检索结果-内蒙古大学图书馆

马传染性贫血病毒驴白细胞弱毒疫苗株及其亲本驴强毒株长末端重复序列(LTR)的启动子活性比较

病毒学报 2002年第4期18卷 342-347页

作者：周家喜孔宪刚张宝山刘胜旺刘丽玲孙成群刘相东刘永刚杨威中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

将马传染性贫血病毒驴强毒(donkey adaptedequineinfectiousanemiavirus,D AEIAV)、马传染性贫血病毒驴白细胞弱毒(donkeyleukocyteattenuatedEIAV,DLAEIAV)及EIAVWyoming株的全长长末端重复序列(LTR)分别克隆到报告基因载体pCAT Basicvector中,获得重组质粒p D A LTR CAT、p DLA LTR CAT及p Wyo LTR CAT。将这3个重组质粒分别体外转染EIAV阴性健康驴的白细胞,比较这三者LTR启动报告基因CAT表达的基础活性和在tat pcDNA3共转染条件下激活活性的差异。结果表明:在驴白细胞中,DLAEIAVLTR启动CAT表达的活性略高于D AEIAVLTR;而与EIAVWyoming株LTR比较,DLAEIAV与D AEIAV二者LTR启动CAT表达的活性都较低。在有共转染重组表达质粒tat pcDNA3条件下,D AEIAV、DLAEIAV及EIAVWyoming株LTR起始CAT表达的活性都得到提高,分别提高了4 8倍、6 0倍和3 2倍。上述结果提示,LTR可能是体现DLAEIAV驴白细胞适应性的因素,不一定是影响其毒力减弱的根本原因。

关键词：马传染性贫血病毒驴白细胞弱毒疫苗株亲本驴强毒株长末端重复序列启动子活性比较

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

α疱疹病毒gE和gI蛋白的多样化功能

引用

病毒学报 2019年第3期35卷 549-556页

作者：尹航周末仇华吉孙元中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150069

疱疹病毒为双股线性DNA病毒,是引起人与动物疾病的一类重要病原,成熟的病毒粒子由核心、衣壳、间层及囊膜组成。近年来,对以单纯疱疹病毒(Herpes simplex virus,HSV)及伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)等为代表的α疱疹病毒在病毒... 详细信息

疱疹病毒为双股线性DNA病毒,是引起人与动物疾病的一类重要病原,成熟的病毒粒子由核心、衣壳、间层及囊膜组成。近年来,对以单纯疱疹病毒(Herpes simplex virus,HSV)及伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)等为代表的α疱疹病毒在病毒复制和增殖、毒力、神经系统侵染机制以及对机体免疫应答影响等方面的研究取得了显著进展,在病毒基因组编码的多种蛋白中,gE和gI蛋白在上述各方面均发挥关键作用。本文就gE和gI蛋白在α疱疹病毒中的多样化功能的最新研究成果进行了总结,并指出其未来研究趋势。

关键词：疱疹病毒 gE和gI蛋白功能

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

新城疫F_(48)E_9株L基因克隆与鉴定

引用

中国预防兽医学报 2001年第4期23卷 247-252页

作者：闫丽辉曹殿军刘培欣孙建宏中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

本实验根据已知新城疫病毒L基因序列分别设计了两对引物 ,引物 1(L1)、引物 2 (L2 )、引物 3(L3)、引物 4(L4)。以L1/L2为引物可以扩出 40 5 0bpF4 8E9株L基因的A片段 (LA) ,以L3/L4为引物可扩增出 35 0 4bpF4 8E9株L基因的B片段 (LB)... 详细信息

本实验根据已知新城疫病毒L基因序列分别设计了两对引物 ,引物 1(L1)、引物 2 (L2 )、引物 3(L3)、引物 4(L4)。以L1/L2为引物可以扩出 40 5 0bpF4 8E9株L基因的A片段 (LA) ,以L3/L4为引物可扩增出 35 0 4bpF4 8E9株L基因的B片段 (LB)。LA和LB 2个片段经特异性双酶切后用T4DNA连接酶连接成完整的F4 8E9株L基因并克隆到pMD18_T载体中 ,对克隆后L基因 5’端、3’端和连接点处的核苷酸序列进行了测定 ,经DNASIS软件分析表明为NDVL基因 ,证明我们获得了F4

