检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2015年第5期37卷 361-365页

作者：司微于申业陈利苹刘思国李广兴东北农业大学动物医学学院哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室黑龙江哈尔滨150001

为构建肠炎沙门氏菌(***)tu-fA基因缺失株及鉴定其生物学特性,本实验利用Red重组系统,以pKD3中的FRT-氯霉素抗性(cat^r)基因-FRT序列为模板,利用含有tu-fA基因两端序列的引物,经PCR扩增同源重组DNA片段(tu-fA5'-FRT-cat^r-FRT-tu-fA... 详细信息

为构建肠炎沙门氏菌(***)tu-fA基因缺失株及鉴定其生物学特性,本实验利用Red重组系统,以pKD3中的FRT-氯霉素抗性(cat^r)基因-FRT序列为模板,利用含有tu-fA基因两端序列的引物,经PCR扩增同源重组DNA片段(tu-fA5'-FRT-cat^r-FRT-tu-fA3'),将该DNA片段电转化于含有质粒pKD46的*** SM6株中进行同源重组,通过氯霉素抗性筛选tu-fA基因缺失的SM6株(SM6△tu-f A::cat),再通过导入质粒pCP20于SM6△tu-fA::cat中敲除cat r基因,从而构建了tu-fA基因缺失株SM6△tu-fA。生物学特性鉴定结果表明,基因缺失株具有良好的遗传稳定性;与亲本株相比,细菌形态未发生明显改变,但基因缺失株体外生长速率略低,利用碳源的能力有所增强;缺失株侵袭Caco-2细胞的能力与亲本株相比有所降低,表明tu-f A基因编码的延伸因子(EF-Tu)在调控细菌侵袭细胞的过程中起着一定的作用。本研究通过构建tu-fA基因缺失的***株,为进一步研究tu-fA基因编码的EF-Tu的功能奠定基础。

关键词： Red同源重组系统 tu-fA基因缺失株

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副猪嗜血杆菌菌影的制备

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中国预防兽医学报 2011年第1期33卷 11-14页

作者：胡明明常月红张艳禾司薇谢芳于申业刘慧芳刘思国沈楠王春来中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学黑龙江哈尔滨150030

为研制副猪嗜血杆菌(***)菌影疫苗,本实验通过PCR扩增噬菌体PhiX174的裂解基因E,将其连接到含有λPL/PR-cI857启动阻遏系统的pBV220载体中,使裂解基因E与λPL/PR-cI857串联成为温度敏感的裂解盒,构建重组质粒pBV-E。并将含有E基因的裂... 详细信息

为研制副猪嗜血杆菌(***)菌影疫苗,本实验通过PCR扩增噬菌体PhiX174的裂解基因E,将其连接到含有λPL/PR-cI857启动阻遏系统的pBV220载体中,使裂解基因E与λPL/PR-cI857串联成为温度敏感的裂解盒,构建重组质粒pBV-E。并将含有E基因的裂解盒插入pMD18-T载体中,构建***打孔质粒(pMD-E)。采用电击穿孔法将其转入***β2155中,利用接合的方式将打孔质粒转入*** 5型菌株中。将含有打孔质粒的***在28℃培养至对数生长期,升温到42℃诱导E基因表达,制备***菌影。电镜观察菌影形态完整,内容物全部被释放到胞外。本实验为进一步研究菌影疫苗奠定了基础。

关键词：副猪嗜血杆菌菌影裂解基因

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猪肺炎支原体P97 C末端蛋白单克隆抗体的制备及其抗原表位分析

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中国兽医科学 2010年第2期40卷 150-157页

作者：张美晶王亮李媛董慧姜海芳陈超曹培丽郭丹辛九庆中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室国家牛传染性胸膜肺炎指定检测实验室黑龙江哈尔滨150001

