检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2021年

作者：杨丽君郭龙军张健许嘉宇张璐冯力陈洪岩王玉娥中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/实验动物与比较医学团队/黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室

为探究信号传导及转录激活因子3(STAT3)在猪流行性腹泻病毒(PEDV)感染过程中的作用,本研究采用STAT3特异性si RNA处理HEK293和IPEC细胞,作用24 h后,通过荧光定量PCR和western blot检测结果显示其能够明显降低STAT3的m RNA水平和蛋白水平... 详细信息

为探究信号传导及转录激活因子3(STAT3)在猪流行性腹泻病毒(PEDV)感染过程中的作用,本研究采用STAT3特异性si RNA处理HEK293和IPEC细胞,作用24 h后,通过荧光定量PCR和western blot检测结果显示其能够明显降低STAT3的m RNA水平和蛋白水平;在此条件下接种PEDV,通过荧光定量PCR检测,显示当STAT3的m RNA水平降低时能够显著抑制PEDV的RNA水平,western blot实验结果也显示抑制STAT3内源性表达能够显著抑制PEDV复制。为进一步研究STAT3的作用机制,采用STAT3特异性si RNA处理这两种细胞,24 h后经过荧光定量PCR检测发现敲低STAT3后,干扰素刺激基因Mx A、ISG15以及IFN-β,IFN-λ的m RNA水平均显著升高。本研究对于进一步阐明STAT3参与PEDV感染引发的IFN抗病毒反应提供了实验依据。

关键词： STAT3 PEDV IFN

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B19和B21单倍型鸡NK细胞受体B-NK19和B-NK21的多克隆抗体制备及鉴定

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细胞与分子免疫学杂志 2014年第12期30卷 1274-1277页

作者：杨超张晓娜许峰铭文辉强廉传江陈洪岩韩凌霞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室实验动物与比较医学研究团队黑龙江哈尔滨150001

目的利用大肠杆菌系统表达对多种禽病存在敏感性差异的B19和B21单倍型鸡NK细胞抑制性受体B-NK基因,并制备其多克隆抗体。方法分别提取B19和B21鸡外周血淋巴细胞总RNA,采用反转录PCR法扩增B-NK基因(分别命名为B-NK19和B-NK21),克隆至pET-... 详细信息

目的利用大肠杆菌系统表达对多种禽病存在敏感性差异的B19和B21单倍型鸡NK细胞抑制性受体B-NK基因,并制备其多克隆抗体。方法分别提取B19和B21鸡外周血淋巴细胞总RNA,采用反转录PCR法扩增B-NK基因(分别命名为B-NK19和B-NK21),克隆至pET-30a原核表达载体中,经酶切和PCR鉴定构建重组质粒。转入到大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,SDS-PAGE分析外源蛋白的表达。将含有与组氨酸(His)标签融合表达的外源蛋白胶条切下,多点皮下免疫新西兰兔,分别制备B-NK19和B-NK21特异性多克隆抗体。利用Western blot法鉴定其组织相容性复合体(MHC)单倍型特异性。结果成功构建了原核表达重组质粒pET-B-NK19和pET-B-NK21,利用IPTG在37℃诱导4 h后目的蛋白获得表达,免疫5次后收获兔多克隆抗体,Western blot表明B-NK19和B-NK21蛋白存在免疫学交叉反应和部分特异性。结论对多种禽病具有敏感性差异的MHC单倍体型B19和B21鸡的NK细胞抑制性受体B-NK蛋白存在抗原反应交叉性,其多克隆抗体具有部分特异性。

关键词：鸡NK细胞受体 B-NK B19单倍型 B21单倍型多克隆抗体

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肠道菌群参与宿主免疫应答的作用及机制研究进展

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微生物学报 2020年第4期60卷 629-640页

作者：张贺王玉娥陈洪岩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室黑龙江哈尔滨150069

肠道菌群作为动物体内重要的组成部分,能够直接参与机体的免疫调控作用,促进机体免疫系统发育,维持正常免疫功能。同时,免疫系统对肠道菌群又有调控和制约作用。本文主要综述了肠道菌群的组成以及影响肠道菌群变化的因素,系统阐述了肠... 详细信息

肠道菌群作为动物体内重要的组成部分,能够直接参与机体的免疫调控作用,促进机体免疫系统发育,维持正常免疫功能。同时,免疫系统对肠道菌群又有调控和制约作用。本文主要综述了肠道菌群的组成以及影响肠道菌群变化的因素,系统阐述了肠道菌群与疾病相互作用的机制,总结了肠道菌群在宿主感染与免疫应答中的作用,为开展肠道菌群参与机体免疫应答的机制方面的研究提供新的思路。