关键词：新城疫病毒 L基因克隆鉴定

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

牛支原体黏附素及黏附素结合蛋白研究进展

引用

畜牧兽医学报 2023年第8期54卷 3206-3216页

作者：武琪张玉娟刘桐辛九庆徐青元中国农业科学院哈尔滨兽医研究所、兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150069

牛支原体(***)是感染牛的一种重要病原体,可导致感染牛出现肺炎、关节炎、乳房炎、角膜结膜炎和生殖道炎等多种临床症状,给养牛业造成了巨大经济损失。***黏附素在***致病过程中发挥重要作用,包括病原感染、细胞入侵、免疫逃逸和毒力产... 详细信息

牛支原体(***)是感染牛的一种重要病原体,可导致感染牛出现肺炎、关节炎、乳房炎、角膜结膜炎和生殖道炎等多种临床症状,给养牛业造成了巨大经济损失。***黏附素在***致病过程中发挥重要作用,包括病原感染、细胞入侵、免疫逃逸和毒力产生。迄今为止,已鉴定出十多种***黏附素。这些黏附素主要结合宿主细胞的纤溶酶原(plasminogen,Plg)、纤连蛋白(fibronectin,FN)、硫酸肝素(heparin sulfate,HS)和淀粉样前体样蛋白-2(amyloid precursor-like protein-2,APLP2)。本文将对目前已知的***黏附素及其宿主细胞靶蛋白的研究现状进行综述,为***已知和未知黏附素的鉴定和应用提供参考。

关键词： Mycoplasma bovis 黏附素黏附素结合蛋白

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

5株水禽细小病毒全基因组序列分析

引用

畜牧兽医学报 2014年第11期45卷 1837-1843页

作者：贺亦龙邵周伍林白小飞张云中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

利用PCR技术扩增鹅细小病毒(GPV)ZJ、G3和LJY毒株与番鸭细小病毒(MDPV)DK和DYL毒株全基因组。序列分析结果表明,除LJY毒株非结构基因(NS)编码626个氨基酸外,其余4株NS全长1 884bp,编码627个氨基酸;5株的结构基因(VP)全长均为2 199bp,编... 详细信息

利用PCR技术扩增鹅细小病毒(GPV)ZJ、G3和LJY毒株与番鸭细小病毒(MDPV)DK和DYL毒株全基因组。序列分析结果表明,除LJY毒株非结构基因(NS)编码626个氨基酸外,其余4株NS全长1 884bp,编码627个氨基酸;5株的结构基因(VP)全长均为2 199bp,编码732个氨基酸。GPV、MDPV NS蛋白不同毒株之间相似性分别为95.9%~99.8%和96.8%~99.0%;而GPV与MDPV NS蛋白之间相似性为88.9%~90.4%。GPV、MDPV VP蛋白不同毒株之间的相似性分别为90.2%~100.0%和96.9%~99.3%,而GPV与MDPV VP蛋白之间的相似性为79.5%~81.6%,表明GPV抗原性不同于MDPV。MDPV与GPV NS蛋白均含有4个潜在的糖基化位点;在结构蛋白区域,MDPV VP含有8个潜在的糖基化位点,而GPV为6个糖基化位点,G3与LJY毒株分别缺失582—584NTT和703—705NRT潜在的糖基化位点。5株水禽细小病毒的进化分析表明,GPV、MDPV在进化上形成两个独立的分支,各个基因片段之间未发生重组。

