检索结果-内蒙古大学图书馆

弓形虫SAG1和GRA4基因的原核表达及其重组猫疱疹病毒Ⅰ型转移载体的构建

中国预防兽医学报 2013年第11期35卷 886-890页

作者：高洋程子英王铭郑君贾洪林鲁承延边大学农学院动物医学系 133000 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室-美国密西根州立大学天然免疫联合实验室黑龙江哈尔滨150001 吉林农业大学动物医学院吉林长春130118 东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030

为构建表达弓形虫抗原的重组猫疱疹病毒Ⅰ型(FHV-1)转移载体,本研究以pBluesciptⅡ-SK(-)为骨架载体,分别插入FHV-1 TK基因的5'(2 000 bp)和3'(1 700 bp)同源臂、pCAGGs载体中含有启动子和终止信号的表达盒以及弓形虫RH株SAG1或... 详细信息

为构建表达弓形虫抗原的重组猫疱疹病毒Ⅰ型(FHV-1)转移载体,本研究以pBluesciptⅡ-SK(-)为骨架载体,分别插入FHV-1 TK基因的5'(2 000 bp)和3'(1 700 bp)同源臂、pCAGGs载体中含有启动子和终止信号的表达盒以及弓形虫RH株SAG1或GRA4基因,构建重组FHV-1的转移载体pBS-TK-SAG1和pBS-TK-GRA4。将其分别转染于293T细胞,通过原核细胞表达的截短SAG1和GRA4重组蛋白制备的鼠多克隆抗体进行western blot鉴定。结果显示,制备的弓形虫SAG1和GRA4多克隆抗体能够特异性识别重组表达和虫体表达的天然的SAG1和GRA4两种弓形虫蛋白,分子量一致,分别为35 ku和45 ku。本研究为表达弓形虫RH株SAG1和GRA4基因的猫重组疱疹病毒Ⅰ型载体疫苗的研制奠定了基础。

关键词：弓形虫 SAG1 GRA4 猫疱疹病毒I型转移载体

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弓形虫酵母双杂交cDNA文库构建及与AMA1羧基端相互作用蛋白的筛选

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中国预防兽医学报 2014年第3期36卷 201-204页

作者：程子英高洋王铭郑君贾洪林赵权吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室-美国密西根州立大学天然免疫联合实验室黑龙江哈尔滨150001 延边大学农学院动物医学系吉林延吉133000 东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030

为筛选弓形虫AMA1基因羧基端(AMA1c)在弓形虫中的相互作用分子,本研究采用MatchmakerTM Gold酵母双杂交系统,构建了弓形虫RH株酵母双杂交cDNA文库,文库滴度达到4.26×107cfu/mL。以构建的pGBKT7-AMA1c诱饵质粒,使用PEG/LiAc法转化... 详细信息

为筛选弓形虫AMA1基因羧基端(AMA1c)在弓形虫中的相互作用分子,本研究采用MatchmakerTM Gold酵母双杂交系统,构建了弓形虫RH株酵母双杂交cDNA文库,文库滴度达到4.26×107cfu/mL。以构建的pGBKT7-AMA1c诱饵质粒,使用PEG/LiAc法转化酵母菌株Y2H,利用表型筛选法检测AMA1c的自激活作用并进行酵母双杂交筛选,得到阳性克隆,根据序列比对分析结果,进一步进行共转化验证。结果表明,诱饵蛋白在酵母双杂交系统中具有无毒性和自激活作用,而且通过酵母双杂交筛选共得到13个与AMA1c蛋白相互作用的虫体蛋白。本研究结果为进一步研究AMA1c的功能奠定了基础。

关键词：弓形虫 AMA1羧基端酵母双杂交自激活

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新孢子虫cDNAT7噬菌体展示文库的构建及筛选

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中国预防兽医学报 2014年第4期36卷 277-280页

作者：王铭高洋程子英郑君贾洪林宋铭忻东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室一美国密西根州立大学天然免疫联合实验室黑龙江哈尔滨150001 延边大学农学院动物医学系吉林延吉133000 吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118