关键词：肠道菌群免疫应答机制

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STAT3在猪流行性腹泻病毒感染的作用及机制初步探索撤回

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中国预防兽医学报 2018年

为探究信号传导及转录激活因子3（STAT3）在猪流行性腹泻病毒（PEDV）感染过程中的作用,本研究采用STAT3特异性si RNA处理HEK293和IPEC细胞,作用24 h后,通过荧光定量PCR和western blot检测结果显示其能够明显降低STAT3的m RNA水平和蛋... 详细信息

为探究信号传导及转录激活因子3（STAT3）在猪流行性腹泻病毒（PEDV）感染过程中的作用,本研究采用STAT3特异性si RNA处理HEK293和IPEC细胞,作用24 h后,通过荧光定量PCR和western blot检测结果显示其能够明显降低STAT3的m RNA水平和蛋白水平;在此条件下接种PEDV,通过荧光定量PCR检测,显示当STAT3的m RNA水平降低时能够显著抑制PEDV的RNA水平,western blot实验结果也显示抑制STAT3内源性表达能够显著抑制PEDV复制。为进一步研究STAT3的作用机制,采用STAT3特异性si RNA处理这两种细胞,24 h后经过荧光定量PCR检测发现敲低STAT3后,干扰素刺激基因Mx A、ISG15以及IFN-β,IFN-λ的m RNA水平均显著升高。本研究对于进一步阐明STAT3参与PEDV感染引发的IFN抗病毒反应提供了实验依据。

关键词： STAT3 PEDV IFN

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利用CRISPR/Cas9技术构建流感病毒高产细胞系MDCK-Tpl2^(-/-)

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中国生物工程杂志 2019年第1期39卷 46-54页

作者：刘赛宝李亚芳王辉王伟冉多良陈洪岩孟庆文新疆农业大学动物医学学院乌鲁木齐830000 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室哈尔滨150069

Tpl2是调节I型(IFNα/β)和II型(IFNγ) IFN的关键调控因子,对病毒感染期间产生有效免疫应答至关重要。为了建立支持流感病毒高效繁殖的新型MDCK细胞系,利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建Tpl2基因敲除的MDCK细胞,绘制其细胞生长曲线;根... 详细信息

Tpl2是调节I型(IFNα/β)和II型(IFNγ) IFN的关键调控因子,对病毒感染期间产生有效免疫应答至关重要。为了建立支持流感病毒高效繁殖的新型MDCK细胞系,利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建Tpl2基因敲除的MDCK细胞,绘制其细胞生长曲线;根据《中国药典》第三部,对细胞进行形态检查、内外源因子和致瘤性检测;流感病毒接种细胞(MOI=0. 1),测定12h、24h、48h、72h细胞培养上清的血凝滴度及72h TCID50滴度。结果:靶基因组测序结果显示,获得一株稳定敲除Tpl2的MDCK细胞(MDCK-Tpl2^(-/-));其与亲本细胞生长速率无显著差异,均为贴壁、上皮样细胞形态;细胞内细菌、真菌、支原体、病毒及致瘤性检测均为阴性;病毒接种后12h、24h、48h、72h,MDCK-Tpl2^(-/-)细胞培养上清的血凝效价提高了1. 78～2. 5倍。病毒接种后72h,MDCK-Tpl2^(-/-)细胞培养上清病毒的TCID50滴度提高了2. 8倍。结果表明,利用Tpl2缺陷型MDCK细胞系可以提高流感病毒产量,为提升疫苗质量奠定基础。

关键词： Tpl2 CRISPR/Cas9 MDCK-Tpl2^-/-细胞细胞质控禽流感病毒

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适合鸭瘟病毒弱毒增殖的MHC单倍型鸭胚肝间充质干细胞的建立

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中国兽医科学 2020年第2期50卷 183-188页

作者：佟相慧问婉欣陈洪岩韩凌霞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所实验动物与比较医学团队兽医生物技术国家重点实验室黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室

为了建立适于鸭瘟病毒(DPV)弱毒增殖的细胞系,利用4个主要组织相容性复合体(MHC)单倍型鸭品系,体外分离鸭胚肝细胞,在干细胞因子、白细胞抑制因子和成纤维细胞生长因子诱导下,获得鸭胚肝间充质干细胞(DuLMSC)。接种DPV疫苗株C-KCE后,结... 详细信息