关键词：鹅细小病毒番鸭细小病毒 NS基因 VP基因序列分析

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

两种MHC-B单倍型鸡群在发育过程中四种细胞因子转录水平的变化

引用

中国免疫学杂志 2012年第8期28卷 722-727页

作者：蔡文博李行武永淑杨柳张伟韩凌霞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

目的:从分子水平探讨鸡免疫系统的个体发生学。方法:利用双重荧光定量RT-PCR(dqRT-PCR)技术,对14～35日龄主要组织相容性复合体(MHC)单倍型鸡品系G2(B15单倍型)和G5系(B5单倍型)鸡群的肺组织(包括气管)、脾脏和外周血淋巴细胞(PBL)中IFN... 详细信息

目的:从分子水平探讨鸡免疫系统的个体发生学。方法:利用双重荧光定量RT-PCR(dqRT-PCR)技术,对14～35日龄主要组织相容性复合体(MHC)单倍型鸡品系G2(B15单倍型)和G5系(B5单倍型)鸡群的肺组织(包括气管)、脾脏和外周血淋巴细胞(PBL)中IFN-γ、IL-18、IL-4和IL-10的mRNA含量进行定量检测。结果:随日龄增长,两鸡群脾脏中IFN-γ转录水平升高,PBL中IL-18和IL-10整体下降。G5系鸡群脾脏中IFN-γ转录水平始终高于肺组织和PBL。两鸡群脾脏中IL-18转录水平均高于肺组织和PBL,脾脏中IL-4在孵化后早期转录水平较高,而肺组织中则出现较晚。两鸡群肺组织、脾脏和PBL中IL-10均在35日龄降到最低。结论:14～35日龄无特定病原体(SPF)鸡脾脏中IFN-γ转录水平随生长发育而增多,而肺组织和PBL中未见明显随生长发育变化的规律;PBL中IL-18和IL-10转录水平随生长发育而下降;18～35日龄,肺组织、脾脏和PBL中IL-10转录水平均随日龄增长而降低;不同MHC-B单倍型鸡群细胞因子转录水平受日龄调节相似。

关键词： IFN-γ IL-18 IL-4 IL-10 MHC 双重荧光定量RT-PCR

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

表达增强型绿色荧光蛋白的报告猪瘟病毒C株的构建及在家兔中生物学特性评价

引用

畜牧兽医学报 2020年第7期51卷 1699-1709页

作者：韩玉莹谢利豹李永锋仇华吉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150069

猪瘟兔化弱毒疫苗C株是我国自主研发的,用于预防猪瘟(CSF)的最好弱毒活疫苗。然而,现阶段的C株不具备标记功能,无法区分野毒感染与疫苗接种。本研究旨在将增强型绿色荧光蛋白(EGFP)编码基因插入猪瘟病毒(CSFV)C株将其构建为报告病毒,为... 详细信息

猪瘟兔化弱毒疫苗C株是我国自主研发的,用于预防猪瘟(CSF)的最好弱毒活疫苗。然而,现阶段的C株不具备标记功能,无法区分野毒感染与疫苗接种。本研究旨在将增强型绿色荧光蛋白(EGFP)编码基因插入猪瘟病毒(CSFV)C株将其构建为报告病毒,为C株的基础研究提供病毒示踪工具,同时提供构建标记C株疫苗的方法。本研究中,笔者在CSFV C株中引入EGFP基因,分别构建了表达增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的报告CSFV rHCLV-EGFP,以及用CSFV强毒Shimen(SM)株Npro基因替换C株Npro基因后再引入EGFP基因的嵌合报告病毒rHCLV-Npro(SM)-EGFP。通过猪瘟抗原ELISA检测,直接观察荧光及Western blot检测EGFP的蛋白表达等方法对拯救的病毒进行鉴定,并在细胞和家兔上评价这两株病毒的生物学特性。结果显示,两株报告病毒的抗原ELISA结果均为阳性;在感染rHCLV-EGFP的细胞中并未观察到绿色荧光也未检测到EGFP蛋白,但在感染rHCLV-Npro(SM)-EGFP的细胞中观察到EGFP的绿色荧光并检测到EGFP蛋白;细胞试验结果表明,两株报告病毒与亲本病毒具有相似的生长特性且遗传稳定;家兔试验发现,rHCLV-Npro(SM)-EGFP保留了C株的在家兔体内的生物学特性,但rHCLV-EGFP失去了C株诱导家兔定型热反应的能力。构建的嵌合报告病毒rHCLV-Npro(SM)-EGFP可以作为C株的报告病毒进行应用:可以对病毒示踪,用于研究C株的复制过程、病毒与细胞的相互作用;同时,该嵌合报告病毒也具备发展为标记C株疫苗的潜力。

