检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2019年第4期41卷 396-401页

作者：李鹤党光辉于申业程玉笛刘虹秀宋宁宁陈利苹刘思国中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病创新团队

探究肠炎沙门氏菌菌蜕(ghost)佐剂对结核分枝杆菌(MTB)4种抗原的免疫增强作用,本研究以MTB中的Rv3802、Rv0394c(SEC)、Rv0199及E6c10(ESAT6与CFP10融合蛋白)蛋白为免疫原,应用小鼠模型评价沙门氏菌菌蜕对MTB4种抗原的免疫佐剂效应。结... 详细信息

探究肠炎沙门氏菌菌蜕(ghost)佐剂对结核分枝杆菌(MTB)4种抗原的免疫增强作用,本研究以MTB中的Rv3802、Rv0394c(SEC)、Rv0199及E6c10(ESAT6与CFP10融合蛋白)蛋白为免疫原,应用小鼠模型评价沙门氏菌菌蜕对MTB4种抗原的免疫佐剂效应。结果显示,蛋白加菌蜕佐剂组可以刺激小鼠产生持久高水平的抗体,并且菌蜕佐剂的免疫增强效果高于弗氏不完全佐剂;IgG1/IgG2a的比率增高,提示蛋白加菌蜕佐剂组小鼠趋向于Th2型免疫反应,同时可以诱导淋巴细胞分化为CD4+T细胞亚群并产生IFN-γ及IL-4细胞因子;病理组织学显示以菌蜕佐剂配伍蛋白制备的亚单位疫苗具有良好的安全性。本研究为结核病的预防和新型疫苗的研发奠定了一定的基础。

关键词：结核病菌蜕佐剂亚单位疫苗免疫应答

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猪链球菌2型05ZYH33菌株启动子的筛选和鉴定

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中国预防兽医学报 2019年第6期41卷 584-589页

作者：刘冉黄萌萌陈平朱金鲁谢芳刘思国张跃灵中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病创新团队

为了筛选和鉴定用于猪链球菌(***)致病因子和致病机制研究的启动子,本研究通过质谱鉴定了来自***2型05ZYH33菌株的5个高丰度蛋白质,并通过其驱动GFP蛋白和甘露糖苷酶SSU05_1921的表达水平,评估了这5个蛋白相应的基因启动子的强弱。结果... 详细信息

为了筛选和鉴定用于猪链球菌(***)致病因子和致病机制研究的启动子,本研究通过质谱鉴定了来自***2型05ZYH33菌株的5个高丰度蛋白质,并通过其驱动GFP蛋白和甘露糖苷酶SSU05_1921的表达水平,评估了这5个蛋白相应的基因启动子的强弱。结果显示,这5种蛋白质分别为SSU05_0177、SSU05_0530、SSU05_1503、SSU05_1815和SSU05_1868,相应的5个启动子P0177、P0530、P1503、P1815和P1868均能够有效驱动GFP在***和***中的高水平表达,但是P1815、P0177和P1868不能驱动SSU05_1921在***中的表达。P0530和P1503能够驱动SSU05_1921在***中的表达,并且P1503启动子驱动GFP和SSU05_1921的表达水平均比P0530启动子驱动的高两倍以上。因此,P0530和P1503是***的强启动子,并且P1503更强于P0530。这在高水平表达GFP用于标记菌体,以及构建无启动子基因的回复突变菌株中发挥关键作用,在***遗传操作中具有很好的应用前景。

关键词：猪链球菌强启动子筛选和鉴定翻译延伸因子EF-Tu 烯醇化酶

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基于牛呼吸道合胞体病毒融合前F蛋白的间接ELISA方法的建立与应用

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中国预防兽医学报 2019年第11期41卷 1126-1130,1158页

作者：王磊常继涛于力中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/牛羊传染病研究创新团队

为确定牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)在我国的流行情况,本研究以BRSV融合前F蛋白作为包被抗原,经各项条件优化后建立了检测BRSV抗体的间接ELISA方法:确定抗原最佳包被浓度为2 mg/L、待检血清的最佳稀释度为1∶100、最佳封闭液为3%明胶、羊抗... 详细信息

