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中国畜牧兽医学会2004年学术年会暨第五届全国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会

作者：姜永萍张洪波李呈军步志高张芳芳于康震陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室(黑龙江哈尔滨) 农业部畜牧兽医总站(北京)

利用寡核苷酸合成、重叠延伸PCR法及限制酶切法构建了密码子优化的A/Goose/GuangDong/1/96(H5N1)[GD/1/96(H5N1)]的HA基因(optiHA),并将其插入CMV启动子表达载体pCI构建了H5亚型DNA疫苗质粒pCIoptiHA.将pCIoptiHA和表达GD/1/96(H5N1)HA基因的DNA疫苗质粒pCIHA通过间接免疫荧光法和Western-blot分析检测转染293T细胞后瞬时表达的HA抗原蛋白;随之将pCIoptiHA及pCIHA分别以100μg和10μg剂量一次免疫3周龄SPF鸡,4周后用100LD<,50>的HPAIV GD/1/96(H5N1)鼻腔途径进行攻击.结果,间接免疫荧光法和Western-blot分析表明密码子优化的HA基因表达水平显著高于野生型HA基因;免疫SPF鸡后,100μg pCIoptiHA可形成75﹪的免疫保护,100μg pCIHA可形成50﹪的免疫保护;10μg pCIoptiHA可形成对免疫鸡75﹪的部分免疫保护,而10μg pCIHA则基本不能形成免疫保护;pCIoptiHA诱导的HI抗体水平远远高于pCIHA.试验结果表明,HA基因密码子的优化可显著提高HA基因体外表达水平和H5亚型禽流感DNA疫苗诱导的保护性抗体免疫反应水平,增强免疫保护效果.

关键词：禽流感 H5亚型 DNA疫苗免疫保护密码子优化

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表达载体的优化显著增强H5亚型禽流感DNA疫苗免疫保护效果

表达载体的优化显著增强H5亚型禽流感DNA疫苗免疫保护效果

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中国畜牧兽医学会2004年学术年会暨第五届全国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会

作者：姜永萍张洪波李呈军张芳芳步志高于康震陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室(黑龙江哈尔滨) 农业部畜牧兽医总站(北京)

CAGGS含鸡β-actin启动子和CMV增强子,是一种高效真核表达载体.将A/Goose/GuangDong/1/96(H5N1)[GD/1/96(H5N1)]的HA基因插入pCAGGS,构建了DNA疫苗质粒pCAGGHA,将pCAGGHA和表达GD/1/96(H5N1)HA基因的质粒pCIHA分别转染293T细胞,间接免疫荧光检测转染后24-48小时293T细胞中瞬时表达的HA抗原蛋白,Western-blot证实上述2种表达质粒均可正确表达H5亚型HA抗原蛋白,结果载体pCAGGS表达水平显著高于载体pCI.为进一步评估不同表达载体对H5亚型禽流感DNA疫苗免疫效果的影响,DNA疫苗质粒pCIHA及pCAGGHA分别以100μg和10μg剂量一次免疫3周龄SPF鸡,4周后分别用100LD<,50>的HPAIV GD/1/96(H5N1)鼻腔途径进行攻击.结果,100μg pCAGGHA可形成100﹪的免疫保护,100μg pCIHA可形成50﹪的免疫保护;10μg pCAGGHA可形成对免疫鸡100﹪的免疫保护,而10μg pCIHA则基本不能形成免疫保护;pCAGGHA诱导的HI抗体水平远远高于pCIHA.试验结果表明,鸡β-actin启动子表达载体pCAGGS可显著提高HA基因体外表达水平和H5亚型禽流感DNA疫苗诱导的保护性抗体免疫反应水平,增强免疫保护效果.