关键词：猪瘟病毒 C株 Npro蛋白增强型绿色荧光蛋白生物学特性

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

流感病毒PA蛋白与宿主蛋白PCBP1的相互作用

引用

中国农业科学 2018年第17期51卷 3389-3396页

作者：赵青青李俊平梁立滨黄山雨周陈陈赵玉辉王倩周圆姜丽陈化兰李呈军中国农业科学院哈尔滨兽医研究所/兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室

【背景】PA蛋白是流感病毒RNA聚合酶复合体的重要组成部分,在流感病毒基因组的转录和复制过程中发挥重要作用。前期利用酵母双杂交技术(Y2H)筛选与流感病毒PA蛋白相互作用的宿主蛋白,获得多聚胞嘧啶结合蛋白1(poly(r C)-binding protein... 详细信息

【背景】PA蛋白是流感病毒RNA聚合酶复合体的重要组成部分,在流感病毒基因组的转录和复制过程中发挥重要作用。前期利用酵母双杂交技术(Y2H)筛选与流感病毒PA蛋白相互作用的宿主蛋白,获得多聚胞嘧啶结合蛋白1(poly(r C)-binding protein 1,PCBP1)。【目的】探索PCBP1蛋白与流感病毒PA蛋白的互作关系及其对流感病毒复制的影响,为深入理解流感病毒在宿主体内的复制调控机制提供数据。【方法】将诱饵质粒pGBKT7-PA与筛选到的重组质粒p GADT7-PCBP1以及阴性对照组和阳性对照组按照醋酸锂法分别共转化酵母感受态细胞,并涂布在3种营养缺陷型培养基上,30℃倒置培养5—7 d,观察酵母菌落生长情况和菌落颜色,回交验证PA蛋白与PCBP1蛋白在酵母系统中的相互作用。参照GenBank中录入的PA蛋白和人源PCBP1蛋白的序列,分别设计特异性扩增引物,构建真核重组表达质粒pCAGGS-Flag-PA和pCAGGS-Myc-PCBP1,将这两种真核表达质粒分别单独转染或共同转染HEK293T细胞,于转染48 h后裂解细胞,收获上清,留取少部分作对照,余下的样品逐步加入FLAG单抗和Protein G琼脂糖珠子进行免疫共沉淀(Co-IP),经SDS-PAGE和Western blot检测PA蛋白与PCBP1蛋白在哺乳动物细胞中的相互作用。利用慢病毒包装系统pLVX-IRES-Zs Green1在HEK293T细胞中包装假病毒,将假病毒侵染A549细胞后经超速流式分选构建PCBP1蛋白过表达细胞系,Western blot检测PCBP1过表达情况,然后用流感病毒WSN以0.01 MOI感染该过表达细胞系,于感染后24和48 h收获上清,对上清中的流感病毒进行蚀斑计数。合成PCBP1蛋白的si RNA,转染A549细胞下调PCBP1蛋白的表达,干扰后48 h通过Western blot检测PCBP1蛋白表达下调情况,并以MOI=0.01感染流感病毒WSN,收获感染后24和48 h的上清,进行蚀斑滴定计数。【结果】通过酵母回交验证发现诱饵质粒pGBKT7-PA与重组阳性质粒p GADT7-PCBP1的共转酵母菌落可以在SD/-2、SD/-4、SD/-4/X/A等3种营养缺陷型平板上正常生长,并且能分解底物X-α-Gal,使菌落呈现蓝色,与阳性对照组一致,表明PA蛋白与PCBP1蛋白在酵母系统中存在相互作用。免疫共沉淀试验发现PA蛋白可以将PCBP1蛋白沉淀下来,说明PA蛋白与PCBP1蛋白在哺乳动物细胞中存在相互作用。在PCBP1过表达细胞系中,PCBP1蛋白表达水平显著提高,流感病毒的复制滴度下降;而通过si RNA干扰后,PCBP1表达水平显著下降,流感病毒的复制滴度升高,表明PCBP1对流感病毒复制具有负调控作用。【结论】通过研究发现流感病毒PA蛋白与宿主蛋白PCBP1在酵母细胞和哺乳动物细胞中均存在相互作用,且宿主蛋白PCBP1对流感病毒的复制具有负调控作用。