为确定牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)在我国的流行情况,本研究以BRSV融合前F蛋白作为包被抗原,经各项条件优化后建立了检测BRSV抗体的间接ELISA方法:确定抗原最佳包被浓度为2 mg/L、待检血清的最佳稀释度为1∶100、最佳封闭液为3%明胶、羊抗牛Ig G-HRP的稀释度为1:8000,抗体阴阳性临界值为0.204。特异性试验结果显示,该ELISA方法与阿卡斑病毒(AKAV)、牛轮状病毒(BRV)、蓝舌病病毒(BTV)、口蹄疫病毒(FMDV)、牛副流感病毒3型(BPIV3)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)以及牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)的阳性血清无交叉反应。敏感性试验结果显示,当BRSV阳性血清稀释倍数达1∶6400时仍为阳性结果,表明该方法具有较高的敏感性。重复性试验结果显示,ELISA组内、组间最大变异系数分别为6.80%和8.80%,表明该方法的重复性良好。对195份临床牛血清样品检测结果显示,BRSV抗体阳性率为61.0%;对其中的143份血清同时进行病毒中和试验检测,结果显示二者符合率为89.5%。上述结果表明本研究建立的间接ELISA方法可以用于牛群中BRSV抗体的检测,为BRSV的血清流行病学调查提供可靠的技术手段。

关键词：牛呼吸道合胞体病毒融合前的F蛋白间接ELISA 抗体检测

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三株鸭源H7N2亚型禽流感病毒的遗传进化分析及其致病性研究

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中国预防兽医学报 2019年第12期41卷 1193-1198页

作者：李梅尹馨侯玉杰邓国华崔鹏飞房敬真施建忠陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点实验室黑龙江哈尔滨150069

为了解我国H7N2亚型禽流感病毒(AIV)的进化及评估病毒对动物的致病性风险,本研究对2012年~2015年从浙江和湖南省活禽市场分离到的3株鸭源H7N2亚型AIV进行了遗传演化分析,并研究了其对家禽和哺乳动物小鼠的致病性。基因序列分析显示,3株... 详细信息

为了解我国H7N2亚型禽流感病毒(AIV)的进化及评估病毒对动物的致病性风险,本研究对2012年~2015年从浙江和湖南省活禽市场分离到的3株鸭源H7N2亚型AIV进行了遗传演化分析,并研究了其对家禽和哺乳动物小鼠的致病性。基因序列分析显示,3株病毒均是多个亚型AIV的重组体,表明不同来源病毒具有明显的基因多样性,可分为3个基因型。鸡的感染性试验结果显示,滴鼻感染3 d后,3株病毒感染组鸡的喉头、泄殖腔均有部分排毒,其中仅DK/ZJ/S3192/2012分离株可在鸡的脏器中检测到病毒,提示鸭源性H7N2亚型AIV在鸡体内仅具有有限的复制能力;鸭的感染性试验结果显示,3株病毒在鸭的脏器内均有不同程度的复制;小鼠的感染性试验结果表明,3株病毒均可以在没有预先适应的小鼠肺和鼻甲中高效复制,其中DK/HuN/S1515/2014分离株可在被迫杀的3只小鼠中的1只小鼠的脑组织中复制。以上结果表明3株H7N2亚型AIV对家禽和小鼠均呈现低致病力。本研究为H7N2 AIV的持续监测提供了数据支持,并且评估了其可能导致人类感染的风险。

关键词： H7N2 禽流感病毒遗传进化致病性

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3株牛病毒性腹泻病毒的分离鉴定及其基因分型

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中国预防兽医学报 2019年第4期41卷 422-425页

