检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2016年第1期38卷 6-10页

作者：周薇刘松艳王曼宇衣菲田秋丰陈志宝刘思国于申业黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院黑龙江大庆163319 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室黑龙江哈尔滨150001 吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118

肽基脯氨酰顺反异构酶(PPIases)广泛存在于原核生物中,主要生物功能是专一性催化已磷酸化的丝/苏-脯氨酞顺/反异构。为研究大肠杆菌PPIases sly D基因缺失对其生物学特性的影响,本研究利用改进的Red重组方法构建大肠杆菌BL21株的sly D... 详细信息

肽基脯氨酰顺反异构酶(PPIases)广泛存在于原核生物中,主要生物功能是专一性催化已磷酸化的丝/苏-脯氨酞顺/反异构。为研究大肠杆菌PPIases sly D基因缺失对其生物学特性的影响,本研究利用改进的Red重组方法构建大肠杆菌BL21株的sly D缺失株,命名为BL21Δsly D;并通过突变株的形态学变化、生长特性、生化代谢特性、耐酸性、耐渗透压能力、耐温度缺氧能力对其进行鉴定。结果表明,缺失株生长速率、耐高温缺氧能力与亲本株相比差异不显著,然而突变株的耐酸性与耐渗透压能力则显著低于亲本株(p<0.01),表明大肠杆菌PPIases sly D基因可能影响双组份调控系统的调节作用。本研究构建的大肠杆菌sly D基因缺失株BL21Δsly D为进一步研究大肠杆菌sly D基因的功能奠定了基础。

关键词：大肠杆菌肽基脯氨酰顺反异构酶生物学特性环境压力

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牛霉形体免疫相关性蛋白P51的筛选与鉴定

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中国兽医科学 2011年第5期41卷 490-495页

作者：李媛陈维呼太飞刘洋宋志强孙文静辛九庆中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室国家牛传染性胸膜肺炎指定检测实验室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 黑龙江省勃利县动物卫生监督所黑龙江勃利154500

为了筛选免疫原性蛋白,建立牛霉形体的快速诊断方法,利用二维凝胶(2-D)电泳、Western-blot分析及蛋白质谱分析,筛选出一个免疫相关性蛋白P51。以牛霉形体中国分离株Hubei-1为模板,扩增了p51基因,并克隆到原核表达载体pET32a上。结果显示... 详细信息

为了筛选免疫原性蛋白,建立牛霉形体的快速诊断方法,利用二维凝胶(2-D)电泳、Western-blot分析及蛋白质谱分析,筛选出一个免疫相关性蛋白P51。以牛霉形体中国分离株Hubei-1为模板,扩增了p51基因,并克隆到原核表达载体pET32a上。结果显示,重组蛋白pET32a-p51与牛霉形体阳性血清的Dot-blotting试验结果为阳性,而Western-blotting试验结果为阴性。以pET32a-p51重组蛋白为包被抗原的ELISA试验表明其能与自然感染和人工感染牛霉形体的阳性血清发生特异性反应,而与灭活疫苗免疫的阳性血清不发生特异性反应,与牛传染性胸膜肺炎的阳性血清没有交叉反应。表明P51可能是牛霉形体特有的一种构象依赖性免疫相关蛋白,是一种有前景的诊断用抗原。

关键词：牛霉形体牛传染性胸膜肺炎二维凝胶电泳质谱

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牛支原体表面一种新的膜蛋白(P33)的特性研究

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中国预防兽医学报 2013年第4期35卷 255-258页

作者：邹晓辉李媛汪洋宋志强孙文静周玉梅白帆吴金迪刘素丽辛九庆中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室/国家牛传染性胸膜肺炎指定检测实验室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150001 吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118

牛支原体(***)是牛支原体肺炎的病原体,能够引起犊牛肺炎等多种疾病。研究表明,牛支原体粘附蛋白可能在牛支原体致病过程中起关键作用。本研究选取了牛支原体的一个假定膜蛋白,对其基因进行PCR扩增,并连接到pET-28a载体,转化于大肠杆菌B... 详细信息