为筛选犬新孢子虫相关抗原,本研究利用T7噬菌体展示技术构建犬新孢子虫cDNA文库,并利用阳性血清筛选新型犬新孢子虫抗原蛋白。所构建的新孢子虫cDNA文库的原始文库重组克隆数为6×106pfu,扩增后文库滴度为3×1010pfu/mL。分别... 详细信息

为筛选犬新孢子虫相关抗原,本研究利用T7噬菌体展示技术构建犬新孢子虫cDNA文库,并利用阳性血清筛选新型犬新孢子虫抗原蛋白。所构建的新孢子虫cDNA文库的原始文库重组克隆数为6×106pfu,扩增后文库滴度为3×1010pfu/mL。分别提取犬新孢子虫免疫小鼠血清和感染小鼠血清中的IgG,并利用纯化的IgG对构建的新孢子虫cDNA文库进行筛选。经过3轮筛选,共鉴定出14个不同的犬新孢子虫基因插入片段。经过分析,有7个基因编码的是功能未知蛋白,其它为蛋白质合成相关蛋白、核苷酸代谢相关蛋白、核糖体蛋白、微线体蛋白、棒状体蛋白和致密颗粒蛋白。对这些蛋白的进一步研究将有助于开发新孢子虫病的诊断试剂和疫苗。

关键词：新孢子虫病 T7噬菌体展示文库抗原候选基因

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HIV-1 Vpr蛋白在***细胞中相互作用分子的筛选与鉴定

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第十届全国病毒学学术研讨会

作者：郑君贾洪林郑永辉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室-美国密西根州立大学天然免疫联合实验室哈尔滨马端街427号150001

Vpr在灵长类慢病毒(包括HIV-1,HIV-2,SIV)中是一种高度保守的辅助性蛋白,在病毒复制和疾病进程中起重要作用.HIV Vpr有两个重要的活性,即阻滞G2细胞分裂周期和促进病毒在巨噬细胞中的复制.之前,我们报道了人的CD4+ *** (NKR)T细胞对于HI...

Vpr在灵长类慢病毒(包括HIV-1,HIV-2,SIV)中是一种高度保守的辅助性蛋白,在病毒复制和疾病进程中起重要作用.HIV Vpr有两个重要的活性,即阻滞G2细胞分裂周期和促进病毒在巨噬细胞中的复制.之前,我们报道了人的CD4+ *** (NKR)T细胞对于HIV-1的限制性是野生型病毒复制的1000倍.从亲本的NKR细胞中,我们通过有限稀释法分离了8个亚克隆.这些克隆对于HIV病毒感染展现了三种限制水平：不允许,半允许和允许,所有细胞均不支持Vpr缺陷型HIV-1的复制,证明这些细胞表达对Vpr敏感的HIV-1限制性因子.

关键词：

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犬新孢子虫AMA1基因重组猫疱疹病毒I型转移载体的构建及真核表达

犬新孢子虫AMA1基因重组猫疱疹病毒I型转移载体的构建及真核表达

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第四届全国人畜共患病学术研讨会 2014年中国狂犬病年会中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第四次学术研讨会

作者：郭焕平张守发高洋贾洪林贾立军延边大学农学院动物医学系中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室-美国密西根州立大学天然免疫联合实验室

为构建犬新孢子虫AMA1基因重组猫疱疹病毒Ⅰ型(FHV-I)转移质粒pBS-TK-AMA1,并在真核细胞中表达,本试验以pBS-TK重组质粒为载体,插入犬新孢子虫AMA1基因。其中pBS-TK重组质粒是含有FHV-1 TK基因的5'(2000 bp)和3'(1700 bp)同源臂... 详细信息