关键词：禽流感 H5亚型 DNA疫苗免疫保护表达载体

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H5亚型禽流感重组鸡痘病毒活载体疫苗对商品鸡的免疫效力

H5亚型禽流感重组鸡痘病毒活载体疫苗对商品鸡的免疫效力

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中国畜牧兽医学会禽病学分会第12次学术研讨会

作者：乔传玲井波于康震田国彬陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室及兽医生物技术国家重点实验室(哈尔滨) 全国畜牧兽医总站(北京)

将共表达禽流感病毒(AIV)HA与NA基因的重组鸡痘病毒rFPV-HA-NA在鸡胚成纤维细胞(CEF)上增殖,制备成冻干疫苗,经翅下刺种途径接种商品鸡,免疫3周后用100LD的高致病力禽流感病毒(HPAIV)A/Goose/Guangdong/1/96(H5N1)进行攻击.结果重组鸡... 详细信息

将共表达禽流感病毒(AIV)HA与NA基因的重组鸡痘病毒rFPV-HA-NA在鸡胚成纤维细胞(CEF)上增殖,制备成冻干疫苗,经翅下刺种途径接种商品鸡,免疫3周后用100LD<,50>的高致病力禽流感病毒(HPAIV)A/Goose/Guangdong/1/96(H5N1)进行攻击.结果重组鸡痘病毒疫苗免疫鸡后诱导产生了高水平的HI抗体,能够完全抵抗H5N1亚型病毒的致死性攻击,对雏鸡禽流感母源抗体的消长情况进行了检测,结果母源抗体HI效价的峰值在7日龄时出现,而后随雏鸡日龄的增大而下降,在35日龄时趋于消失.雏鸡母源抗体对重组疫苗的免疫效力有一定的干扰.

关键词：禽流感重组鸡痘病毒疫苗免疫效力 H5亚型

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中国H5亚型禽流感病毒2004年分离株HA基因的序列分析

中国H5亚型禽流感病毒2004年分离株HA基因的序列分析

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中国畜牧兽医学会禽病学分会第12次学术研讨会

作者：邓国华王劭余丹丹李雁冰田国彬杨汉春于康震陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室(哈尔滨) 中国农业大学动物医学院

本研究对中国2004年发生高致病性禽流感疫情的38个疫点的H5N1亚型病毒分离株进行HA基因序列测定和分析发现,HA基因的裂解位点有部分毒株比其他毒株少1了一个碱性氨基酸,其编码的可能糖基化位点有较大差异,除了有7个共有的糖基化位点以外... 详细信息

本研究对中国2004年发生高致病性禽流感疫情的38个疫点的H5N1亚型病毒分离株进行HA基因序列测定和分析发现,HA基因的裂解位点有部分毒株比其他毒株少1了一个碱性氨基酸,其编码的可能糖基化位点有较大差异,除了有7个共有的糖基化位点以外,还有16个毒株在170位多了一个潜在的糖基化位点,DK/HuNYY/7004毒株在156多了一个糖基化位点,但是所有毒株的受体结合位点完全一致,而在受体结合部的两侧有一定的差异.从遗传进化树上来看,我国2004年H5亚型禽流感病毒分离株的HA基因和我国早期毒株CKNX/48/02,DKHUN/40/02和DKZJ/52/00有较为密切关系,而与香港以及东南亚国家毒株的基因有着较大的差异.

关键词： H5N1禽流感病毒序列分析分子演化分离鉴定

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H1N1亚型猪流感病毒中国分离株血凝素基因分子演化的研究

H1N1亚型猪流感病毒中国分离株血凝素基因分子演化的研究

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第六次人畜共患病学术交流会

作者：陈君彦李海燕申之义陈化兰于康震毕英佐中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室(哈尔滨) 内蒙古农业大学动物科学与医学学院(呼和浩特) 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室(哈尔滨) 内蒙古农业大学动物科学与医学学院(呼和浩特) 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室(哈尔滨) 全国畜牧兽医总站(北京) 华南农业大学动物科学学院(广州)

本研究对2001年中国华南及东北地区的15株H1N1亚型猪流感病毒(SIV)分离株的血凝素(HA)基因进行了序列测定和分析,并绘制了进化树.研究结果表明,15株H1N1 SIV的HA基因核甘酸全长为1778bp,共编码566个氨基酸;而且,15株H1N1亚型SIV的HA1蛋... 详细信息