关键词：酵母双杂交流感病毒 PA蛋白 PCBP1蛋白蛋白互作

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

表达O型口蹄疫病毒VP1基因的重组病毒BHV-1的构建与鉴定

引用

微生物学报 2009年第5期49卷 677-682页

作者：任宪刚薛飞朱远茂童光志王延辉冯军科祖立闯李娇史鸿飞高欲燃中国农业科学院哈尔滨兽医研究所大动物传染病研究室兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

【目的】为了构建表达口蹄疫病毒(O/China/99)VP1基因的牛疱疹病毒1型,将人工合成的口蹄疫病毒VP1基因插入到巨细胞病毒(CMV)启动子之下构建gE基因缺失转移载体。【方法】利用磷酸钙介导转染法将该转移载体与亲本病毒BHV-1/gE-/LacZ+的... 详细信息

【目的】为了构建表达口蹄疫病毒(O/China/99)VP1基因的牛疱疹病毒1型,将人工合成的口蹄疫病毒VP1基因插入到巨细胞病毒(CMV)启动子之下构建gE基因缺失转移载体。【方法】利用磷酸钙介导转染法将该转移载体与亲本病毒BHV-1/gE-/LacZ+的基因组DNA共转染牛鼻甲细胞后收获增殖的病毒。通过筛选白色病毒蚀斑,得到重组病毒BHV-1/gE-/VP1。【结果】PCR检测结果表明VP1基因已经插入到了重组病毒BHV-1/gE-的基因组中,间接免疫荧光试验和Western blot证实了BHV-1/gE-/VP1中的VP1基因在感染的细胞中获得了表达。【结论】本研究成功地构建了表达口蹄疫病毒VP1基因的重组病毒BHV-1/gE-/VP1,为研制口蹄疫及其他重要牛传染病的BHV-1病毒载体疫苗奠定了基础。

关键词：口蹄疫病毒 VP1基因牛疱疹病毒1型磷酸钙介导转染

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

重组细胞高产型H3N2猪流感病毒株的拯救

引用

病毒学报 2007年第6期23卷 471-476页

作者：杨涛刘明刘春国张云刘大飞陈浩童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室农业部动物流感重点开放实验室哈尔滨150001

为拯救出一株能够在动物传代细胞中高水平复制的H3N2亚型猪流感疫苗株,利用反向遗传操作技术,将A/Goose/Dalian/3/01(H9N2)毒株的PB1、PA、NP、M、NS基因和A/PR/8/34毒株的PB2基因作为内部基因与猪流感病毒A/Swine/Henan/S4/01(H3N2)毒... 详细信息

为拯救出一株能够在动物传代细胞中高水平复制的H3N2亚型猪流感疫苗株,利用反向遗传操作技术,将A/Goose/Dalian/3/01(H9N2)毒株的PB1、PA、NP、M、NS基因和A/PR/8/34毒株的PB2基因作为内部基因与猪流感病毒A/Swine/Henan/S4/01(H3N2)毒株的HA、NA基因进行重组,成功拯救出了具有高度细胞适应性毒株rH3N2株,该毒株接毒MDCK细胞60h后,血凝价可以达到1∶512,表明该毒株具有高度适应细胞繁殖特性,为H3N2亚型猪流感病毒细胞培养型疫苗的研制奠定了基础。

关键词：猪流感 H3N2亚型反向遗传操作技术细胞培养型流感疫苗

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：