检索结果-内蒙古大学图书馆

中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第八次学术研讨会

作者：蔡绪禹康晓平刘洪李裕昌孙恩成王凌凤杨涛刘霓红步志高李文京杨银辉吴东来中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物/生物安全国家重点实验室中国动物疫病预防控制中心

本研究建立了能同时检测5种人兽共患脑炎类病毒的多重PCR方法,包括流行性乙型脑炎病毒(JEV)、森林脑炎病毒(TBEV)、东方马脑炎病毒(EEEV)、西方马脑炎病毒(WEEV)和基孔肯雅病毒(CHIKV)。根据GenBank登录的病毒基因组序列设计PCR特异引物... 详细信息

本研究建立了能同时检测5种人兽共患脑炎类病毒的多重PCR方法,包括流行性乙型脑炎病毒(JEV)、森林脑炎病毒(TBEV)、东方马脑炎病毒(EEEV)、西方马脑炎病毒(WEEV)和基孔肯雅病毒(CHIKV)。根据GenBank登录的病毒基因组序列设计PCR特异引物,通过优化引物组合及PCR反应条件,成功建立了针对

关键词：人兽共患病 PCR 检测方法

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泛素基因介导下的猪繁殖与呼吸综合征病毒M基因对小鼠的免疫试验

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微生物学报 2009年第6期49卷 799-806页

作者：张维军童铁钢白宇王群徐树兰孙庆歌田野杨涛童光志吴东来中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室哈尔滨150001 中国农业科学院上海兽医研究所上海200241

【目的】获得猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome virus,PRRSV)M蛋白基因及其与泛素(Ubiquitin,Ub)基因融合的真核表达质粒,并进一步研究Ub对M基因免疫效果的影响。【方法】利用RT-PCR技术以PRRSV C... 详细信息

【目的】获得猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome virus,PRRSV)M蛋白基因及其与泛素(Ubiquitin,Ub)基因融合的真核表达质粒,并进一步研究Ub对M基因免疫效果的影响。【方法】利用RT-PCR技术以PRRSV CH-1a株和BALB/c小鼠脾脏组织总RNA为模板,分别扩增出PRRSVM蛋白基因与小鼠的Ub基因,利用SOE技术将PRRSVM基因与小鼠Ub基因进行融合,最终构建真核表达质粒pVAX1-M与pVAX1-U-M。以两种真核表达质粒DNA肌肉免疫BALB/c小鼠后,分别检测体液免疫反应与细胞免疫反应,比较M单基因与Ub-M融合基因DNA免疫所诱生的免疫应答强度【结果】IFA试验表明,pVAX1-M与pVAX1-U-M均能BHK-21细胞内成功表达目的基因;两种重组质粒免疫小鼠后均可诱生PRRSVELISA抗体与细胞免疫反应,但是pVAX1-U-M诱导的细胞免疫反应明显高于pVAX1-M,差异显著(P<0.05);而其诱导的抗体水平明显低于pVAX1-M,二者差异也显著(P<0.05)。【结论】泛素在一定程度上可以促进PRRSVM基因诱导细胞免疫反应,但对体液免疫未见到同样作用。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒 M基因泛素体液免疫细胞免疫 DNA疫苗

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纳米Cu^2＋／TiO2抗菌膜对禽流感病毒(H9N2)的灭活效应

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功能材料 2009年第8期40卷 1403-1406页

作者：姜建芳崔海信杨涛蔡鸿昌吴东来中国农业科学院农业环境与可持续发展研究所农业部农业环境与气候变化重点实验室北京100081 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

利用病毒滴度测定和MDCK细胞电镜观察法,初步探讨了在365nm的黑光灯(UV)照射下,纳米Cu2+/TiO2抗菌膜对禽流感病毒(H9N2)的光催化灭活效应,并分别考察了UV强度、UV照射时间以及H9N2病毒量对H9N2病毒光催化灭活效应的影响。实验结果表明,... 详细信息