本研究对2001年中国华南及东北地区的15株H1N1亚型猪流感病毒(SIV)分离株的血凝素(HA)基因进行了序列测定和分析,并绘制了进化树.研究结果表明,15株H1N1 SIV的HA基因核甘酸全长为1778bp,共编码566个氨基酸;而且,15株H1N1亚型SIV的HA1蛋白在10、11、23、87、287位都存在高度保守的糖基化位点,此外,在276位多了一个"-NTT-"糖基化位点,与参考毒株SW/IW/930/01一致,这可能是近期H1N1亚型SIV的一个分子特征.本研究进一步发现,15株H1N1亚型SIV的HA基因切割位点氨基酸组成为IPSIQSR↓G,具有非高致病力毒株分子特征;而其受体结合位点在HA蛋白上第226位是Q,第228位为G,可能具有感染禽的潜力.经同源性比较,15株H1N1亚型SIV的HA基因与古典型H1N1猪谱系中的WIS/4754/94的同源性相对最高,核苷酸和氨基酸序列同源性分别达到95.7~96.1﹪和96.5~97.2﹪.由同源性比较结果和进化树分析可见,15株H1N1亚型SIV的HA基因皆属于古典型的H1N1猪谱系.

关键词：猪流感病毒血凝素序列分析分子演化正粘病毒科流感病毒

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基因芯片的研究进展

基因芯片的研究进展

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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会成立20周年庆典暨第十次学术研讨会

作者：刘丽玲王秀荣陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室

基因芯片(gene chip)又称DNA微阵列(DNA microarray),DNA芯片。它是将许多特定的寡核苷酸片段或基因片段作为探针,有规律地固定于支持物上,然后与待测的荧光素或放射性同位素标记的核酸样品按碱基配对原理进行杂交,再通过激光共聚焦荧... 详细信息

基因芯片(gene chip)又称DNA微阵列(DNA microarray),DNA芯片。它是将许多特定的寡核苷酸片段或基因片段作为探针,有规律地固定于支持物上,然后与待测的荧光素或放射性同位素标记的核酸样品按碱基配对原理进行杂交,再通过激光共聚焦荧光检测系统等对芯片进行扫描,对每一探针上的荧

关键词：寡核苷酸阵列基因芯片基因表达图谱人类基因组杂交信号酿酒酵母

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DNA微阵列与基因表达研究概况

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动物医学进展 2003年第6期24卷 15-18页

作者：刘丽玲王秀荣陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

DNA微阵列技术是 90年代兴起的一种对成百上千甚至上万个基因同时进行检测的新技术 ,它具有高通量和并行化的特点 ,广泛应用于基因表达、预测基因功能、检测基因突变和多态性分析、发现新药物和药物靶器官以及疫苗设计等方面。文章对 DN... 详细信息

DNA微阵列技术是 90年代兴起的一种对成百上千甚至上万个基因同时进行检测的新技术 ,它具有高通量和并行化的特点 ,广泛应用于基因表达、预测基因功能、检测基因突变和多态性分析、发现新药物和药物靶器官以及疫苗设计等方面。文章对 DNA微阵列的基本原理、DNA微阵列制备技术、杂交信号检测以及数据分析。 c DNA微阵列与细胞周期相关基因表达、细菌基因表达、病毒基因表达、肿瘤基因表达进行了概述。

关键词： DNA微阵列基因表达技术原理杂交信号检测基因功能基因突变多态性分析

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鸡痘疫苗对禽流感重组鸡痘病毒疫苗免疫效力的影响

鸡痘疫苗对禽流感重组鸡痘病毒疫苗免疫效力的影响

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中国微生物学会兽医微生物专委会学术年会中国畜牧兽医学会生物制品学分会第九次学术研讨会

