检索结果-内蒙古大学图书馆

中国动物传染病学报 2017年第2期25卷 9-13页

作者：焦美会刘家森姜骞陆涛峰胡小亮蒋艳妹曲连东中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

为筛选出兔出血症病毒(Rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV)衣壳蛋白VP60特异性核酸适配体,建立新型的兔出血症(rabbit hemorrhagic disease,RHD)检测方法,本研究构建了一个长80 nt的随机寡核苷酸文库。以固定在PVDF膜上的VP60为靶... 详细信息

为筛选出兔出血症病毒(Rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV)衣壳蛋白VP60特异性核酸适配体,建立新型的兔出血症(rabbit hemorrhagic disease,RHD)检测方法,本研究构建了一个长80 nt的随机寡核苷酸文库。以固定在PVDF膜上的VP60为靶分子,使用消减SELEX技术(systematic evolution of ligands by exponential enrichment)进行20轮的筛选,以生物素标记的次级文库作为"一抗",以辣根过氧化物酶标记的链酶亲和素作为"二抗",对文库进行Western blot鉴定,结果表明第20轮文库存在可特异性的识别VP60的核酸序列。随机选取第20轮文库的46条序列克隆、测序,得到20个高度同源序列,同时对46个适配体再次鉴定,最终得到3个特异性识别VP60的适配体。

关键词：兔出血症病毒适配体 SELEX技术

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H7N9 IAV PB1蛋白抑制Ⅰ型IFN信号通路

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农业生物技术学报 2017年第7期25卷 1188-1196页

作者：王婉冰曾艳汪亮韩璐王正祥陈化兰李郁朱启运安徽农业大学动物科技学院中国农业科学院兰州兽医研究所/家畜疫病病原生物学国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所/兽医生物技术国家重点实验室

H7N9 A型流感病毒(Influenza A virus,IAV)是对公共卫生安全危害严重的新发人兽共患病病原。为了初步解析H7N9 IAV介导的天然免疫反应的分子机制,本研究将聚合酶碱性蛋白1(polymerase basic protein 1,PB1)基因克隆至p RK真核表达载体,... 详细信息

H7N9 A型流感病毒(Influenza A virus,IAV)是对公共卫生安全危害严重的新发人兽共患病病原。为了初步解析H7N9 IAV介导的天然免疫反应的分子机制,本研究将聚合酶碱性蛋白1(polymerase basic protein 1,PB1)基因克隆至p RK真核表达载体,并利用定点突变技术对PB1基因的第96位和第129位核苷酸分别进行定点突变,使其移框编码的PB1-F2基因不表达,排除PB1-F2基因对PB1后续研究的影响。随后,利用双荧光素酶报告基因系统和q RT-PCR分析PB1蛋白对Ⅰ型干扰素(interferons,IFNs)信号通路活化的影响;进而,通过免疫共沉淀实验确定PB1蛋白在维甲酸诱导基因Ⅰ样受体(retinoic-acidinducible geneⅠ(RIG-Ⅰ)-like receptors,RLRs)信号通路中的作用靶点,最后在293T细胞中分别过表达PB1蛋白和线粒体抗病毒信号分子(mitochondrial antiviral signaling,MAVS)或RIG-Ⅰ,检测PB1对MAVS或RIG-Ⅰ表达量的影响。结果表明,PB1可以显著抑制IFN-β、干扰素刺激反应元件(IFN stimulated response element,ISRE)和核调节因子-κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)报告基因的活性,并下调IFN-β和干扰素诱导基因56(interferon stimulated gene 56,ISG56)、ISG15和CXC趋化因子配体10基因(C-X-C motif chemokine 10,CXCL-10)的表达;PB1可以特异性地和RLRs信号通路中的MAVS相互作用,并且随着PB1蛋白表达的增加,MAVS的表达呈下降趋势,但RIG-Ⅰ的表达不受影响。因此,本研究的实验数据初步表明,H7N9 PB1蛋白可特异性结合RLRs信号通路中重要接头分子MAVS,并能够降低其表达量,从而抑制Ⅰ型IFN基因的表达并阻断其发挥作用的下游信号通路。本研究结果明确了H7N9 IAV PB1蛋白在天然免疫信号通路中的作用靶点,为防控H7N9流感提供理论依据。

关键词： H7N9 聚合酶碱性蛋白1(PB1) Ⅰ型干扰素(IFNs) 线粒体抗病毒信号分子(MAVS)

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猪伪狂犬病病毒流行毒株gC基因的分子特征及其对小鼠的毒力试验