利用病毒滴度测定和MDCK细胞电镜观察法,初步探讨了在365nm的黑光灯(UV)照射下,纳米Cu2+/TiO2抗菌膜对禽流感病毒(H9N2)的光催化灭活效应,并分别考察了UV强度、UV照射时间以及H9N2病毒量对H9N2病毒光催化灭活效应的影响。实验结果表明,在365nm黑光灯的照射下,纳米Cu2+/TiO2抗菌膜对H9N2病毒具有显著的灭活效应,在UV强度为0.5mW/cm2、UV照射时间为2.5h、病毒量为0.1ml时,H9N2病毒的灭活率达到了100%。研究结果表明,纳米Cu2+/TiO2抗菌膜在抑制禽流感(H9N2)病毒在环境媒介中的扩散与传播方面有潜在的应用价值。

关键词： Cu^2+/TiO2 禽流感病毒(H9N2) 光催化灭活效应

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含禽源启动子的禽流感病毒核蛋白表达载体的构建及其免疫原性的检测

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农业生物技术学报 2009年第1期17卷 7-11页

作者：王群刘光亮肖一红童铁钢白宇张维军徐树兰吴东来农业部兽医公共卫生重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所

为了研究禽流感病毒核蛋白(nucleoprotein,NP)在鸡体内所引起的免疫反应,将其NP基因从重组质粒pVAX-NP上酶切后亚克隆至含禽源启动子的真核表达载体pCAGGS中,经筛选鉴定后获得重组子pCAGGS-NP,将鉴定正确的阳性重组子体外转染真核细胞,... 详细信息

为了研究禽流感病毒核蛋白(nucleoprotein,NP)在鸡体内所引起的免疫反应,将其NP基因从重组质粒pVAX-NP上酶切后亚克隆至含禽源启动子的真核表达载体pCAGGS中,经筛选鉴定后获得重组子pCAGGS-NP,将鉴定正确的阳性重组子体外转染真核细胞,利用间接免疫荧光法检测目的基因的瞬时表达;采用腿部肌肉注射途径将重组子免疫SPF鸡,利用ELISA检测免疫后血清抗NP蛋白抗体效价。结果表明,该重组子无论在体外还是体内均能正确表达禽流感NP蛋白,且所表达的蛋白均具有良好的免疫原性。

关键词：禽流感核蛋白真核表达载体血清抗体

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重组马白细胞介素-18生物学活性的测定及单克隆抗体中和活性鉴定

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农业生物技术学报 2009年第3期17卷 370-374页

作者：童铁钢白宇王群张维军刘光亮徐树兰林燕孙庆歌杨涛吴东来中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部兽医公共卫生重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室

应用实时荧光定量RT-PCR方法评价了大肠杆菌表达的重组马白细胞介素-18(rEIL-18)刺激马外周血单核细胞(PBMCs)产生马IFN-γ(EIFN-γ)的活性。在重组人IL-12(rhIL-12)的协同作用下,rEIL-18在体外刺激马PBMCs产生EIFN-γ的效应是阴性对照... 详细信息

应用实时荧光定量RT-PCR方法评价了大肠杆菌表达的重组马白细胞介素-18(rEIL-18)刺激马外周血单核细胞(PBMCs)产生马IFN-γ(EIFN-γ)的活性。在重组人IL-12(rhIL-12)的协同作用下,rEIL-18在体外刺激马PBMCs产生EIFN-γ的效应是阴性对照的20倍,并且在一定rhIL-12浓度的条件下,rEIL-18在体外诱导马PBMCs产生EIFN-γ的能力呈一定的剂量依赖性。此外,评价了制备的9株抗rEIL-18单克隆抗体中和rEIL-18的生物学活性的能力,证实其中1株可中和rEIL-18的生物学活性,并且呈一定的剂量依赖性。

关键词：马白细胞介素-18 生物学活性单克隆抗体

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西尼罗病毒NS1基因的原核表达与抗原性鉴定

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中国预防兽医学报 2009年第8期31卷 592-595页

作者：马健男杨涛王群张维军徐青元田野林燕宋红梅步志高吴东来中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

为进行西尼罗病毒(WNV)NY99株NS1蛋白的免疫学研究,通过PCR方法扩增WNV NY99株NS1基因,并将其克隆至原核表达载体pMAL-c2X上,构建出重组表达质粒pc2X-NS1,经IPTG诱导得到可溶性的麦芽糖结合蛋白(MBP)-NS1融合蛋白(MBP-NS1),其分子质量约... 详细信息