以大肠杆菌表达的pET-30a-P97C重组蛋白为免疫原免疫BALB/c小鼠,制备针对猪肺炎支原体P97C末端蛋白的单克隆抗体,并将其与截短表达的P97C末端蛋白进行免疫印迹分析,初步鉴定了P97C末端蛋白的抗原表位。进一步采用肽探针扫描技术确定最... 详细信息

以大肠杆菌表达的pET-30a-P97C重组蛋白为免疫原免疫BALB/c小鼠,制备针对猪肺炎支原体P97C末端蛋白的单克隆抗体,并将其与截短表达的P97C末端蛋白进行免疫印迹分析,初步鉴定了P97C末端蛋白的抗原表位。进一步采用肽探针扫描技术确定最小抗原决定区域,并通过生长抑制试验及抗黏附特性试验对抗原表位进行了分析。结果显示,获得2株能稳定分泌特异性抗体的杂交瘤细胞株A3C9和B4D5,并成功鉴定出P97C末端蛋白的2个独立线性表位F905PMAFSY911和G991TPNQGKKAE1000。2株单抗对猪肺炎支原体的生长均有一定的抑制作用,但对其黏附特性没有显著抑制作用。

关键词：猪肺炎支原体单克隆抗体抗原表位肽扫描生长抑制试验

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牛支原体蛋白质组学双向电泳技术的建立及初步分析

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东北农业大学学报 2012年第3期43卷 42-47页

作者：陈维李媛辛九庆刘洋张秀英东北农业大学动物医学学院哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室哈尔滨150001

为了建立***蛋白质组学技术,试验采用***湖北分离株为实验材料,对样品处理、固相pH梯度胶条、上样量及染色等影响双向电泳图谱质量的关键因素与环节进行一系列的探索,2D Clean-up试剂盒处理的样品400μg在13 cm干胶条（pH 4~7）中进行... 详细信息

为了建立***蛋白质组学技术,试验采用***湖北分离株为实验材料,对样品处理、固相pH梯度胶条、上样量及染色等影响双向电泳图谱质量的关键因素与环节进行一系列的探索,2D Clean-up试剂盒处理的样品400μg在13 cm干胶条（pH 4~7）中进行双向凝胶电泳,考马斯亮蓝R350染色的方法,结果获得了能较好展示大部分蛋白点,分辨率及重复性均很好的双向电泳图谱,应用Image Master 2D Platinum version 6.0软件对图谱进行初步分析,不同重复图谱之间的平均匹配率达80.95%,随机取重复性好的20个蛋白点进行质谱分析,获得19蛋白质点的肽质量指纹图谱,鉴定成功率为95%。质谱鉴定结果与自建***蛋白库对比,蛋白点匹配率高于82分值限值（P〈0.05）的不同蛋白有12个,初步分析这些蛋白多为酶类。说明该技术平台能有效用于***蛋白质组学的后续研究之中。

关键词： M.bovis 全菌蛋白蛋白质组学双向电泳

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hilA基因两端51bp序列对示踪标记性绿色荧光蛋白在禽肠炎沙门氏菌中倍增表达效率的鉴定

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中国预防兽医学报 2015年第6期37卷 409-413页

作者：王高玲李涛史冰田司微王斌刘恒贵中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室黑龙江哈尔滨150001 福建农林大学动物科技学院福建福州350000

为构建表达绿色荧光蛋白(GFP)作为示踪标记的重组禽肠炎沙门氏菌(***)并鉴定其遗传稳定性,本研究通过重叠延伸PCR构建5'端含有T7启动子和核糖体结合位点(RBS),3'端含有T7终止子序列的增强型GFP(e GFP)表达盒,并将e GFP表达盒插... 详细信息

