检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：刘慧芳刘思国王春来司微王聃杜艳芬赫明雷常月红中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室黑龙江哈尔滨 150001

本研究利用体内诱导抗原技术(IVIAT)对胸膜肺炎放线杆菌体内表达的基因进行了研究.首先将我们收集到的5份感染了APP1的猪血清混合,分别吸附体外培养的.APP1和大肠杆菌DE3的全菌及全菌的裂解物,以充分去除体外表达蛋白的抗体,经过该吸附... 详细信息

本研究利用体内诱导抗原技术(IVIAT)对胸膜肺炎放线杆菌体内表达的基因进行了研究.首先将我们收集到的5份感染了APP1的猪血清混合,分别吸附体外培养的.APP1和大肠杆菌DE3的全菌及全菌的裂解物,以充分去除体外表达蛋白的抗体,经过该吸附过程后OD405分别由原来的0.927和0.239降低为0.196和0.078,表明混合血清得到了很好的吸附.同时,将APP1 基因组DNA以Bsp1431进行酶切,回收500bp-2000bp的片段,与经过BamHI酶切的ET30a/b/c进行连接,构建了APP1基因组质粒表达文库,库容量为2.0×105CFU,用吸附后的血清通过菌落原位免疫杂交来筛选该基因组表达文库,筛选了3000个菌落初步获得16个阳性克隆,通过再次筛选最后确定获得12个阳性克隆.本研究为抗病原菌药物、疫苗乃至新的诊断试剂的开发提供依据.

关键词：猪病胸膜肺炎放线杆菌体内诱导抗原技术菌落原位免疫杂交

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牛分枝杆菌新型DNA疫苗对BALB/c小鼠的免疫效果研究

牛分枝杆菌新型DNA疫苗对BALB/c小鼠的免疫效果研究

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中国微生物学会兽医微生物学专业委员会2006年学术年会

作者：宫强刘思国郭设平王春来王勇刘建东赵昆迟磊孔宪刚中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室黑龙江哈尔滨150001

利用PCR技术从牛分枝杆菌ValleeⅢ菌株中扩增出esat-6、mpb70和mpb83基因,通过重叠延伸剪接技术(SOE)合成mpb70-mpb83融合基因,连接真核表达载体pCDNA3.1(+),构建重组质粒pCDNA-esat-6(简称为pCE6)和pCDNA-mpb70-mpb83-esat-6(简称为pC70-83-E6).体外转染SP2/0细胞,间接免疫荧光检测目的基因的表达情况.然后进行动物免疫,实验动物分四组即:pCE6组、pC70-83-E6组、pCDNA3.1(+)组和PBS组,每组10只BALB/c小鼠,pCE6组、pC70-83-E6组和pCDNA3.1(+)组以100μg/只的剂量(胫前肌)免疫,PBS组每只小鼠胫前肌免疫100μl 1 ×PBS,各组均进行了三次免疫,每次间隔两周.间接ELISA检测免疫后小鼠血清特异性抗体水平,MTT法检测免疫小鼠脾淋巴细胞增殖情况和IFN～γ分泌情况.结果表明,两种重组质粒免疫后小鼠血清抗体水平持续上升,而pCDNA3.1(+)组和PBS组的血清抗体始终维持在较低水平,且pC70-83-E6组抗体水平高于pCE6.经PPD(5 μg/ml)刺激后,pCE6组和pC70-83-E6组的刺激值(SI值)与pCDNA3.1(+)组及PBS免疫组相比均差异显著(P＜0.05),而两重组质粒免疫组差异不显著(P＞0.05);PPD刺激后两重组质粒免疫的小鼠脾细胞产生的IFN～γ均显著高于两对照组产生的IFN～γ(P＜0.05),且pC70-83-E6组明显高于其他三组(P＜0.05),pCE6组只分泌很低的IFN～γ,而两对照组则未检测到IFN～γ的产生.本试验成功构建了牛分枝杆菌esat-6基因和mpb70-mpb83-esat-6融合基因DNA疫苗,从而为牛结核病新型疫苗的研制提供了理论依据.

