检索结果-内蒙古大学图书馆

黑龙江畜牧兽医 2010年第11期 10-12页

作者：井波李呈军陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001 塔里木大学动物科学学院新疆阿拉尔843300 塔里木畜牧科技兵团重点实验室新疆阿拉尔843300

为了构建重组禽流感病毒,试验选取具有代表性的禽流感毒株A/chicken/Shanghai/10/01(H9N2),通过RNA提取和RT-PCR获取HA、NA完整基因,并将其克隆至经SapⅠ酶切、Klenow(大片段)处理、小牛碱性磷酸酶(CIAP)处理后的载体质粒pBD中,构建pBD... 详细信息

为了构建重组禽流感病毒,试验选取具有代表性的禽流感毒株A/chicken/Shanghai/10/01(H9N2),通过RNA提取和RT-PCR获取HA、NA完整基因,并将其克隆至经SapⅠ酶切、Klenow(大片段)处理、小牛碱性磷酸酶(CIAP)处理后的载体质粒pBD中,构建pBD-HA和pBD-NA质粒;将克隆产物分别进行EcoRⅠ+BamHⅠ(pBD-HA)和EcoRⅠ+NotⅠ(pBD-NA)双酶切鉴定及序列测定。结果表明:所克隆的基因大小和序列均与理论值相符,说明感染性克隆构建成功。

关键词：反向基因操作技术 H9N2亚型感染性克隆

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流行性乙型脑炎病毒E蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

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中国兽医杂志 2010年第1期46卷 3-5页

作者：赵付荣华荣虹王斌陈娜莎阿合买提.买买提步志高新疆农业大学动物医学院新疆乌鲁木齐830052 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部兽医公共卫生重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

流行性乙型脑炎病毒(JEV)是一种严重危害人畜健康的虫媒病毒。表面囊膜蛋白(E蛋白)是该病毒的主要结构蛋白。本研究利用原核表达的乙型脑炎病毒SA14-14-2株结构蛋白E蛋白作为免疫原,免疫6周龄BALB/c小鼠,采用淋巴细胞杂交瘤技术进行融合... 详细信息

流行性乙型脑炎病毒(JEV)是一种严重危害人畜健康的虫媒病毒。表面囊膜蛋白(E蛋白)是该病毒的主要结构蛋白。本研究利用原核表达的乙型脑炎病毒SA14-14-2株结构蛋白E蛋白作为免疫原,免疫6周龄BALB/c小鼠,采用淋巴细胞杂交瘤技术进行融合,经有限稀释法获得1株特异性针对JEV E蛋白的杂交瘤细胞,命名为5D4,经测定5D4单抗亚类属于IgG2a,轻链为κ链。经Western blot证实所得杂交瘤细胞分泌的抗体可特异地与JEV E蛋白结合。结果表明,所制备的抗JEV E蛋白的单抗对病原检测具有很高的特异性,为JEV准确快速的病原诊断和JEV感染相关的基础性研究提供了物质基础。

关键词：乙型脑炎病毒 E蛋白单克隆抗体

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猪流感病毒河南株的分离鉴定和生物学特性

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华北农学报 2010年第4期25卷 107-110页

作者：赵朴郑玉姝贾贝贝刘丽艳刘兴友李海燕河南科技学院动物科学学院河南新乡453003 动物疫病和残留物防控河南省高校工程技术研究中心河南新乡453003 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所、兽医生物技术国家重点实验室、农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

从河南省有呼吸道症状的5个不同猪场采集棉拭子和肺组织样品。样品处理后,通过尿囊腔途径接种10日龄SPF鸡胚。获得3株病毒,经血凝和血凝抑制试验鉴定,为H3N2亚型流感病毒,并对其部分生物学特性进行了研究。结果表明,其半数鸡胚感染量(EI... 详细信息