为了建立适于鸭瘟病毒(DPV)弱毒增殖的细胞系,利用4个主要组织相容性复合体(MHC)单倍型鸭品系,体外分离鸭胚肝细胞,在干细胞因子、白细胞抑制因子和成纤维细胞生长因子诱导下,获得鸭胚肝间充质干细胞(DuLMSC)。接种DPV疫苗株C-KCE后,结果显示:F1~F10代均能稳定出现CPE;将F10病毒接种细胞24 h后,通过扫描电镜在胞质、胞核及细胞间隙均能够观察到典型的疱疹病毒粒子;F1至F10代均能扩增出DPV UL2基因片段,序列测定结果表明F1、F5、F10代的扩增产物与NCBI中公布的DPV株(EU082088)的核苷酸同源性为100%;组织培养半数感染量和一步生长曲线结果表明,源自B4系单倍型鸭的DuLMSC细胞系增殖DPV的病毒含量明显高于B1、B2和B3系。本研究为稳定培养鸭瘟病毒提供了优良稳定的实验材料。

关键词：鸭瘟病毒鸭胚肝间充质干细胞主要组织相容性复合体单倍型

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主要组织相容性复合体单倍型鸭抗原处理相关转运体单抗的制备

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中国实验动物学报 2019年第2期27卷 200-207页

作者：王兴童孟兴佟相慧陈洪岩韩凌霞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所实验动物与比较医学团队兽医生物技术国家重点实验室黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室哈尔滨150069

目的制备鸭抗原处理相关转运体(TAP)特异性单抗,为深入利用实验鸭开展免疫学研究提供实验材料。方法利用大肠埃希菌诱导表达主要组织相容性复合体(MHC)单倍型HBW-SPF鸭TAP蛋白肽结合区片段,表达产物经镍柱纯化后免疫BALB/c小鼠,采用ELIS... 详细信息

目的制备鸭抗原处理相关转运体(TAP)特异性单抗,为深入利用实验鸭开展免疫学研究提供实验材料。方法利用大肠埃希菌诱导表达主要组织相容性复合体(MHC)单倍型HBW-SPF鸭TAP蛋白肽结合区片段,表达产物经镍柱纯化后免疫BALB/c小鼠,采用ELISA技术筛选特异性单抗分泌杂交瘤细胞株。将阳性细胞株制备小鼠腹水,作为一抗,与多次截短表达TAP蛋白肽结合区进行蛋白免疫印迹试验,鉴定单抗针对的抗原表位。通过间接免疫荧光试验比较该单抗对实验鸭和鸡外周血淋巴细胞的反应性,利用免疫组织化学技术检测对SPF鸡、SPF鸭、鹌鹑、鹅和SPF猪的特异性。结果获得一株鸭TAP单抗1A6,抗原表位位于^(297)NARHQMLQQAVLDATAGTGMVVQEAI^(322),对鸡和鸭外周血淋巴细胞具有免疫荧光反应性;在鸡和鸭的肠黏膜固有层检测到大量特异性信号,在猪、鹌鹑和鹅没有检测到信号。结论获得了一株具有鸡和鸭反应性的抗原转运相关体特异性的单抗,可运用于禽类实验动物在禽病学和禽免疫学方面的研究。

关键词：主要组织相容性复合体单倍型鸭抗原处理相关转运体单克隆抗体特异性

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鸭抗原相关转运体TAP1和TAP2原核表达及多克隆抗体的制备

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黑龙江畜牧兽医 2015年第6期 40-43页

作者：张晓娜吴少莲文辉强廉传江陈洪岩韩凌霞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/实验动物与比较医学研究团队哈尔滨150001

HBK鸭是国家禽类实验动物种子中心培育的我国首个无特定病原体(SPF)鸭,已封闭饲养9个世代。鸭抗原处理相关转运体(TAP)基因位于主要组织相容性复合体区域,TAP1和TAP2组成的二聚体具有将抗原肽从细胞质转运入内质网腔的重要作用。为了表... 详细信息

