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第二届全国人畜共患病学术研讨会

作者：赵海玲刘思国刘慧芳王春来司微杜艳芬杨金国林靖凯中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室内蒙古农业大学动物科学与医学学院吉林农业大学广西大学

应用PCR方法扩增出胎儿弯杆菌表面蛋白基因(SapA)的2个基因片段SapA-N(1398 bp)和SapA-C(1422bp),采用DNA重组技术,将2个基因片段分别连于表达载体pET32a(+),并在大肠杆菌中诱导表达(rSapA-N和rSapa-C),用金属鳌合层析的方法纯化蛋白。W... 详细信息

应用PCR方法扩增出胎儿弯杆菌表面蛋白基因(SapA)的2个基因片段SapA-N(1398 bp)和SapA-C(1422bp),采用DNA重组技术,将2个基因片段分别连于表达载体pET32a(+),并在大肠杆菌中诱导表达(rSapA-N和rSapa-C),用金属鳌合层析的方法纯化蛋白。Western blot分析了重组蛋白的免疫学活性,ELISA试验探讨了2种蛋白用于胎儿弯杆菌病血清学诊断的可能性。结果表明,以可溶形式表达的2部分蛋白分子量大小约66Ku,与预计大小相符。纯化的蛋白均具有良好的免疫学活性,但蛋白rSapA-N比蛋白rSapA-C的免疫学活性高,rSapA-N具有良好的胎儿弯杆菌病血清学诊断的应用价值。

关键词：胎儿弯杆菌表面蛋白基因SapA 原核表达纯化 ELISA

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胎儿弯杆菌表面蛋白(SapA)基因的分段表达及其免疫原性分析

胎儿弯杆菌表面蛋白(SapA)基因的分段表达及其免疫原性分析

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：赵海玲刘思国刘慧芳王春来司微杜艳芬杨金国林靖凯中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室内蒙古农业大学动物科学与医学学院吉林农业大学广西大学

应用PCR方法扩增出胎儿弯杆菌表面蛋白基因(SapA)的2个基因片段SapA-N(1390bp)和SapA-C(1403bp),采用DNA重组技术,将2个基因片段分别连于表达载体pET32a(+),并在大肠杆菌中诱

关键词：胎儿弯杆菌免疫原性分析分段表达

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以胎儿弯杆菌重组表面蛋白(SapA)为抗原的间接ELISA方法及初步应用

以胎儿弯杆菌重组表面蛋白(SapA)为抗原的间接ELISA方法及初步应用

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第六届全国免疫学学术大会

作者：赵海玲刘思国杜艳芬刘慧芳王春来王勇司微杨金国林靖凯中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室内蒙古农业大学动物科学与医学学院吉林农业大学广西大学

胎儿弯杆菌对于人和动物是危害较大的病原微生物,开展胎儿弯杆菌研究具有重要的公共卫生学意义。本研究应用PCR方法扩增出胎儿弯杆菌表面蛋白基因(SapA)的2个基因片段SapA-N(1398bp)和SapA-C(1422bp),将2个基因片段分别连于表达载体pET3... 详细信息

胎儿弯杆菌对于人和动物是危害较大的病原微生物,开展胎儿弯杆菌研究具有重要的公共卫生学意义。本研究应用PCR方法扩增出胎儿弯杆菌表面蛋白基因(SapA)的2个基因片段SapA-N(1398bp)和SapA-C(1422bp),将2个基因片段分别连于表达载体pET32a(+),

关键词：胎儿弯杆菌 ELISA 初步应用

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结核分枝杆菌Rv1400c多抗制备及反应原性分析

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经济动物学报 2015年第1期19卷 16-19+24页

作者：陶荣珊胡太超李金伟刘思国王全凯吉林农业大学动物科学技术学院北海绿瑞贸易有限责任公司东丰药业中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室吉林省中韩动物科学研究院

将pET28b-Rv1400c重组表达质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,筛选出阳性菌株并增菌培养后IPTG诱导表达,离心后沉淀用SKL变性溶解,用亲和层吸树脂纯化Rv1400c蛋白,通过SDS-PAGE和Western-blot分析目的蛋白表达与纯化情况;利用Rv1400c蛋白... 详细信息