关键词：牛分枝杆菌 esat-6基因 mpb70基因 mpb83基因 DNA疫苗免疫应答

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猪传染性胸膜肺炎放线杆菌"茵影"疫苗免疫效力评价

猪传染性胸膜肺炎放线杆菌"茵影"疫苗免疫效力评价

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十次学术研讨会

作者：李刚崔宁周泷谢芳张艳禾王春来中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点试验室动物细菌病研究室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学黑龙江哈尔滨150030

猪传染性胸膜肺炎是由胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)引起的以肺出血、坏死和纤维素性渗出为主要病变的高度接触性传染病,国内主要使用灭活疫苗预防和控制本病.本实验首先将已经制备好的胸膜肺炎放线杆菌菌影(... 详细信息

猪传染性胸膜肺炎是由胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)引起的以肺出血、坏死和纤维素性渗出为主要病变的高度接触性传染病,国内主要使用灭活疫苗预防和控制本病.本实验首先将已经制备好的胸膜肺炎放线杆菌菌影(水相)与佐剂MONTANIDETM ISA 760VG(油相)混合,制备成油乳剂的菌影疫苗(5×109 CFU/mL).颈部肌肉注射免疫3-4周龄的健康仔猪,二免后用胸膜肺炎放线杆菌血清1型和7型强毒菌株通过滴鼻途径进行攻毒实验.同时设未免疫阴性对照组.根据临床症状、抗体水平、攻毒后仔猪的存活率以及肺脏病理变化综合评价胸膜肺炎放线杆菌菌影疫苗的免疫保护效果。结果表明，肌肉注射胸膜肺炎放线杆菌菌影疫苗可以激发动物体内产生较高滴度的抗体，二免后10夭100倍稀释血清抗体效价达到1.701±0.116，与对照组差异显著(p＜0.05)。攻毒后仔猪体温变化不明显，一般稳定在39.8℃以下。对APP1型和7型的攻毒保护率均达到80％，肺部病变不明显，远远好于对照组。本研究制备的胸膜肺炎放线杆菌菌影疫苗是新型的基因工程疫苗，具有良好的应用前景。

关键词：猪传染性胸膜肺炎放线杆菌茵影疫苗免疫效力评价

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副结核分枝杆菌MAP1588C蛋白的原核表达与抗原性分析

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中国动物传染病学报 2012年第6期20卷 36-39页

作者：刘银冰陈利苹鄢秋龙曹俊刘思国黑龙江八一农垦大学动物科技学院大庆163319 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室哈尔滨150001

从副结核分支杆菌K-10菌株基因组中扩增出516 bp的MAP1588C基因片段,插入原核表达载体pET-28b(+),转化至大肠杆菌BL21(DE3),在0.5 mmol/L的IPTG诱导下进行表达;利用融合蛋白的组氨酸标签进行亲和层析纯化重组蛋白;通过抗6 His标签抗体的... 详细信息

从副结核分支杆菌K-10菌株基因组中扩增出516 bp的MAP1588C基因片段,插入原核表达载体pET-28b(+),转化至大肠杆菌BL21(DE3),在0.5 mmol/L的IPTG诱导下进行表达;利用融合蛋白的组氨酸标签进行亲和层析纯化重组蛋白;通过抗6 His标签抗体的Western blot验证了纯化蛋白产物;另外,副结核阳性牛血清可检测到该蛋白条带。结果表明,表达的重组蛋白MAP1588C的蛋白分子量为21 kDa,具有良好抗原性,有望将此抗原用于建立副结核的ELISA诊断方法。

关键词：副结核分支杆菌 MAP1588C蛋白重组表达免疫性

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肠炎沙门氏菌三种主要毒力岛基因缺失株的构建及其免疫效力研究

肠炎沙门氏菌三种主要毒力岛基因缺失株的构建及其免疫效力研究

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中国免疫学会第十届全国免疫学学术大会

作者：吕雪莲周薇刘松艳曹俊张童利王曼宇刘思国于申业中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院

目的：沙门氏菌病属于重要的食源性致病菌之一，经常通过污染的水和食物引起人类疾病。沙门氏菌的致病性与其毒力岛基因密切相关。因此，构建沙门氏菌单个或多个毒力岛的基因缺失株，并评估这些毒力岛对沙门氏菌致病性的影响以及在鸡体...