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中国兽医科学 2017年第6期47卷 713-720页

作者：夏德利黄立平危艳武王一平杜文娟谢永兴吴洪丽冯力刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

为了阐明猪伪狂犬病病毒(PRV)流行毒株gC基因的分子特征及其对小鼠的毒力,对来自不同年代分离的6株PRV流行毒株进行了gC基因分子变异特征分析,通过接种BALB/c小鼠检验毒株的毒力。对临床病例分离的6株PRV和30个Gen Bank下载的gC基因序... 详细信息

为了阐明猪伪狂犬病病毒(PRV)流行毒株gC基因的分子特征及其对小鼠的毒力,对来自不同年代分离的6株PRV流行毒株进行了gC基因分子变异特征分析,通过接种BALB/c小鼠检验毒株的毒力。对临床病例分离的6株PRV和30个Gen Bank下载的gC基因序列进行分析表明,这6株PRV与2012年以后流行的毒力增强的变异毒株处于同一分支;这些毒株的氨基酸同源性为98.7%~100%,而与经典的PRV-SC毒株的氨基酸同源性仅为93.2%~94.0%。PRV毒株g C蛋白第52~70位氨基酸为高变区,尤其第64~70位出现7个氨基酸(AAASTPA)插入。对gC蛋白糖基化位点分析表明,PRV变异毒株较经典毒株增加了6个O-连接糖基化位点,且gC蛋白B细胞表位出现3处突变,分别为P69R、P80Q和N83G。gC蛋白上硫酸乙酰肝素结合域(HBD)出现2处突变,分别为HBD1第5位氨基酸由经典毒株的P突变为Q,HBD3的第3位氨基酸由Y突变为C。用分离的6株PRV接种BALB/c小鼠试验显示,PRV-HRB和PRV-SH毒株半数致死量(LD50)均为1×10^(3.21)/mL,PRV-DL、PRV-JL及PRV-GZL的LD50为1×10^(3.75)/mL,PRV-JF的LD50为1×10^(4.32)/mL。上述结果阐明了PRV流行毒株g C基因的分子特征及其对小鼠的毒力,为该病毒的致病机制研究提供了科学依据。

关键词：伪狂犬病病毒流行毒株 gC基因分子特征毒力

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4型禽腺病毒抗体间接hexon-ELISA检测方法的建立

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中国兽药杂志 2018年第8期52卷 7-11页

作者：朱庆贺张鹏宇崔红玉王观悦王爽陈曦刘力威史同瑞黑龙江省兽医科学研究所黑龙江齐齐哈尔161006 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室哈尔滨150000

以4型禽腺病毒(FAdV-4)的DNA为模板,扩增其六邻体(hexon)部分基因并进行重组表达,以重组hexon蛋白为包被抗原,优化ELISA检测条件,建立了FAdV-4的ELISA抗体检测方法。该方法对FAdV-4阳性血清检测为阳性,对于其他鸡常见病毒,如禽流感病毒5... 详细信息

以4型禽腺病毒(FAdV-4)的DNA为模板,扩增其六邻体(hexon)部分基因并进行重组表达,以重组hexon蛋白为包被抗原,优化ELISA检测条件,建立了FAdV-4的ELISA抗体检测方法。该方法对FAdV-4阳性血清检测为阳性,对于其他鸡常见病毒,如禽流感病毒5、7、9型,新城疫病毒以及鸡传染性支气管炎病毒阳性血清检测均为阴性;与PCR方法的阳性符合率为83.3%。试验表明,建立的以重组hexon蛋白为包被抗原检测FAdV-4血清抗体的ELISA方法可以用于检测FAdV-4的感染及相关流行病学调查。

关键词： 4型禽腺病毒 hexon蛋白原核表达间接ELISA

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禽流感病毒M2蛋白抑制细胞自噬体降解的研究

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中国预防兽医学报 2017年第1期39卷 5-9页

作者：谷琳琳马勇包红梅徐海峰孙佳善王秀荣陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

为探究禽流感病毒(AIV)M2蛋白对细胞自噬的影响,本研究构建了pEGFP-LC3和pCAF-M2重组质粒,并采用脂质体将这两种重组表达质粒共转染293T细胞或Hela细胞中,同时以单独转染这两种重组质粒的细胞作为对照组,利用间接免疫荧光和westernblot... 详细信息