将pET28b-Rv1400c重组表达质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,筛选出阳性菌株并增菌培养后IPTG诱导表达,离心后沉淀用SKL变性溶解,用亲和层吸树脂纯化Rv1400c蛋白,通过SDS-PAGE和Western-blot分析目的蛋白表达与纯化情况;利用Rv1400c蛋白免疫新西兰兔,制备多克隆抗体;Western-blot分析鹿结核阳性血清的反应情况。SDS-PAGE和Western-blot结果显示:Rv1400c以包涵体形式表达,蛋白分子质量为39 ku;目的蛋白免疫新西兰兔后,ELISA检测血清效价达到1∶51 200。纯化的Rv1400c重组抗原蛋白能与鹿的阳性血清发生体外结合反应。

关键词：结核分枝杆菌 Rv1400c 包涵体复性反应原性

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牛支原体的α烯醇化酶的功能研究

牛支原体的α烯醇化酶的功能研究

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第九次学术研讨会

作者：李媛宋志强刘洋孙文静邹晓辉辛九庆中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室／国家牛传染性胸膜肺炎指定检测实验室，黑龙江哈尔滨 150001 东北农业大学动物医学院，黑龙江哈尔滨 150000

牛支原体是牛支原体相关疾病的病原。最近的研究表明很多细菌表面存在的可结合纤溶酶原的结构能够加强细菌在宿主体内的侵袭力与传播。烯醇化酶是一种普遍存在与生物体内的糖酵解酶并存在在不同的原核以及真核生物的细胞表面作为一种重... 详细信息

牛支原体是牛支原体相关疾病的病原。最近的研究表明很多细菌表面存在的可结合纤溶酶原的结构能够加强细菌在宿主体内的侵袭力与传播。烯醇化酶是一种普遍存在与生物体内的糖酵解酶并存在在不同的原核以及真核生物的细胞表面作为一种重要的纤溶酶原结合蛋白从而与细菌粘附宿主细胞的能力相关。我们第一次证明了牛支原体细胞表面具有结合纤溶酶原的能力。并且我们在大肠杆菌中以可溶性形式表达出重组的牛支原体烯醇化酶。通过抗牛支原体烯醇化酶抗血清应用western blot与EusA方法牛支原体中烯醇化酶被证明同时存在于细胞的胞浆部分与胞膜部分。同时，牛支原体烯醇化酶被证明是牛支原体膜蛋白组分中的最主要的一种纤溶酶原结合蛋白。所有的实验数据表明与表面相关的牛支原体烯醇化酶能够加强牛支原体粘附宿主细胞的能力。

关键词：牛支原体 α烯醇化酶功能分析细菌粘附宿主细胞

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胸膜肺炎放线杆菌血清7型S8△clpP/△apxⅡC双基因缺失弱毒株的构建及其生物学特性

胸膜肺炎放线杆菌血清7型S8△clpP/△apxⅡC双基因缺失弱毒株的构...

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十次学术研讨会

作者：谢芳周泷李刚张艳禾刘娇崔宁王春来中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室黑龙江哈尔滨150001 黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163000 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030

胸膜肺炎放线杆菌(APP)是引起猪传染性胸膜肺炎的一种重要病原菌.为进一步降低其毒力以制备基因缺失弱毒疫苗,本研究以本实验室构建的APP血清7型sg菌株基因缺失株S8△clpP为亲本株,通过同源重组和蔗糖负向筛选的方法,敲除了ApxⅡ溶血素... 详细信息

胸膜肺炎放线杆菌(APP)是引起猪传染性胸膜肺炎的一种重要病原菌.为进一步降低其毒力以制备基因缺失弱毒疫苗,本研究以本实验室构建的APP血清7型sg菌株基因缺失株S8△clpP为亲本株,通过同源重组和蔗糖负向筛选的方法,敲除了ApxⅡ溶血素激活基因apxⅡC,构建了无抗生素标记的双基因缺失突变株S8△clpP/△apxⅡC.生物学特性结果显示,双基因缺失株仔生长速率没有明显改变,但溶血活性完全消失,结果表明双基因缺失株Sg△clpP/△apxⅡC可作为APP基因缺失弱毒活疫苗的候选株.

关键词：猪胸膜肺炎放线杆菌基因缺失血清分析型毒株构建生物学特性

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胸膜肺炎放线杆菌血清7型S8ΔclpP/ΔapxⅡC/Δfur三基因缺失弱毒株的构建及生物学特性研究

胸膜肺炎放线杆菌血清7型S8ΔclpP/ΔapxⅡC/Δfur三基因缺失弱毒...

