构建

引用

中国预防兽医学报 2006年第4期28卷 466-470页

作者：田占成孙永科王云峰智海东刘胜旺王玫童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

将鸡传染性支气管炎病毒S1基因插入到鸡痘病毒转移载体pSY681中,获得重组转移载体pSY681。将pSY681-IBVS1转染已感染亲本鸡痘病毒S-FPV-017株的鸡胚成纤维细胞,使其在鸡胚成纤维细胞内与鸡痘病毒基因组发生同源重组,产生表达鸡IBVS1蛋... 详细信息

将鸡传染性支气管炎病毒S1基因插入到鸡痘病毒转移载体pSY681中,获得重组转移载体pSY681。将pSY681-IBVS1转染已感染亲本鸡痘病毒S-FPV-017株的鸡胚成纤维细胞,使其在鸡胚成纤维细胞内与鸡痘病毒基因组发生同源重组,产生表达鸡IBVS1蛋白的重组鸡痘病毒rFPV-IBVS1。在含有X-gal的营养琼脂培养基上进行蓝斑筛选且进一步纯化14代。S1基因的PCR检测表明,获得的含传染性支气管炎病毒S1基因的重组鸡痘病毒能够稳定遗传,间接免疫荧光和Westernblot等试验证实该重组病毒在CEF内真实地表达了分子量约为90Ku的具有免疫学活性的IBVS1糖蛋白。

关键词：传染性支气管炎病毒重组鸡痘病毒 S1基因

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