为构建表达绿色荧光蛋白(GFP)作为示踪标记的重组禽肠炎沙门氏菌(***)并鉴定其遗传稳定性,本研究通过重叠延伸PCR构建5'端含有T7启动子和核糖体结合位点(RBS),3'端含有T7终止子序列的增强型GFP(e GFP)表达盒,并将e GFP表达盒插入p MD18-T载体中构建p MD-e GFP原核表达重组质粒,将其转化于***。结果显示e GFP能够在***中持续表达。进一步将*** hil A基因两端的51 bp序列分别添加到p MD-e GFP中e GFP表达盒的两端,构建p MD-He GFP重组质粒。荧光显微镜观察和流式细胞仪分析与p MD-e GFP相比,p MD-He GFP转化***后,其e GFP的荧光强度提高约30倍。通过在无抗生素选择压力下连续传20代次,重组***中e GFP仍然能够稳定表达。本研究结果为进一步研究***在动物体内的分布和定植规律等提供了一种具有荧光示踪标记的目标菌,并为其他细菌的同类研究提供了借鉴。

关键词：肠炎沙门氏菌绿色荧光蛋白荧光标记 hilA基因

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牛结核病DNA疫苗研究现状

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中国人兽共患病学报 2009年第2期25卷 191-193页

作者：宫强刘思国河南科技大学食品与生物工程学院洛阳471003 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室哈尔滨150001

牛结核病是一种严重的人畜共患病,其流行严重地影响畜牧业的发展,不仅造成奶牛乳房炎、结核性胸膜炎等疾病,造成奶牛产乳率和乳质下降,还严重威胁着人类的健康。据统计,人结核病有10%以上是由牛分枝杆菌引起,因此控制牛结核病具有重大... 详细信息

牛结核病是一种严重的人畜共患病,其流行严重地影响畜牧业的发展,不仅造成奶牛乳房炎、结核性胸膜炎等疾病,造成奶牛产乳率和乳质下降,还严重威胁着人类的健康。据统计,人结核病有10%以上是由牛分枝杆菌引起,因此控制牛结核病具有重大的公共卫生学意义。自疫苗问世以来,其在传染病的预防控制中发挥了重要的作用,但迄今还没有一种疫苗可用于牛结核病的预防。[第一段]

关键词： DNA疫苗牛结核病奶牛乳房炎结核性胸膜炎预防控制人畜共患病牛分枝杆菌卫生学意义

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牛分枝杆菌三价组合及融合DNA疫苗免疫效果的研究

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畜牧兽医学报 2008年第4期39卷 466-471页

作者：宫强刘思国王春来王勇刘建东刘慧芳施远祥阿曼古丽李发斌孔宪刚中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室哈尔滨150001 新疆动物防疫监督总站乌鲁木齐830063 黑龙江省结核病防治所哈尔滨150500

分泌性蛋白Ag85B、MPB64和ESAT-6为Mycobacterium bovis的主要保护性抗原,在诱导机体免疫反应和抵抗感染中发挥重要作用。本研究以pcDNA3.1(+)为载体,构建了由上述3种抗原基因构成的不同疫苗:3基因融合(pcDNA-MPB64-Ag85B-ESAT-6,pCMAE)... 详细信息

分泌性蛋白Ag85B、MPB64和ESAT-6为Mycobacterium bovis的主要保护性抗原,在诱导机体免疫反应和抵抗感染中发挥重要作用。本研究以pcDNA3.1(+)为载体,构建了由上述3种抗原基因构成的不同疫苗:3基因融合(pcDNA-MPB64-Ag85B-ESAT-6,pCMAE)DNA疫苗和三价(pcDNA-Ag85B+pcDNA-MPB64+pcDNA-ESAT-6)DNA疫苗,评价各种DNA疫苗诱导的体液免疫、细胞免疫及以BCG攻毒后的免疫保护水平。试验结果表明,多基因融合DNA疫苗免疫后的小鼠血清抗体水平、淋巴细胞增殖(SI值)、gamma interferon(IFN-γ)和interleukin-2(IL-2)水平明显高于其他各组(P<0.05),攻毒保护效果也优于多价DNA疫苗,达到了BCG疫苗的免疫保护水平,表明本研究制备的融合DNA疫苗具有良好的应用前景。