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四川省畜牧兽医学会2014学术年会

作者：周泷谢芳刘娇崔宁李艳玲牛惠李刚张艳禾王春来中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室黑龙江哈尔滨 150001 黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163000 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030

胸膜肺炎放线杆菌(APP)是引起猪传染性胸膜肺炎的一种重要病原菌.为进一步致弱其毒力,制备基因缺失弱毒疫苗,本研究以本实验室构建的APP血清7型S8菌株双基因缺失株S8△clpP/△apxⅡC为亲本株,通过同源重组和蔗糖负向筛选的方法,再将铁... 详细信息

胸膜肺炎放线杆菌(APP)是引起猪传染性胸膜肺炎的一种重要病原菌.为进一步致弱其毒力,制备基因缺失弱毒疫苗,本研究以本实验室构建的APP血清7型S8菌株双基因缺失株S8△clpP/△apxⅡC为亲本株,通过同源重组和蔗糖负向筛选的方法,再将铁摄取调节基因fur缺失,构建了无抗生素标记的三基因缺失突变株S8△clpP/△apxⅡC/fur.生物学特性研究表明,该缺失株与野生株S8相比,体外生长速度未发生明显变化,但溶血能力显著下降,与亲本株相比,铁摄取利用轻微降低.致病力试验结果表明,仔猪经气管接种该缺失株毒力显著低于野生型菌株,并且1×109CFU/mL剂量对猪不产生明显的呼吸道症状和肺部病变,表明该缺失株高度安全,可作为APP基因缺失弱毒活疫苗的候选株.

关键词：猪传染性胸膜肺炎胸膜肺炎放线杆菌基因缺失弱毒疫苗生物学特性

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猪源肠球菌新外派泵多重耐药基因Isa(E)流行特点及传播方式分析

猪源肠球菌新外派泵多重耐药基因Isa(E)流行特点及传播方式分析

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十次学术研讨会

作者：张万江初胜波王秀梅刘琪牟迪刘思国中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室黑龙江哈尔滨150001 吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118 东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030

为了研究猪源肠球菌多重耐药外派泵耐药基因lsa(E)的流行病学及扩散机制，本研究对从广西某猪场分离的15株携带Isa(E)基因的肠球菌进行耐药表型和相关耐药基因型检测，通过脉冲凝胶电泳(Pulsed-Filed GelElectrophoresis, PFGE)和South... 详细信息

为了研究猪源肠球菌多重耐药外派泵耐药基因lsa(E)的流行病学及扩散机制，本研究对从广西某猪场分离的15株携带Isa(E)基因的肠球菌进行耐药表型和相关耐药基因型检测，通过脉冲凝胶电泳(Pulsed-Filed GelElectrophoresis, PFGE)和Southern杂交确定菌株间的同源关系和Isa(E)基因的传播方式。

关键词：猪源肠球菌外派泵多重耐药基因流行病学传播方式

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肠炎沙门菌延伸因子EF-Tu缺失株对环境压力的应答变化

肠炎沙门菌延伸因子EF-Tu缺失株对环境压力的应答变化

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中国畜牧兽医学会生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十二次学术研讨会

作者：曹俊刘松艳周薇司微王曼宇张童利刘思国于申业中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院吉林农业大学动物科学技术学院东北农业大学动物医学学院

肠炎沙门菌(Salmonella enterica)是一种无宿主特异性的病原菌,不但引起畜禽疾病,而且是一种重要的人类食源性致病菌,具有重要的公共卫生意义。肠炎沙门菌的热不稳定延伸因子EF-Tu(Elongation factorthermo unstable,EF-Tu)由tufA基因编... 详细信息

肠炎沙门菌(Salmonella enterica)是一种无宿主特异性的病原菌,不但引起畜禽疾病,而且是一种重要的人类食源性致病菌,具有重要的公共卫生意义。肠炎沙门菌的热不稳定延伸因子EF-Tu(Elongation factorthermo unstable,EF-Tu)由tufA基因编码,是细菌细胞中含量很丰富的一种蛋白质,其主要生物功能是在蛋白质合成过程

关键词：缺失株肠炎沙门菌 EF-Tu 延伸因子

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