牛支原体(***)是牛支原体肺炎的病原体,能够引起犊牛肺炎等多种疾病。研究表明,牛支原体粘附蛋白可能在牛支原体致病过程中起关键作用。本研究选取了牛支原体的一个假定膜蛋白,对其基因进行PCR扩增,并连接到pET-28a载体,转化于大肠杆菌BL21(DE3)中,通过IPTG诱导获得了以可溶形式表达的重组蛋白,该重组蛋白大小约为36 ku,将其命名为P33。纯化的重组蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。重组蛋白与胎牛肺细胞(EBL)作用,通过激光共聚焦显微镜观察到了明显的粘附作用,而ELISA试验证明该蛋白的这种粘附为特异性粘附,从而证明该蛋白是牛支原体的一个粘附相关蛋白。

关键词：牛支原体原核表达 ELISA

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用胸膜肺炎放线杆菌基因组表达文库免疫小鼠产生的免疫保护作用

用胸膜肺炎放线杆菌基因组表达文库免疫小鼠产生的免疫保护作用

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次学术研讨会

作者：刘慧芳周媛媛刘思国宫强王勇刘建东王春来云孟克常月红迟磊赵昆中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室

为了筛选、鉴定APP保护性抗原基因库,本研究构建了胸膜肺炎放线杆菌血清7型的基因组表达文库(～106个克隆),并将该文库分成10个克隆库(1.0×105个克隆/库)。提取每个克隆库的重组质粒免疫小鼠并以1型胸膜肺炎放线杆菌进行攻毒,有4... 详细信息

为了筛选、鉴定APP保护性抗原基因库,本研究构建了胸膜肺炎放线杆菌血清7型的基因组表达文库(～106个克隆),并将该文库分成10个克隆库(1.0×105个克隆/库)。提取每个克隆库的重组质粒免疫小鼠并以1型胸膜肺炎放线杆菌进行攻毒,有4个克隆库免疫组(L2,L3,L6,L7)的小鼠在攻毒后的存活率高于其他免疫组和对照组小鼠,肺脏荷菌数显著低于空载体免疫组小鼠。将其中的一个对小鼠具有保护作用的克隆库(L3)进一步分成4个亚克隆库,每个含有～2×104个克隆。结果有一个亚克隆库(L3-4)免疫后的小鼠能基本抵抗1型胸膜肺炎的感染,肺脏荷菌数最低,并能诱导小鼠产生特异性的免疫应答。结果表明,本研究构建的基因组表达文库含有一部分基因,该基因表达的蛋白能使免疫小鼠抵抗APP的感染。

关键词：胸膜肺炎放线杆菌基因组表达文库免疫保护

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利用体内诱导抗原技术检测胸膜肺炎放线杆菌体内表达基因

利用体内诱导抗原技术检测胸膜肺炎放线杆菌体内表达基因

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第三届猪病防控学术研讨会

作者：刘慧芳刘思国王春来司微王聃杜艳芬赫明雷常月红中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室

本研究利用体内诱导抗原技术(IVIAT)对胸膜肺炎放线杆菌体内表达的基因进行了研究。首先将我们收集到的5份感染了APP1的猪血清混合,分别吸附体外培养的APP1和大肠杆菌DE3的全菌及全菌的裂解物,以充分去除体外表达蛋白的抗体,经过该吸附... 详细信息

本研究利用体内诱导抗原技术(IVIAT)对胸膜肺炎放线杆菌体内表达的基因进行了研究。首先将我们收集到的5份感染了APP1的猪血清混合,分别吸附体外培养的APP1和大肠杆菌DE3的全菌及全菌的裂解物,以充分去除体外表达蛋白的抗体,经过该吸附过程后OD405分别由原来的0.927和0.239降低为0.196和0.078,表明混合血清得到了很好的吸附。同时,将APP1基因组DNA以Bsp1431进行酶切,回收500bp-2000bp的片段,与经过Bam HI酶切的pET30a/b/c进行连接,构建了APP1基因组质粒表达文库,库容量为2.0×10～5CFU,用吸附后的血清通过菌落原位免疫杂交来筛选该基因组表达文库,筛选了3000个菌落初步获得16个阳性克隆,通过再次筛选最后确定获得12个阳性克隆。本研究为抗病原菌药物、疫苗乃至新的诊断试剂的开发提供依据。