目的：沙门氏菌病属于重要的食源性致病菌之一，经常通过污染的水和食物引起人类疾病。沙门氏菌的致病性与其毒力岛基因密切相关。因此，构建沙门氏菌单个或多个毒力岛的基因缺失株，并评估这些毒力岛对沙门氏菌致病性的影响以及在鸡体内诱导免疫应答变化是非常重要的。

关键词：

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结核分枝杆菌rv3036c基因的原核表达及其多克隆抗体的制备

结核分枝杆菌rv3036c基因的原核表达及其多克隆抗体的制备

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第九次学术研讨会

作者：陈利苹曹俊刘银冰鄢秋龙刘思国中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／动物细菌病研究室，黑龙江哈尔滨 150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／动物细菌病研究室，黑龙江哈尔滨 150001 黑龙江八一农垦大学，黑龙江大庆 163319

本研究以结核分枝杆菌强毒株H37Rv基因组DNA为模板，扩增rv3036c基因，将此基因片段连接于表达载体pET-28a(+)，获得重组质粒pET-28a-ru3036c，并将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中，经1 mmol／L IPTG诱导表达组氨酸标签融合蛋白R_v3... 详细信息

本研究以结核分枝杆菌强毒株H37Rv基因组DNA为模板，扩增rv3036c基因，将此基因片段连接于表达载体pET-28a(+)，获得重组质粒pET-28a-ru3036c，并将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中，经1 mmol／L IPTG诱导表达组氨酸标签融合蛋白R_v3036c，用Ni-NTAHis口Bind Resin纯化目的蛋白，经westem-b10t验证了蛋白的纯化结果。Rv3036c蛋白纯化产物免疫新西兰大白兔，制备多克隆抗体。并通过间接EuSA方法检测抗体效价。结果显示，重组质粒双酶切鉴定和DNA序列测定均完全正确;sDS-PAGE和westem_blot分析结果显示，pET-28a-Rv3036c VT,可溶形式表达，蛋白分子量大小为28ku，且具有很好的免疫原性。以上结果为进一步研究rv3036c基因在结核分枝杆菌致病性中的作用奠定了很好的基础。

关键词：结核分枝杆菌原核表达多克隆抗体蛋白纯化

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高寒地区奶牛乳房炎凝固酶阴性致病葡萄球菌的分离鉴定及耐药性分析

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中国预防兽医学报 2017年第10期39卷 848-851页

作者：郝俊玺董志民王秋东华欣祝瑶杨亲鄢明华刘思国张万江内蒙古农业大学内蒙古呼和浩特010018 天津市畜牧兽医研究所天津西青300381 天津市畜禽健康养殖技术工程中心天津西青300381 吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室黑龙江哈尔滨150069

为调查高寒牧区引起奶牛乳房炎的凝固酶阴性致病葡萄球菌流行现状及耐药情况,本研究对呼伦贝尔地区3个规模化奶牛养殖场采用加州乳房炎测试法(CMT)进行高体细胞牛脂病检测,并采集330份牛奶样品,应用PCR方法、脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型... 详细信息

为调查高寒牧区引起奶牛乳房炎的凝固酶阴性致病葡萄球菌流行现状及耐药情况,本研究对呼伦贝尔地区3个规模化奶牛养殖场采用加州乳房炎测试法(CMT)进行高体细胞牛脂病检测,并采集330份牛奶样品,应用PCR方法、脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型和药敏试验等对样品中的葡萄球菌进行分离鉴定和耐药性分析。结果显示,该地区隐性乳房炎发病率达47.8%,共分离和鉴定出9种葡萄球菌60株(34.5%);60株葡萄球菌分为41个克隆谱型;60株葡萄球菌对青霉素和林可霉素的耐药率较高,分别为40.0%(24/60)和50.0%(30/60),表明这两种药是治疗乳房炎常用药物。本研究为高寒地区致病葡萄球菌引起的奶牛乳房炎临床合理用药及对病原菌的防控提供实验依据和指导。

关键词：葡萄球菌乳房炎药敏试验 PFGE分型

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山羊传染性胸膜肺炎病原体国内分离株的分子特征研究

山羊传染性胸膜肺炎病原体国内分离株的分子特征研究

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中国微生物学会兽医微生物学专业委员会2006年学术年会

作者：李媛张建华胡守萍王亮辛九庆中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室哈尔滨150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室基础条件及技术服务中心哈尔滨150001

[目的]山羊传染性胸膜肺炎(contagious caprine pleuropneumonia,CCPP)是由山羊支原体山羊肺炎亚种(*** ***,Mccp)引起的高度接触性传染病,被世界动物卫生组织(OIE)列为B类传染病.我国目前对于CCPP的病原的分类地位的看法与国际标准不符... 详细信息