关键词：牛分枝杆菌融合DNA疫苗多价DNA疫苗

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禽致病性大肠杆菌生物被膜的形成及其影响因素

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中国预防兽医学报 2010年第9期32卷 672-676页

作者：欧阳凤菊李兆利赫明雷刘慧芳司微刘思国王春来倪洪波王宇曲娟娟东北农业大学资源与环境学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室黑龙江哈尔滨150001

为确定影响细菌生物被膜(BF)的形成条件,本研究采用BF体外定性观察和定量粘附性检测两种方法对1株野生禽致病性大肠杆菌(***)在不同环境(培养时间、培养基类型、引导载体类型、营养条件)下产生BF的差异进行了研究。结果显示野生禽致病性... 详细信息

为确定影响细菌生物被膜(BF)的形成条件,本研究采用BF体外定性观察和定量粘附性检测两种方法对1株野生禽致病性大肠杆菌(***)在不同环境(培养时间、培养基类型、引导载体类型、营养条件)下产生BF的差异进行了研究。结果显示野生禽致病性***其宿主体外BF最适形成条件是培养时间为48h,培养基为5%TSB、引导载体为平底96孔聚苯乙烯微孔板(美国Corning Costar)。其生长周期为8h时开始起始粘附、24h形成若干微菌落、36h微菌落粘连、48h形成完整的BF、72h细菌脱落开始下一轮的BF生长。糖分和适量的无机盐都可以在一定程度上促进BF的形成和被膜内细菌的粘附性提高。该研究表明禽致病性***的形成周期,并为抑制其形成提供了实验依据。

关键词：禽致病性大肠杆菌生物被膜细菌粘附性

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胸膜肺炎放线杆菌血清1型与5型基因组DNA差异基因的筛选与鉴定

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中国预防兽医学报 2010年第10期32卷 757-761页

作者：谢芳韩文瑜杜崇涛周靓杨舒心雷连成吉林大学畜牧兽医学院吉林长春130062 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室黑龙江哈尔滨150001

为了解胸膜肺炎放线杆菌(APP)不同血清型间的差异基因,本研究采用代表性差异分析(RDA)方法,筛选APP血清1型CVCC259株和血清5型CVCC263株的差异基因。经BLAST分析和Southern blot验证,分别获得CVCC259株的8个和CVCC263株的12个特异基因... 详细信息

为了解胸膜肺炎放线杆菌(APP)不同血清型间的差异基因,本研究采用代表性差异分析(RDA)方法,筛选APP血清1型CVCC259株和血清5型CVCC263株的差异基因。经BLAST分析和Southern blot验证,分别获得CVCC259株的8个和CVCC263株的12个特异基因片段。本实验为APP感染和致病机制的研究奠定基础。

关键词：胸膜肺炎放线杆菌代表性差异分析差异基因鉴定

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牛支原体套式PCR检测方法的建立

引用

中国预防兽医学报 2009年第9期31卷 709-711页

作者：李媛董惠张美晶陈超曹培丽郭丹姜海芳辛九庆中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室/国家牛传染性胸膜肺炎指定检测实验室黑龙江哈尔滨150001

为建立牛支原体检测方法,本研究采用牛支原体的oppD/F基因的两对特异性引物,建立了牛支原体的套式PCR检测方法。该套式PCR可以从100ccu/mL(color change unit颜色变化单位)的牛支原体培养物中检出目的片段;同时还可以从病牛肺脏、病牛... 详细信息

为建立牛支原体检测方法,本研究采用牛支原体的oppD/F基因的两对特异性引物,建立了牛支原体的套式PCR检测方法。该套式PCR可以从100ccu/mL(color change unit颜色变化单位)的牛支原体培养物中检出目的片段;同时还可以从病牛肺脏、病牛鼻拭子中扩增出目的片段,而且结果与病原分离结果一致。特异性试验结果表明,该方法与其它支原体无交叉反应,是一种特异性强、敏感性高的牛支原体检测方法。

关键词：牛支原体无乳支原体牛传染性胸膜肺炎套式PCR

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