关键词：胸膜肺炎放线杆菌体内诱导抗原技术菌落原位免疫杂交

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内蒙古部分地区致奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌和产色葡萄球菌的分子流行病学及耐药性研究

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中国预防兽医学报 2017年第4期39卷 257-261页

作者：王秋东刘琪董志民杨桂连华欣张万江刘思国吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室黑龙江哈尔滨150069 内蒙古伊利实业集团股份有限公司内蒙古呼和浩特010080 天津市畜牧兽医研究所天津300112

为调查奶牛乳房炎中金黄色葡萄球菌和产色葡萄球菌的流行病学和耐药性情况,本研究对采集自内蒙古部分地区3个规模化奶牛场的330份奶样进行了葡萄球菌的分离、鉴定、耐药表型分析及基因型的检测;采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)方法对分离株进... 详细信息

为调查奶牛乳房炎中金黄色葡萄球菌和产色葡萄球菌的流行病学和耐药性情况,本研究对采集自内蒙古部分地区3个规模化奶牛场的330份奶样进行了葡萄球菌的分离、鉴定、耐药表型分析及基因型的检测;采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)方法对分离株进行了亲缘性分析,多位点序列分型(MLST)法对金黄色葡萄球菌进行了基因分型分析。结果表明,从330份奶样共分离到14株金黄色葡萄球菌和23株产色葡萄球菌,两者的分离率分别为4.24%(14/330)和6.97%(23/330);PFGE分型共获得8种不同谱型的金黄色葡萄球菌和16种不同谱型的产色葡萄球菌,表明这些分离株中存在克隆传播现象;药敏试验结果显示,两种病原菌对林可霉素、青霉素、苯唑西林和红霉素耐药率较高,分别为66.67%(16/24)、66.67%(16/24)、37.5%(9/24))和25%(6/24);介导青霉素耐药的bla Z基因检出率最高,为54.17%(13/24),其次为介导林可霉素和红霉素耐药的Inu(A)和erm(B)基因,其检出率分别为33.33%(8/24)和20.83%(5/24)。本研究结果为控制该地区奶牛乳房炎的传播、蔓延及临床用药提供了实验依据。

关键词：金黄色葡萄球菌产色葡萄球菌分子流行病学耐药性

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牛分枝杆菌细胞壁相关蛋白表达及免疫原性分析

牛分枝杆菌细胞壁相关蛋白表达及免疫原性分析

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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：亓英芳杜艳芬刘慧芳赫明雷司微倪洪波王春来刘思国中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室

牛结核病是由牛分枝杆菌引起的严重危害奶牛业的人畜共患病,可以通过吸入含菌气溶胶或食用受污染的乳制品而从牛传染到人,对人类的健康也造成了威胁.传统的BCG苗保护力低,因此研究更加特异准确的结核病新型诊断方法并加快新型疫苗的研... 详细信息

牛结核病是由牛分枝杆菌引起的严重危害奶牛业的人畜共患病,可以通过吸入含菌气溶胶或食用受污染的乳制品而从牛传染到人,对人类的健康也造成了威胁.传统的BCG苗保护力低,因此研究更加特异准确的结核病新型诊断方法并加快新型疫苗的研制具有重要的实际意义与应用前景.外膜蛋白具有良好免疫原性,可加快巨噬细胞对抗原的递呈作用,激活淋巴细胞增殖反应,刺激机体产生体液免疫和细胞免疫,从而抵抗同源菌和异源菌的攻击,而ompA是编码外膜蛋白抗原的重要基因之一.本实验应用PCR方法扩增出牛分枝杆菌外膜蛋白基因ompA(1041bp),采用DNA重组技术,将这个基因片段连接表达载体pGEX6p-1,并在大肠杆菌中诱导表达外膜蛋白ompA,用glutathioneSepharose 4B纯化蛋白.Western blot分析了两个重组蛋白的免疫学活性.结果本实验构建的重组质粒pGEX6p-1-ompA在大肠杆菌中得到高效表达,western-blot分析表明纯化的重组蛋白具有良好的免疫原性,为结核分枝杆菌的准确诊断以及基因工程疫苗的研制奠定了基础。