从河南省有呼吸道症状的5个不同猪场采集棉拭子和肺组织样品。样品处理后,通过尿囊腔途径接种10日龄SPF鸡胚。获得3株病毒,经血凝和血凝抑制试验鉴定,为H3N2亚型流感病毒,并对其部分生物学特性进行了研究。结果表明,其半数鸡胚感染量(EID50)分别是0-9.56/0.2mL,10-8.56/0.2mL和10-8.44/0.2mL,对小白鼠的半数致死量(LD50)分别是10-1.56/0.1mL,10-1.45/0.1mL和10-1.50/0.1mL;它们的血凝素对热不稳定,能凝集1%马、牛、驴、猪、绵羊、鸡、兔、豚鼠、小白鼠及人O型血的红细胞。这为了解河南猪群中流行的流感病毒奠定了基础。

关键词：猪流感病毒分离鉴定生物学特性

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本地毛形线虫49 ku排泄分泌蛋白基因的克隆及序列分析

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动物医学进展 2010年第10期31卷 68-71页

作者：郑宝亮边传周王秀荣宋铭忻郑州牧业工程高等专科学校河南郑州450011 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030

为了获得本地毛形线虫(Trichinella nativa)49 ku ES蛋白的结构基因,用Trizol提取***肌幼虫的总RNA,用RT-PCR方法扩增出了编码***49 ku排泄分泌蛋白的结构基因。将PCR产物与T载体连接并经过大肠埃希菌增殖后送检测序。序列测定表明,目... 详细信息

为了获得本地毛形线虫(Trichinella nativa)49 ku ES蛋白的结构基因,用Trizol提取***肌幼虫的总RNA,用RT-PCR方法扩增出了编码***49 ku排泄分泌蛋白的结构基因。将PCR产物与T载体连接并经过大肠埃希菌增殖后送检测序。序列测定表明,目的基因TNPG长度为951bp,核苷酸序列同已发表的***相应的序列P49同源性为98.63%,所推导的氨基酸序列同源性为99.05%。为***49 ku ES蛋白结构基因的进一步研究打下基础。

关键词：本地毛形线虫旋毛形线虫 49ku排泄分泌蛋白基因序列

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AA肉鸡免疫禽流感油乳剂灭活疫苗细胞免疫应答的变化

AA肉鸡免疫禽流感油乳剂灭活疫苗细胞免疫应答的变化

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第二届中国黄羽肉鸡行业发展大会

作者：王彦妮曾显营田国彬苏文陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物国家重点开放实验室

为了解肉鸡生长期内免疫前后的细胞免疫反应,本试验采用CD3/CD4/CD8三色流式细胞术、MTT法和Griess法依次检测了AA肉鸡免疫禽流感灭活疫苗和不免疫状态下外周血、胸腺、脾脏中T淋巴细胞及其亚群的相对含量、外周血中T淋巴细胞对PHA-P的... 详细信息

为了解肉鸡生长期内免疫前后的细胞免疫反应,本试验采用CD3/CD4/CD8三色流式细胞术、MTT法和Griess法依次检测了AA肉鸡免疫禽流感灭活疫苗和不免疫状态下外周血、胸腺、脾脏中T淋巴细胞及其亚群的相对含量、外周血中T淋巴细胞对PHA-P的增殖反应能力和诱导巨噬细胞NO分泌量的变化。结果表明:不免疫状态下,AA肉鸡外周血CD4+、CD8+、CD3+T淋巴细胞相对百分含量在7日龄左右时均最低,脾脏中CD4+T淋巴细胞相对百分含量在整个试验期一直处于下降状态,免疫后外周血、脾脏和胸腺中CD4+、CD8+、CD3+T淋巴细胞相对百分含量均明显高于未免疫组,且脾脏CD4+T淋巴细胞呈阶段性上升状态;各时期SI值和巨噬细胞NO分泌量检测结果表明,免疫组均高于同期对照组(p<0.05)。研究结果还表明:肉鸡在7日龄时体液免疫和细胞免疫水平最低,灭活疫苗也可以激发肉鸡产生较强的细胞免疫反应。