作者：乔传玲李呈军李泽君田国彬陈化兰于康震中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室及兽医生物技术国家重点实验室(哈尔滨)

禽流感病毒(AIV)HA和NA双基因重组鸡痘病毒rFPV-HA-NA能够诱导鸡本产生100％抵抗H5N1高致病力禽流感病毒(HPAIV)的攻击.而当鸡群已进行鸡痘疫苗免疫或者感染了鸡痘病毒的情况下,此重组疫苗的免疫效力如何?还不为人知,本研究首先对SPF试... 详细信息

禽流感病毒(AIV)HA和NA双基因重组鸡痘病毒rFPV-HA-NA能够诱导鸡本产生100％抵抗H5N1高致病力禽流感病毒(HPAIV)的攻击.而当鸡群已进行鸡痘疫苗免疫或者感染了鸡痘病毒的情况下,此重组疫苗的免疫效力如何?还不为人知,本研究首先对SPF试验鸡接种商品化的鸡痘弱毒疫苗,既而在免疫后的不同间隔时间接种重组疫苗,免疫后检测鸡群的HI抗体水平,同时用100LD<,50>的HPAIV H5N1进行攻击.结果两种疫苗同时接种和间隔在内周(或以上)时,鸡痘疫苗对重组苗的免疫效力不构成影响,对禽流感的保护仍为100％,而两次免疫的间隔时间在职、2、3周时,重组疫苗的免疫保护效力则受到不同程度的影响.

关键词：鸡痘疫苗禽流感重组鸡痘病毒疫苗免疫效力 DNA重组

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基因芯片的研究进展

基因芯片的研究进展

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中国畜牧兽医学会家畜传染病分会第十次学术研讨会

作者：刘丽玲王秀荣陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室(哈尔滨)

阐述了基因芯片技术的基本原理,介绍了基因芯片在制备技术、杂交信号检测和数据分析方面的技术进展,并对CDNA芯片在基因表达中的应用进行了探讨.

关键词：基因芯片基因表达 CDNA芯片基因功能

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不同免疫途径及剂量接种禽流感重组禽痘病毒疫苗免疫效力的研究

不同免疫途径及剂量接种禽流感重组禽痘病毒疫苗免疫效力的研究

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中国微生物学会兽医微生物专委会学术年会中国畜牧兽医学会生物制品学分会第九次学术研讨会

作者：乔传玲李呈军刘志军李雁冰于康震陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室及兽医生物技术国家重点实验室(哈尔滨)

表达禽流感病毒(AIV)H5 HA和N1 NA基因的重组禽痘病毒rFPV-HA-NA能够诱导鸡体产生对H5N1和H7N1高致病力禽流感病毒(HPAIV)攻击的100％保护力.本实验将不同剂量的重组疫苗分别经翅下刺种、肌肉注射、皮下注射、点眼及滴箅途径接种种周龄... 详细信息

表达禽流感病毒(AIV)H5 HA和N1 NA基因的重组禽痘病毒rFPV-HA-NA能够诱导鸡体产生对H5N1和H7N1高致病力禽流感病毒(HPAIV)攻击的100％保护力.本实验将不同剂量的重组疫苗分别经翅下刺种、肌肉注射、皮下注射、点眼及滴箅途径接种种周龄SPF鸡.结果此疫苗经翅下刺种、肌肉和皮下注射途径接种,能够诱导产生血凝抑制(HI)抗体;用100LD<,50>的HPAIV A/Goose/Guangdong/1/96(H5N1)毒株攻击后,免疫鸡无一发病和死亡,疫苗的保护率为100％.点眼和滴箅途径免疫时,大剂量接种能够诱导一下的抗体生成,攻毒后的保护率分别为83.3％、66.7％;而小剂量接种,则不能够产生免疫反应,攻毒后疫苗的保护率为0.表明重组禽痘病毒疫苗经翅膀刺种、股份注射和皮下注射才能够诱导机体产生高效的免疫力.

关键词：禽流感重组禽痘病毒疫苗接种途径剂量免疫效力

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