为构建犬新孢子虫AMA1基因重组猫疱疹病毒Ⅰ型(FHV-I)转移质粒pBS-TK-AMA1,并在真核细胞中表达,本试验以pBS-TK重组质粒为载体,插入犬新孢子虫AMA1基因。其中pBS-TK重组质粒是含有FHV-1 TK基因的5'(2000 bp)和3'(1700 bp)同源臂、pCAGGs载体中含有启动子和终止信号的表达盒的pBluesciptⅡ-SK(-)载体。通过转染试剂PEI将pBS-TK-AMA1转移载体转染至293T细胞,以制备的鼠抗犬新孢子虫AMA1蛋白的特异性抗体为一抗,应用IFAT和westernblot进行鉴定。结果显示,构建的病毒转移载体pBS-TK-AMA1可以在293T细胞内获得表达,表达蛋白分子量为68 kDa。本试验为犬新孢子虫AMA1基因的猫重组疱疹病毒Ⅰ型载体疫苗的研制奠定了基础。

关键词：犬新孢子虫 AMA1基因猫疱疹病毒Ⅰ型(FHV-1)转移质粒表达

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弓形虫AMA1尾巴在侵入和复制过程中的功能研究

弓形虫AMA1尾巴在侵入和复制过程中的功能研究

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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第七次代表大会暨第十二次学术研讨会

作者：郑君程子英贾洪林中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室美国密西根州立大学天然免疫联合实验室哈尔滨马端街427号150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室美国密西根州立大学天然免疫联合实验室哈尔滨马端街427号150001 吉林农业大学畜牧兽医学院长春新城大街2888号130118

为了开发一种能真正达到彻底治疗弓形虫感染的方法,急需深入了解弓形虫调控虫体复制和发育的分子机制.粘附并侵入宿主细胞涉及到虫体顶端分泌器官微线体分泌的微线蛋白,其中一个重要成分便是由微线体分泌到虫体表面的一个保守的l型跨膜... 详细信息

为了开发一种能真正达到彻底治疗弓形虫感染的方法,急需深入了解弓形虫调控虫体复制和发育的分子机制.粘附并侵入宿主细胞涉及到虫体顶端分泌器官微线体分泌的微线蛋白,其中一个重要成分便是由微线体分泌到虫体表面的一个保守的l型跨膜蛋白一顶膜抗原1.对于AMA1的功能研究大多集中在胞外功能区,但是AMA1的细胞质尾巴也发挥着重要的作用.最初AMA1短小的细胞质尾巴被认为只是提供蛋白运输的信号,最近的一些研究证实它并没有细胞器分泌的靶向作用,而是对虫体的侵入机制和细胞周期的调控机制产生一定的影响,这就为AMA1细胞质尾巴的功能研究提供了线索.因此,本研究将利用酵母双杂交,基因重组等手段,进一步探讨弓形虫AMA1在侵入和复制过程中的功能,为弓形虫的生长调控机制研究奠定基础.

关键词：兽医学弓形虫细胞质尾巴分子机制生长调控

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中国几种旧大陆猴APOBEC3G/F基因的调查分析

中国几种旧大陆猴APOBEC3G/F基因的调查分析

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第十届全国病毒学学术研讨会

作者：于长清周建华郑永辉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室-美国密歇根州立大学天然免疫联合实验室哈尔滨马端街427号150001

为实现对HIV-1在旧大陆猕猴种属跨种传播的可能性进行探讨,我们对中国境内几种主要的1日大陆恒河猴品系的主要逆转录病毒的固有免疫限制因子APOBEC3G进行了调查分析.APOBEC3G的基因序列分析以及功能研究表明,几种猴品系的野型APOBEC3G... 详细信息

为实现对HIV-1在旧大陆猕猴种属跨种传播的可能性进行探讨,我们对中国境内几种主要的1日大陆恒河猴品系的主要逆转录病毒的固有免疫限制因子APOBEC3G进行了调查分析.APOBEC3G的基因序列分析以及功能研究表明,几种猴品系的野型APOBEC3G分子体外都能够限制HIV-1;用SIVmacVif替换HIV-1所构建的重组HIV-1病毒能够有效地克服以上猴品系的复制限制.非洲绿猴SIVagmVif的体外功能分析表明,其可以有效地拮抗几种猴品系的APOBEC3G/APOBEC3F,提示SIVagmVif可能比SIVmacVif更能有效地帮助HIV-1在旧大陆猴细胞内进行有效的复制.此外,我们将重组HIV-1从单一细胞嗜性转化为双重囊膜嗜性的病毒,可能增强其对猴子宿主靶细胞的感染能力.