为进行西尼罗病毒(WNV)NY99株NS1蛋白的免疫学研究,通过PCR方法扩增WNV NY99株NS1基因,并将其克隆至原核表达载体pMAL-c2X上,构建出重组表达质粒pc2X-NS1,经IPTG诱导得到可溶性的麦芽糖结合蛋白(MBP)-NS1融合蛋白(MBP-NS1),其分子质量约为90ku,约占可溶性菌体蛋白质量的50%。利用直链淀粉树脂柱对MBP-NS1纯化后的重组蛋白的纯度达到60%,western blot和间接ELISA检测证明纯化的MBP-NS1具有良好的抗原性和特异性,为进一步开展关于WNV NS1蛋白的研究奠定了基础。

关键词：西尼罗病毒 NS1基因原核表达

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鸡白细胞介素2(IL-2)DNA-壳聚糖纳米粒的制备及体外转染

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农业生物技术学报 2009年第4期17卷 547-553页

作者：张文龙殷喆刘霓红杨涛刘胜旺步志高王君伟吴东来农业部兽医公共卫生重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所东北农业大学动物医学学院

构建了携带鸡白细胞介素2(IL-2)编码基因的重组真核表达质粒,通过复凝聚法制备了含有该重组真核表达质粒的壳聚糖纳米粒子。对制备的IL-2DNA-壳聚糖纳米粒子(IL-2DNA-chitosan nanoparticles)进行了表征。纳米粒子呈球形,粒径分布范围... 详细信息

构建了携带鸡白细胞介素2(IL-2)编码基因的重组真核表达质粒,通过复凝聚法制备了含有该重组真核表达质粒的壳聚糖纳米粒子。对制备的IL-2DNA-壳聚糖纳米粒子(IL-2DNA-chitosan nanoparticles)进行了表征。纳米粒子呈球形,粒径分布范围为50～500nm,表面带正电,电势为+17.8mV,DNA质量占纳米粒子总质量的40.2%。DNA酶保护性、稳定性和体外释放试验证明,制备的纳米粒子在微酸性(pH6.0)和微碱性(pH7.4)环境中稳定性较高,可保护携带的DNA分子不被0.6～0.8U/mL DNA酶的降解。用制备的纳米粒子转染Df-1细胞系,间接免疫荧光检测结果证明,该纳米粒子可携带质粒DNA进入细胞,使携带的外源基因获得表达。流式细胞术检测证明,纳米粒子的转染效率为0.2%,与裸DNA转染对照组相比较,包封入壳聚糖纳米粒子中可提高DNA的转染效率。

关键词：壳聚糖纳米粒子表征转染

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表达小反刍兽疫H蛋白的重组山羊痘病毒疫苗

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生物工程学报 2009年第4期25卷 496-502页

作者：陈伟业曲林茂胡森胡倩倩张倩支海兵黄克和步志高中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室哈尔滨150001 南京农业大学动物医学院南京210095 中国兽医药品监察所北京100081

本研究旨在构建表达小反刍兽疫H蛋白的重组山羊痘病毒,并评价其免疫效力。利用筛选基因gpt和eGFP并结合空斑技术,纯化筛选了重组小反刍兽疫H基因的重组山羊痘病毒(rGPV-PPRV-H),经过PCR鉴定重组病毒已纯化。免疫荧光和蛋白印迹都表明重... 详细信息

本研究旨在构建表达小反刍兽疫H蛋白的重组山羊痘病毒,并评价其免疫效力。利用筛选基因gpt和eGFP并结合空斑技术,纯化筛选了重组小反刍兽疫H基因的重组山羊痘病毒(rGPV-PPRV-H),经过PCR鉴定重组病毒已纯化。免疫荧光和蛋白印迹都表明重组病毒能够感染绵羊羔羊睾丸细胞表达小反刍兽疫H蛋白。以2×106PFU的rGPV-PPRV-H皮内注射免疫山羊6只,并于首次免疫后28d以相同剂量进行二次免疫。免疫后采血分离血清进行病毒中和试验,结果表明,一次免疫后21d,山羊痘病毒中和抗体效价依次为40、80、≥80、≥80、40、≥80,和小反刍兽疫病毒中和抗体效价全部转阳依次为80、80、80、80、40、40、10;二次免疫后14d,山羊痘病毒中和抗体效价抗体全部大于或等于80,小反刍兽疫病毒中和抗体效价依次为≥80、80、≥80、80、80、40,应该具有对山羊痘病毒和小反刍兽疫病毒强毒攻击的完全免疫保护作用。本研究为小反刍兽疫重组山羊痘疫苗的产业化提供了参考。