HBK鸭是国家禽类实验动物种子中心培育的我国首个无特定病原体(SPF)鸭,已封闭饲养9个世代。鸭抗原处理相关转运体(TAP)基因位于主要组织相容性复合体区域,TAP1和TAP2组成的二聚体具有将抗原肽从细胞质转运入内质网腔的重要作用。为了表达鸭抗原相关转运体蛋白,并制备特异性多克隆抗体,试验采用PCR方法扩增HBKB系鸭的TAP1完整基因和TAP2基因的预测肽结合区(PBD),分别命名为TAP1和TAP2PBD,克隆至原核表达载体pET-30a(+)中,获得重组质粒p ET-TAP1和p ET-TAP2PBD,转化大肠杆菌BL21感受态细胞,经IPTG诱导表达后进行SDSPAGE及Western-blot鉴定,表达产物经SDS-PAGE后分别切胶免疫Balb/c小鼠制备多克隆抗体。结果表明:两种目的蛋白均获得了正确表达。说明试验制备了高特异性鸭TAP1和TAP2多克隆抗体,可用于水禽TAP的结构和功能研究。

关键词：鸭抗原相关转运体肽结合区原核表达多克隆抗体

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犬腺病毒1型感染普通级比格犬中Ⅰ和Ⅲ型干扰素及其受体分子表达量的比较

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中国兽医科学 2021年第5期51卷 552-561页

作者：孟兴问婉欣佟相慧陈洪岩韩凌霞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所实验动物与比较医学团队/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室黑龙江哈尔滨150069

比较普通级比格犬感染犬腺病毒1型(CAV-1)后外周血和肝内Ⅰ型和Ⅲ型干扰素(IFN)及其受体分子的转录水平,同时评估CAV-2疫苗免疫对CAV-1感染试验的影响。对3只2月龄普通级比格犬后肢肌肉注射105.7TCID50CAV-1纯化病毒,在攻毒后12 d内记... 详细信息

比较普通级比格犬感染犬腺病毒1型(CAV-1)后外周血和肝内Ⅰ型和Ⅲ型干扰素(IFN)及其受体分子的转录水平,同时评估CAV-2疫苗免疫对CAV-1感染试验的影响。对3只2月龄普通级比格犬后肢肌肉注射105.7TCID50CAV-1纯化病毒,在攻毒后12 d内记录体温变化,每日采集咽拭子和肛拭子,于攻毒后第3、6、9、12天采集前腔静脉血,利用常规PCR检测CAV-1和CAV-2核酸,利用间接免疫荧光试验(IFA)检测血清抗体效价。攻毒后第12天进行安乐死,采集心脏血和肝,利用定量PCR法检测血液和肝中IFN-α、IFN-β、IFNβR、IFN-λ1、IFNλ1R、IFNλ3和IFNλ3R等的转录水平。结果显示,31#犬的体温次日即升至39.7℃,出现便血和轻度腹泻,攻毒后第3天外周血中病毒核酸拷贝数达到峰值,随后在胸腺、腹股沟淋巴结、颌下淋巴结、肠系膜淋巴结和肝等组织中检测到CAV-1核酸,攻毒后第12天肝中IFN-λ1R的转录水平显著高于其他分子,IFA效价为1∶320。34#犬和35#犬的体温变化、临床症状、病毒血症、血清抗体效价和干扰素表达量均低于31#犬。实验早期犬的咽拭子和肛拭子中均检测到不同含量的CAV-2核酸。结果表明,CAV-1感染犬血液中的Ⅰ型和Ⅲ型干扰素表达规律不明显,肝是IFN-λ1主要的效应器官,同时CAV-2疫苗免疫对普通级实验犬的CAV-1感染研究具有一定的干扰。

关键词：比格犬犬腺病毒1型干扰素干扰素受体转录表达水平

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鸡NK细胞相关C型凝集素样编码基因研究进展

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动物医学进展 2015年第6期36卷 134-137页

作者：吴少莲韩凌霞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所实验动物与比较医学团队兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

鸡的C型凝集素样基因编码包括鸡自然杀伤(natural killer,NK)细胞受体在内的许多免疫分子。鸡C型凝集素样编码基因分别位于自然杀伤基因复合体(NK gene complex,NKC)和主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)区域,... 详细信息

鸡的C型凝集素样基因编码包括鸡自然杀伤(natural killer,NK)细胞受体在内的许多免疫分子。鸡C型凝集素样编码基因分别位于自然杀伤基因复合体(NK gene complex,NKC)和主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)区域,在NKC区为CD69和CD94/NKG2,在MHC区为相邻的B-NK和B-Lec基因。B-NK是目前唯一已证明表达于NK细胞上的凝集素样受体,其配体尚不清楚,但是已经证明B-NK能够和活化的细胞上的配体结合。论文主要讨论CD69、CD94/NKG、B-NK和BLec 4个基因的系统发育比较和蛋白质结构的研究进展。

关键词：鸡 NK细胞 C型凝集素样受体

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