关键词：固有免疫 APOBEC3G HIV-1

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犬新孢子虫AMA1基因重组猫疱疹病毒Ⅰ型转移载体的构建及真核表达

犬新孢子虫AMA1基因重组猫疱疹病毒Ⅰ型转移载体的构建及真核表达

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第四届人畜共患病学术研讨会、2014年中国狂犬病年会、中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第四次学术研讨会

作者：郭焕平张守发高洋贾洪林贾立军延边大学农学院动物医学系吉林延吉 133002 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室-美国密西根州立大学天然免疫联合实验室黑龙江哈尔滨 150001

为构建犬新孢子虫AMA1基因重组猫疱疹病毒Ⅰ型(FHV-Ⅰ)转移质粒pBS-TK-AMA1,并在真核细胞中表达,本试验以pBS-TK重组质粒为载体,插入犬新孢子虫AMA1基因.其中pBS-TK重组质粒是含有FHV-1TK基因的5'(2000 bp)和3'(1700 bp)同源臂... 详细信息

为构建犬新孢子虫AMA1基因重组猫疱疹病毒Ⅰ型(FHV-Ⅰ)转移质粒pBS-TK-AMA1,并在真核细胞中表达,本试验以pBS-TK重组质粒为载体,插入犬新孢子虫AMA1基因.其中pBS-TK重组质粒是含有FHV-1TK基因的5'(2000 bp)和3'(1700 bp)同源臂、pCAGGs载体中含有启动子和终止信号的表达盒的pBluesciptⅡ-SK(-)载体.通过转染试剂PEI将pBS-TK-AMA1转移载体转染至293T细胞,以制备的鼠抗犬新孢子虫AMA1蛋白的特异性抗体为一抗,应用IFAT和western blot进行鉴定.结果显示,构建的病毒转移载体pBS-TK-AMA1可以在293T细胞内获得表达,表达蛋白分子量为68kDa.本试验为犬新孢子虫AMA1基因的猫重组疱疹病毒Ⅰ型载体疫苗的研制奠定了基础.

关键词：犬新孢子虫 AMA1基因猫疱疹病毒Ⅰ型(FHV-1)转移质粒表达

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A型流感M1蛋白和细胞蛋白间的相互作用

A型流感M1蛋白和细胞蛋白间的相互作用

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第十届全国病毒学学术研讨会

作者：邓其骥盛自张李锋郑永辉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室-美国密西根州立大学天然免疫联合实验室哈尔滨马端街427号150001 美国南达科他州立大学兽医和生物医药系布鲁金斯南达科他州5700 美国南达科他州立大学生物化学系布鲁金斯南达科他州57006 美国南达科他州立大学兽医和生物医药系布鲁金斯南达科他州57006 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室-美国密西根州立大学天然免疫联合实验室哈尔滨马端街427号150001

流感病毒拥有少量的遗传物质，因此病毒需要借助宿主细胞的机能才能完成自身的复制.了解宿主蛋白或者蛋白复合体和病毒蛋白间接或者直接的相互作用，对研究病毒如何利用宿主细胞的机能来完成自身的复制有着重要的作用.通过免疫沉淀和质...

流感病毒拥有少量的遗传物质，因此病毒需要借助宿主细胞的机能才能完成自身的复制.了解宿主蛋白或者蛋白复合体和病毒蛋白间接或者直接的相互作用，对研究病毒如何利用宿主细胞的机能来完成自身的复制有着重要的作用.通过免疫沉淀和质谱的方法，发现了293T中的99种细胞蛋白和A型流感病毒M1蛋白(WSN/33)相互作用.IPA(Ingenuity Pathway Analysis)分析表明被流感的M1蛋白利用的宿主蛋白主要分布在5条经典信号途径中，包括泛素化信号途径，肌动蛋白细胞骨架信号途径，上皮细胞粘附连接信号途径，病毒释放信号途径以及DNA双链修复信号途径.

关键词：

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