作者：向文杰林俊宋文凤李德栋薛飞朱远茂中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物传染病研究室

为确定牛呼吸道传染病的病原以及牛病毒性腹泻病毒(BVDV)在临床健康牛群中是否存在持续性感染,本研究采集了内蒙古自治区和黑龙江省两个牛场牛鼻拭子46份及肺脏样品8份,采用MDBK细胞进行病毒分离培养,经BVDV特异性引物RT-PCR检测有3份... 详细信息

为确定牛呼吸道传染病的病原以及牛病毒性腹泻病毒(BVDV)在临床健康牛群中是否存在持续性感染,本研究采集了内蒙古自治区和黑龙江省两个牛场牛鼻拭子46份及肺脏样品8份,采用MDBK细胞进行病毒分离培养,经BVDV特异性引物RT-PCR检测有3份样品为阳性。利用间接免疫荧光检测3株阳性样品,可以观察到特异性荧光,表明分离得到3株BVDV,分别命名为480、A0583和Lung-6。进一步研究显示480、A0583和Lung-6均为非致细胞病变型。对3株分离病毒的5'端非编码区和Npro基因进化树分析显示3株病毒均属于BVDV1型,其中480株属于BVDV1c亚型,A0583株和Lung-6株同属于BVDV1m亚型。本研究首次在国内同一个牛场分离到BVDV1m(A0583)和BVDV1c(480)两个基因亚型。本研究为我国BVDV-1型不同基因亚型的抗原关系分析及BVDV疫苗的研制奠定了基础。

关键词：牛病毒性腹泻病毒分离鉴定基因分型

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鸭瘟病毒疫苗株UL44.5和UL44基因间隔区作为复制非必需区的鉴定

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中国预防兽医学报 2019年第8期41卷 795-799页

作者：赵玉博陈普成胡玉珍丁蕾蕾王波焦晨晨姜永萍陈化兰柳金雄中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室

为探寻鸭瘟病毒(DEV)基因组中适合外源基因插入的复制非必需区,本研究利用本实验室前期建立的DEV疫苗株多片段拯救系统,结合E/T克隆技术、LR克隆技术将含有红色荧光蛋白(RFP)表达框架的目的片段,定向插入到含DEV基因组复制非必需区的粘... 详细信息

为探寻鸭瘟病毒(DEV)基因组中适合外源基因插入的复制非必需区,本研究利用本实验室前期建立的DEV疫苗株多片段拯救系统,结合E/T克隆技术、LR克隆技术将含有红色荧光蛋白(RFP)表达框架的目的片段,定向插入到含DEV基因组复制非必需区的粘粒中,该位点位于DEV基因组UL区的UL44.5和UL44之间,拯救获得了重组病毒(rDEV)。通过PCR和荧光显微镜鉴定该重组病毒。结果显示,经PCR扩增,r DEV可以扩增到预期目的片段,观察可见红色荧光,表明RFP基因能够在重组病毒中稳定存在并正确表达;生长动力学结果显示,重组病毒在CEF中的增殖效率与DEV疫苗株无显著差异。将r DEV以105 TCID50的剂量免疫SPF鸭后,DEV攻毒保护试验结果显示,r DEV和亲本株DEV活疫苗对SPF鸭的保护效率均为100%。本研究筛选到DEV基因组中的一个可供外源基因插入的位点,为以DEV为载体构建相关重组疫苗研制提供依据。

关键词：重组鸭瘟病毒复制非必需区 DEV拯救系统

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一株H5N3亚型禽流感病毒全基因组序列分析及其对小鼠的感染性研究

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中国预防兽医学报 2019年第7期41卷 665-669页

作者：韩舒雨崔鹏飞崔嘉琦谷文丽邢鑫邓国华陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室

为了解H5N3亚型流感病毒的生物学特性,本研究对2017年浙江省分离到的一株H5N3亚型禽流感病毒(AIV)[DK/ZJ/S1368/2017(H5N3)]进行了遗传演化分析及小鼠感染性实验。遗传演化分析结果显示,该株病毒的HA蛋白裂解位点处仅含一个碱性氨基酸,... 详细信息