[目的]山羊传染性胸膜肺炎(contagious caprine pleuropneumonia,CCPP)是由山羊支原体山羊肺炎亚种(*** ***,Mccp)引起的高度接触性传染病,被世界动物卫生组织(OIE)列为B类传染病.我国目前对于CCPP的病原的分类地位的看法与国际标准不符.本实验计划对4株丝状支原体簇中国分离菌种进行分子生物学鉴定,确定其真正分类.[方法]针对三段不同基因使用三对引物,对扩增产物进行酶切鉴定和测序,将结果与丝状支原体簇的6个成员进行遗传衍化分析.[结果]该4株支原体以M5M6为引物扩增后PstI酶切的产物与Mccp相同,为548、420、128等3条DNA条带,丝状支原体山羊亚种(M mycoides ***,MmC)等其他丝状支原体簇成员只有420、128bp 2条带.在rpsG和fusA基因段与f38同源性为99.5％,与Mcc kid为98.9％,与MmC ZZ株仅为95.4％.在H2和H2prim段,与MmC PG3株同源性为67.4％-67.6％,与两株Mcc 8601-50和California Kid同源性为95.1％-98.4％,与三株Mccp 97097ET、Gabes和F38的同源性为99.6-99.8％.[结论]87001、87002、367、1653等4株中国分离的CCPP病原菌与山羊支原体山羊肺炎亚种(Mccp)亲缘关系更近,故建议其归属为Mccp.

关键词：传染性胸膜肺炎丝状支原体山羊支原体山羊肺炎亚种分子特征

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东北地区奶牛乳房炎表皮葡萄球菌和腐生葡萄球菌的分子流行病学及耐药性研究

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中国预防兽医学报 2016年第4期38卷 307-311页

作者：董志民张万江刘琪卢中冶王秋东华欣韩吉雨宋丽华刘思国吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室黑龙江哈尔滨150001 内蒙古伊利实业集团股份有限公司内蒙古呼和浩特010080 农安县动物卫生监督所吉林长春130200

为调查表皮葡萄球菌和腐生葡萄球菌在东北地区的流行病学情况和耐药性,本研究对来自东北地区3个大型奶牛场采集的330份奶样进行葡萄球菌的分离、鉴定及其耐药表型的检测,并采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)进行分离株的亲缘性分析,对表皮葡萄... 详细信息

为调查表皮葡萄球菌和腐生葡萄球菌在东北地区的流行病学情况和耐药性,本研究对来自东北地区3个大型奶牛场采集的330份奶样进行葡萄球菌的分离、鉴定及其耐药表型的检测,并采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)进行分离株的亲缘性分析,对表皮葡萄球菌进行多位点序列分型(MLST),同时应用PCR扩增分离株中携带的相关耐药基因。研究结果表明,在330份奶样中共分离到表皮葡萄球菌32株(9.7%),腐生葡萄球菌34株(10.3%);PFGE分析共获得9种不同谱型的表皮葡萄球菌和11种不同谱型的腐生葡萄球菌。药敏试验结果显示,两种菌对青霉素(70%)、苯唑西林(60%)和林克霉素(55%)的耐药率较高,主要耐药基因为lnu(B)(40%)、erm(B)(30%)和mec A(25%)。本研究结果揭示了东北地区奶牛乳房炎病原菌表皮葡萄球菌和腐生葡萄球菌的耐药谱和流行情况,为临床合理用药及奶牛乳房炎的防控提供了实验依据。

关键词：表皮葡萄球菌腐生葡萄球菌分子流行病学多位点序列分型

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牛结核病疫苗研究现状

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畜牧兽医科技信息 2008年第8期24卷 7-9页

作者：宫强刘思国河南科技大学食品与生物工程学院洛阳471003 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室哈尔滨150001

牛结核病是一种严重的人畜共患病，其传染流行严重地影响到畜牧业的持续健康发展，不仅造成奶牛乳房炎、结核性胸膜炎等疾病，还会引起奶牛产乳率和乳质下降，更严重威胁着人类的身心健康。据统计，人结核病有10％以上是由牛分枝杆菌引... 详细信息

牛结核病是一种严重的人畜共患病，其传染流行严重地影响到畜牧业的持续健康发展，不仅造成奶牛乳房炎、结核性胸膜炎等疾病，还会引起奶牛产乳率和乳质下降，更严重威胁着人类的身心健康。据统计，人结核病有10％以上是由牛分枝杆菌引起，因此控制牛结核病具有重大的公共卫生学意义。

关键词：牛结核病奶牛乳房炎疫苗持续健康发展人畜共患病牛分枝杆菌公共卫生学身心健康

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