关键词：重组疫苗小反刍兽疫山羊痘病毒载体中和抗体

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流产布氏杆菌S19突变株构建及在小鼠感染模型中的免疫保护评估

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中国预防兽医学报 2009年第11期31卷 887-891,913页

作者：郑孝辉胡森王加兰刘林涛高红霞步志高东北农业大学黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

通过构建标记疫苗株来解决流产布氏杆菌(***)鉴别诊断方面的缺陷,本研究以bp26基因作为重组靶位点,S19为亲本,利用bp26基因ORF外侧序列作为同源重组序列,卡那霉素抗性基因(Kanr)为抗性筛选标记,通过双交叉重组筛选获得bp26基因缺失突变... 详细信息

通过构建标记疫苗株来解决流产布氏杆菌(***)鉴别诊断方面的缺陷,本研究以bp26基因作为重组靶位点,S19为亲本,利用bp26基因ORF外侧序列作为同源重组序列,卡那霉素抗性基因(Kanr)为抗性筛选标记,通过双交叉重组筛选获得bp26基因缺失突变的重组S19株,命名为S19-△26。小鼠感染结果表明,突变株S19-△26的残留毒力与亲本株S19相比较没有发生明显改变,康复时间约为15周,突变株S19-△26、亲本株S19和***强毒株S544接种小鼠后的第3周能检测出"O"抗原的特异性抗体,而第6周开始S19和S544接种小鼠BP26特异性抗体明显升高,S19-△26接种的小鼠一直没检测到BP26特异性抗体。小鼠免疫保护试验显示,脾脏分离CFU数比空白对照要低3log10,S544攻击后脾脏细菌分离数表明突变株具有与亲本疫苗株免疫保护性无明显差异。结果表明,S19-△26免疫能够通过血清学方法与野生型***感染后的免疫反应相区别,具备作为标记疫苗的潜力。

关键词： S19-△26 S19 小鼠模型

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光滑型布鲁杆菌抗体竞争ELISA检测方法的建立

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中国兽医科学 2009年第9期39卷 803-809页

作者：王加兰胡森高红霞郑孝辉步志高中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学黑龙江哈尔滨150030

用提纯的布鲁杆菌疫苗株M5-90光滑型脂多糖(S-LPS)作为包被抗原,以针对S-LPS C表位的单抗16C5为竞争抗体,建立了检测光滑型布鲁杆菌血清抗体的cELISA方法。通过对临床507份牛血清样本进行检测,结果经统计分析表明,cELISA与RBT和IDEXX公... 详细信息

用提纯的布鲁杆菌疫苗株M5-90光滑型脂多糖(S-LPS)作为包被抗原,以针对S-LPS C表位的单抗16C5为竞争抗体,建立了检测光滑型布鲁杆菌血清抗体的cELISA方法。通过对临床507份牛血清样本进行检测,结果经统计分析表明,cELISA与RBT和IDEXX公司的iELISA试剂盒符合率分别为84.7%和91.2%。其中142份样品与Svanova公司的cELISA试剂盒和黑龙江省动物监察所提供的iELISA试剂盒的符合率分别为97.2%和94.4%。κ统计显示,该cELISA方法与RBTI、DEXX公司的iELISA试剂盒、Svanova公司的cELISA试剂盒和黑龙江省动物监察所提供的iELISA试剂盒的κ值均大于0.5,符合率很高。该cELISA方法为布鲁菌病的检测提供了一种有效的血清学方法,并且能够有效地排除常见的革兰阴性菌引起的假阳性结果。

关键词：布鲁杆菌竞争酶联免疫吸附试验单克隆抗体

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