为了解H5N3亚型流感病毒的生物学特性,本研究对2017年浙江省分离到的一株H5N3亚型禽流感病毒(AIV)[DK/ZJ/S1368/2017(H5N3)]进行了遗传演化分析及小鼠感染性实验。遗传演化分析结果显示,该株病毒的HA蛋白裂解位点处仅含一个碱性氨基酸,属于低致病性AIV。同时,该病毒的血凝素(HA)基因与H5N7亚型流感病毒亲缘关系较近;聚合酶碱性蛋白2(PB2)基因和核蛋白(NP)基因与H10N7亚型流感病毒亲缘关系较近;碱性聚合酶蛋白1(PB1)基因与H1N1亚型流感病毒亲缘关系较近;酸性聚合酶蛋白(PA)基因与H6N2亚型流感病毒亲缘关系较近;神经氨酸酶(NA)基因与H10N3亚型流感病毒亲缘关系较近;基质蛋白(M)基因与H3N8亚型流感病毒亲缘关系较近;非结构蛋白(NS)基因与H1N1亚型流感病毒亲缘关系较近。表明其基因来源复杂。小鼠感染实验结果显示,该分离株无需提前适应即可以在小鼠肺脏和鼻甲中复制,小鼠感染病毒后无明显临床症状,与对照组相比其体质量变化不明显,表明该病毒对小鼠呈低致病性。本研究通过对该H5N3亚型AIV的生物学特性的分析,发现该病毒基因来源复杂,无需提前适应就可以在小鼠体内复制,具有感染哺乳动物的潜在威胁,提示应当持续加强对H5N3亚型AIV的监测和相关生物学特性的研究工作。

关键词：禽流感病毒 H5N3 生物学特性

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M蛋白携带TC标签的重组新城疫病毒的构建及生物学特性鉴定

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中国预防兽医学报 2019年第8期41卷 777-782页

作者：范振孙军峰赵冉韩宗玺刘胜旺中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽呼吸道病创新团队

基质蛋白(M)是新城疫病毒(NDV)重要的结构蛋白。为监测NDV感染后M蛋白在细胞中的动态分布,本研究利用反向遗传操作技术,在NDV La Sota株全长c DNA中M基因编码区的C端插入由18个核苷酸编码的TC (Tetracysteine)标签,转染细胞经筛选获得携... 详细信息

基质蛋白(M)是新城疫病毒(NDV)重要的结构蛋白。为监测NDV感染后M蛋白在细胞中的动态分布,本研究利用反向遗传操作技术,在NDV La Sota株全长c DNA中M基因编码区的C端插入由18个核苷酸编码的TC (Tetracysteine)标签,转染细胞经筛选获得携带TC标签的重组病毒La Sota-M-CTC。生长曲线测定结果显示,La Sota-M-CTC能够在鸡胚中有效复制,其生长曲线与亲本病毒La Sota相似。通过接种鸡胚测定鸡胚平均死亡时间检测La Sota-M-CTC的毒力。结果显示,La Sota-M-CTC的毒力与La Sota基本一致。此外,TC标签能够在重组病毒中稳定存在。将La Sota-M-CTC感染的细胞用双砷绿色染料FlAsH-EDT2染色后经激光共聚焦检测M蛋白在细胞中的分布。结果显示,在La Sota-M-CTC感染细胞后1 h^2 h时,M蛋白主要分布于细胞质中,而在病毒感染4 h后M蛋白进入细胞核中,并持续存在至病毒感染后的12 h。本研究为监测M蛋白在NDV感染过程中的动态分布以及阐明M蛋白在NDV感染中的作用机制提供了实验依据。

关键词：新城疫病毒 TC标签 M蛋白细胞定位

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耻垢分枝杆菌诱导中性粒细胞胞外诱捕网形成的研究

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中国预防兽医学报 2019年第11期41卷 1154-1158页

作者：臧鑫鑫党光辉王忠星刘虹秀崔子寅崔莹莹宋宁宁刘思国中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病创新团队