关键词：牛分枝杆菌 ompA 原核表达纯化 Western-blot 免疫原性

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禽致病性大肠杆菌生物被膜的形成及其影响因素

禽致病性大肠杆菌生物被膜的形成及其影响因素

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第五次全国免疫诊断暨疫苗学术研讨会

作者：欧阳凤菊刘慧芳司微王春来赫明雷倪洪波刘思国中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室

摘要为了确定影响细菌生物被膜(BF)的形成条件,本研究采用BF体外定性观察和定量粘附性检测两种方法 ,对一株野生禽致病性大肠杆菌(***)在不同条件(培养时间、培养基类型、引导载体类型、营养条件)下产生BF的差异进行了研究。结果显示,... 详细信息

摘要为了确定影响细菌生物被膜(BF)的形成条件,本研究采用BF体外定性观察和定量粘附性检测两种方法 ,对一株野生禽致病性大肠杆菌(***)在不同条件(培养时间、培养基类型、引导载体类型、营养条件)下产生BF的差异进行了研究。结果显示,野生禽致病性***在宿主体外BF最适形成条件是:培养时间为48 h,培养基为5%TSB、引导载体为平底96孔聚苯乙烯微孔板(美国Corning Costar)。其生长周期为8 h时开始起始粘附、24 h形成若干微菌落、36 h微菌落粘连、48 h形成完整的BF、72 h细菌脱落开始下一轮的BF生长。糖分和适量的无机盐都可以在一定程度上促进BF的形成和被膜内细菌的粘附性提高。该研究明确了禽致病性*** BF的形成条件和周期,为抑制其形成提供了实验依据。

关键词：禽致病性大肠杆菌生物被膜细菌粘附性

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利用体内诱导抗原技术检测胸膜肺炎放线杆菌体内表达基因

利用体内诱导抗原技术检测胸膜肺炎放线杆菌体内表达基因

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：刘慧芳刘思国王春来司微王聃杜艳芬赫明雷常月红中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室

本研究利用体内诱导抗原技术(IVIAT)对胸膜肺炎放线杆菌(APP)体内表达的基因进行了研究。.将收集到的5份感染了APP1的猪血清混合,分别吸附体外培养的APP1和大肠杆菌DE3的全菌及全菌

关键词：体内诱导抗原技术胸膜肺炎放线杆菌阳性克隆体内表达

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胎儿弯杆菌表面蛋白(SapA)基因的分段表达及其免疫原性分析

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中国预防兽医学报 2008年第11期30卷 842-845页

作者：赵海玲刘思国刘慧芳王春来司微杜艳芬杨金国林靖凯中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／动物细菌病研究室黑龙江哈尔滨150001 内蒙古农业大学动物科学与医学学院内蒙古呼和浩特010018 吉林农业大学吉林长春130118 广西大学广西南宁530004

应用PCR方法扩增出胎儿弯杆菌表面蛋白基因(SapA)的2个基因片段SapA-N(1398bp)和SapA-C(1422bp),采用DNA重组技术,将2个基因片段分别连接于表达载体pET32a(+),并在大肠杆菌中诱导表达(rSapA-N和rSapA-C),用金属鳌合层析的方法纯化蛋白。... 详细信息

应用PCR方法扩增出胎儿弯杆菌表面蛋白基因(SapA)的2个基因片段SapA-N(1398bp)和SapA-C(1422bp),采用DNA重组技术,将2个基因片段分别连接于表达载体pET32a(+),并在大肠杆菌中诱导表达(rSapA-N和rSapA-C),用金属鳌合层析的方法纯化蛋白。以Western blot检测重组蛋白的免疫学活性,ELISA试验分析2种蛋白用于胎儿弯杆菌病血清学诊断的可能性。结果表明,以可溶形式表达的2部分蛋白分子量大小约66ku,与预期大小相符。纯化的蛋白均具有良好的免疫学活性,但蛋白rSapA-N比蛋白rSapA-C的免疫学活性高,rSapA-N具有良好的胎儿弯杆菌病血清学诊断的应用价值。

关键词：胎儿弯杆菌表面蛋白基因(SapA) 原核表达纯化 ELISA

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