为探究禽流感病毒(AIV)M2蛋白对细胞自噬的影响,本研究构建了pEGFP-LC3和pCAF-M2重组质粒,并采用脂质体将这两种重组表达质粒共转染293T细胞或Hela细胞中,同时以单独转染这两种重组质粒的细胞作为对照组,利用间接免疫荧光和westernblot的方法检测细胞自噬体及自噬流情况。自噬体检测结果表明,AIVM2蛋白能够诱导转染细胞内自噬体积累。通过LC3-IIturnover试验、mRFP-GFP-LC3双荧光指示系统以及pEGFP-LC3与LAMP1的共定位检测进一步证明,M2蛋白通过阻断自噬体与溶酶体融合,抑制溶酶体对自噬体的降解从而诱导自噬体积累。本研究揭示AIVM2蛋白对细胞自噬的发生具有重要作用,为深入研究自噬在A型流感病毒复制中的调节作用奠定基础。

关键词：细胞自噬 AIV M2蛋白

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一株H6N6亚型野鸟禽流感病毒全基因组序列分析以及对小鼠的感染性研究

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中国预防兽医学报 2017年第6期39卷 431-434页

作者：陈思崔鹏飞关立峥谷文丽施建忠邓国华陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点实验室黑龙江哈尔滨150069

为进一步了解2015年分离于我国新疆野鸟粪便中的一株H6N6亚型禽流感病毒(AIV)A/WB/XJ/S1541/2015(H6N6)的生物学特性,本研究对其进行了全基因组测序、遗传演化分析以及BALB/c小鼠的感染性试验。序列分析结果显示:该分离株HA蛋白裂解位... 详细信息

为进一步了解2015年分离于我国新疆野鸟粪便中的一株H6N6亚型禽流感病毒(AIV)A/WB/XJ/S1541/2015(H6N6)的生物学特性,本研究对其进行了全基因组测序、遗传演化分析以及BALB/c小鼠的感染性试验。序列分析结果显示:该分离株HA蛋白裂解位点的氨基酸序列为^(339)PQIETR↓GL^(346),仅有1个碱性氨基酸,具有低致病性AIV的分子特征。此外,分离株表面基因HA、NA均与一株H6N6亚型猪流感病毒A/swine/Guangdong/K6/2010高度同源,而内部基因均与H6N6亚型AIV A/pigeon/Guangxi/161/2014(H6N6)高度同源,提示该分离株基因来源的多样性。小鼠的感染性试验结果显示:该病毒可在小鼠的肺脏和鼻甲中有效复制,病毒滴度分别为5.33 log_(10) EID_(50)/mL、4.50 log10EID50/m L,提示其具有感染哺乳动物的潜在风险。本研究结果为H6亚型AIV的持续性监测和相关生物学特性的研究奠定基础。

关键词：禽流感病毒 H6N6 生物学特性

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H5N1禽流感病毒NS1蛋白调控I型干扰素应答的分子机制

H5N1禽流感病毒NS1蛋白调控I型干扰素应答的分子机制

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中国畜牧兽医学会2018年学术年会禽病学分会第十九次学术研讨会

作者：曾艳王俊勇徐帅王婉冰钟波舒红兵陈化兰雷曹琦朱启运中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室武汉大学生命科学学院医学研究院中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

引言高致病性禽流感病毒是一种重要的人畜共患病病原,常发生重组引起跨种间传播导致人和动物发病或死亡。自2003年以来,H5N1亚型禽流感病毒（AIV）已经在16个国家和地区引起超过800人的感染病例,死亡率达53%。AIV的非结构蛋白NS1不仅是... 详细信息

引言高致病性禽流感病毒是一种重要的人畜共患病病原,常发生重组引起跨种间传播导致人和动物发病或死亡。自2003年以来,H5N1亚型禽流感病毒（AIV）已经在16个国家和地区引起超过800人的感染病例,死亡率达53%。AIV的非结构蛋白NS1不仅是重要的毒力因子,还可以通过多种途径拮抗干扰素的产生。前期研究结果表明,两株H5N1亚型AIVNS1效应区的5个氨基酸不同导致其抑制I

关键词：禽流感病毒 AIV 干扰素应答 NS1 分子机制

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具有免疫反应活性的猪源重组抗体的原核表达及鉴定

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中国预防兽医学报 2017年第3期39卷 220-224页

作者：沈旦枫王睿郭佃磊霍琳琳刘永刚郭龙军王玉娥李曦中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150069

为制备与猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)具有反应活性的猪源化原核表达抗体(Pr Ab),本实验通过流式细胞技术,以PRRSV GP5蛋白多肽及抗猪Ig G抗体,筛选出能够与PRRSV抗原表位结合的阳性B淋巴细胞,利用RT-PCR从筛选得到的B细胞的mRNA... 详细信息