中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)是中性粒细胞抵御病原微生物重要的防御机制之一,NETs能够在体内外条件下捕获并杀灭病原微生物。为研究模式菌株-耻垢分枝杆菌(MS)与中性粒细胞的相互作用,本研究通过分离牛外周血中性粒细胞,将标记红色荧光... 详细信息

中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)是中性粒细胞抵御病原微生物重要的防御机制之一,NETs能够在体内外条件下捕获并杀灭病原微生物。为研究模式菌株-耻垢分枝杆菌(MS)与中性粒细胞的相互作用,本研究通过分离牛外周血中性粒细胞,将标记红色荧光的MS与中性粒细胞共孵育,通过激光共聚焦观察NETs的形成;采用Pi-coGreen~?dsDNA试剂盒定量分析胞外ds DNA的释放量;并且通过菌落计数统计MS的存活情况。结果显示,MS能够诱导中性粒细胞形成NETs,胞外游离DNA的释放量随着时间的延长而逐渐增多,与对照组相比差异极显著(p<0.01或p<0.001),且NETs能够杀灭MS。本研究为后续利用MS作为模式菌研究结核分枝杆菌重要蛋白功能的研究提供参考依据。

关键词：耻垢分枝杆菌中性粒细胞中性粒细胞胞外诱捕网

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马属动物主要传染病疫苗和诊断技术的研制与推广应用

马属动物主要传染病疫苗和诊断技术的研制与推广应用

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作者：王晓钧胡哲郭巍戚亭刘荻中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室国家马传染性贫血参考实验室国家马鼻疽参考实验室

中国农业科学院哈尔滨兽医研究所马传染病和慢病毒病研究创新团队70年来专注马传染病的研究，是国家认定的国家马传染性贫血参考实验室、国家马鼻疽参考实验室，世界动物卫生组织OIE认定的马传染性贫血参考实验室。在历史上，团队早期... 详细信息

中国农业科学院哈尔滨兽医研究所马传染病和慢病毒病研究创新团队70年来专注马传染病的研究，是国家认定的国家马传染性贫血参考实验室、国家马鼻疽参考实验室，世界动物卫生组织OIE认定的马传染性贫血参考实验室。在历史上，团队早期领导人兽医免疫学家中国工程院沈荣显院士研制成功了马传染性贫血病毒弱毒疫苗，成功控制了该病在国内的流行。随着我国经济的高速发展和全面迈入小康社会，现代马业快速发展，马成为重要的竞技、娱乐、伴侣动物，驴作为经济动物的需求日益增长，马业、驴业已然发展成为重要的一种经济和文化产业。我国现有马匹350余万匹，驴300余万头，近年来在新需求的推动下，养殖数量逐步增大，动物交易和调运频繁，导致各种传染病发生增多，给现代马业带来的巨大威胁。哈兽研马病团队面向产业疫病控制重大需求，针对重要马属动物传染病的诊断和疫苗开展集中攻关，研发出一系列国际先进的科技成果，为马业的健康发展和绿色养殖提供了可靠的、高效的科技支撑。该文主要介绍团队研发的3项疫苗、多项诊断试剂、标准化实验室认证下的检测系统、重大疫病监测现场快速诊断产品。马流行性感冒(Equine innuenza)简称马流感，是由流行性感冒病毒引起的马属动物的一种急性暴发式流行的传染病，临床特征为发热、咳嗽、流鼻液、母马流产等，世界动物卫生组织已将其列为B类疫病。马流产沙门氏菌病又称为马副伤寒，是由马流产沙门氏菌引起的以马属动物流产为特征的传染病，只对马属动物具有致病性。驴副伤寒是由马流产沙门氏杆菌引起的马属动物的一种传染病。临床特征是孕畜发生流产；公畜表现为睾丸炎、髻甲肿；幼驹主要表现为关节肿大、下痢，有时还见支气管肺炎。

关键词：马属动物传染病疫苗临床诊断

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