为制备与猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)具有反应活性的猪源化原核表达抗体(Pr Ab),本实验通过流式细胞技术,以PRRSV GP5蛋白多肽及抗猪Ig G抗体,筛选出能够与PRRSV抗原表位结合的阳性B淋巴细胞,利用RT-PCR从筛选得到的B细胞的mRNA中扩增出编码抗体重链可变区(VH)基因序列和轻链可变区(VL)基因序列,将扩增的可变区基因序列分别与本实验室前期克隆的猪源抗体轻链恒定区(CL)和重链恒定区(CH)基因序列连接后,以Linker序列将轻链和重链全长基因序列相连,构建全长的猪源抗体编码基因(H-linker-L)。将该基因克隆于原核表达载体p ET-28a中进行原核表达及纯化。Western blot鉴定结果显示,表达的重组蛋白能够被抗猪IgG抗体所识别,表明表达的重组蛋白为PrAb;经PRRSV包被的ELISA鉴定,PrAb与PRRSV弱毒株CH1R和强毒株HuN4呈阳性反应,表明所制备的PrAb为PRRSV特异性抗体。本实验为进一步制备诊断PRRS的猪源化重组抗体奠定了基础。

关键词：猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒原核表达猪源化重组抗体

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一株鸽子源的H4N8亚型禽流感病毒的部分生物学特性

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公共卫生与预防医学 2018年第3期29卷 13-17页

作者：刘驰煌谷文丽崔鹏飞邓国华熊涛长江大学生命科学学院湖北荆州434025 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室

目的实验室2017年对我国四川省遂宁船山区蜀中食品城进行流行病学调查时从鸽子体内分离鉴定出的一株H4N8亚型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)(A/Pigeon/Sichuan/S1185/2017(H4N8)(缩写为PG/SC/S1185/2017)。方法为了解此株从鸽... 详细信息

目的实验室2017年对我国四川省遂宁船山区蜀中食品城进行流行病学调查时从鸽子体内分离鉴定出的一株H4N8亚型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)(A/Pigeon/Sichuan/S1185/2017(H4N8)(缩写为PG/SC/S1185/2017)。方法为了解此株从鸽子体内分离到的H4N8亚型AIV的遗传进化特点,对此株病毒进行了全基因组的测序并画出基因进化树来探索其毒株来源,还探究了该株病毒对哺乳动物的感染能力。结果遗传演化分析数据表明,这株病毒株的各个基因节段分别来自于不同亚型流感病毒,基因来源复杂,是一株重组病毒,其具有明显的遗传多样性。小鼠感染性实验结果表明,该毒株仅能够在小鼠肺脏和鼻甲中产生微弱复制,在小鼠感染病毒3d后并未出现明显临床症状,小鼠活力没有明显的下降,与对照组相比体重变化其实基本相同。结论为今后的流行病学调查中对H4亚型流感病毒的全面监测和综合预防防控提供了数据支持。

关键词：禽流感病毒 H4N8 感染性遗传演化分析

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牛传染性鼻气管炎病毒VP8蛋白表位鉴定

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中国预防兽医学报 2017年第3期39卷 225-228页

作者：杨婷周跃辉朱远茂宋文凤马磊薛飞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物传染病研究室黑龙江哈尔滨150069

为鉴定牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)的VP8蛋白抗原表位,本研究采用超速离心纯化的IBRV免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术获得了2株针对IBRV的VP8蛋白的单克隆抗体(MAb),命名为1F5和3C2。MAb1F5和3C2的腹水效价均大于1:4×10~5,亚型均为I... 详细信息

为鉴定牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)的VP8蛋白抗原表位,本研究采用超速离心纯化的IBRV免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术获得了2株针对IBRV的VP8蛋白的单克隆抗体(MAb),命名为1F5和3C2。MAb1F5和3C2的腹水效价均大于1:4×10~5,亚型均为IgG1/κ。间接免疫荧光试验表明,2株MAb与IBRV呈特异性反应。利用肽扫描技术对MAb进行抗原表位鉴定,结果表明MAb3C2的抗原表位为^(138)PHRSLLERTA^(147),MAb1F5的抗原表位为^(183)GGGQEPG^(189),2株MAb针对的抗原表位在不同的IBRV分离株中高度保守。本研究为VP8蛋白的结构与功能的进一步分析及IBRV的检测奠定了基础。

关键词：牛传染性鼻气管炎病毒 VP8蛋白单克隆抗体抗原表位

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