关键词：灭活疫苗 T淋巴细胞亚群流式细胞术 AA肉鸡 MTT法 Griess法

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H7亚型禽流感病毒RT-LAMP快速检测方法的建立

H7亚型禽流感病毒RT-LAMP快速检测方法的建立

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第八次学术研讨会

作者：包红梅王秀荣赵玉辉陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室

根据GenBank中登录的H7亚型禽流感病毒（H7-AIV）血凝素基因序列,设计了一套特异识别HA基因序列中6个不同区段的环介导恒等温扩增（LAMP）引物,并以此套引物建立了一种基于RT-LAMP（逆转录环介导等温核酸扩增）技术的H7亚型禽流感病毒... 详细信息

根据GenBank中登录的H7亚型禽流感病毒（H7-AIV）血凝素基因序列,设计了一套特异识别HA基因序列中6个不同区段的环介导恒等温扩增（LAMP）引物,并以此套引物建立了一种基于RT-LAMP（逆转录环介导等温核酸扩增）技术的H7亚型禽流感病毒诊断方法。结果表明,该方法对H7-AIV RNA的最小检测限为10,灵敏度高于普通一步法RT-PCR 100倍;全部反应可在1.5 h内完成;在反应体系中添加SYBR GREENⅠ染料后,可通过肉眼观察有无荧光直接判定结果。灵敏性及特异性试验证明,该方法灵敏度高、特异性好,能够作为H7亚型禽流感病毒的快速诊断方法。

关键词： H7亚型禽流感病毒逆转录环介导恒等温扩增快速检测

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两湖地区H6亚型禽流感病毒HA及NA的基因序列分析

两湖地区H6亚型禽流感病毒HA及NA的基因序列分析

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第八次学术研讨会

作者：丁晴微齐瑛琳李印施建忠崔鹏飞于杨崔佳莹陈化兰邓国华中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室

2008年～2009年间,哈尔滨兽医研究所动物流感实验室在两湖地区的市场检测过程中分离到了14株H6亚型禽流感病毒,其中H6N2亚型有12株,H6N6亚型有2株。我们对这14株病毒的HA,NA进行序列测定和进化分析。结果发现DK/HN/284/09的HA片段与其... 详细信息

2008年～2009年间,哈尔滨兽医研究所动物流感实验室在两湖地区的市场检测过程中分离到了14株H6亚型禽流感病毒,其中H6N2亚型有12株,H6N6亚型有2株。我们对这14株病毒的HA,NA进行序列测定和进化分析。结果发现DK/HN/284/09的HA片段与其他13株的HA差异很大,达到19.4%～20.2%,其余13株毒同源性在94.2%～99.9%。H6N2亚型间的NA片段的同源性在91.1%～99.9%,差异性比较大。两株H6N6的NA片段同源性为89.5%,差异显著;这些数据表明:不同毒株呈现出明显的时间和地域性差异。与我国周边地区的H6亚型禽流感毒株进行比较发现,只有DK/HN/284/09的HA片段与香港早期的毒株可能有着共同的来源,其余都和香港和韩国等的毒株有着较大的差异性,HA基因的糖基化位点也有所不同,表现出明显的异源性。

关键词：禽流感病毒 H6亚型 HA NA 基因分析

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IAV逃避免疫应答的策略

IAV逃避免疫应答的策略

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第四次猪病防控学术研讨会

作者：赵朴郑玉姝乔传玲贾贝贝刘兴友河南科技学院动物科学学院中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室

A型流感病毒感染是人和多种动物呼吸系统疾病的主要原因,然而不管是IAV引起的季节性流感暴发还是周期性的全球流感大流行,主要归因于IAV逃避宿主免疫反应的策略。越来越多的证据表明IAV已经进化出高超的策略克服宿主的抗病毒信号,如抗... 详细信息

A型流感病毒感染是人和多种动物呼吸系统疾病的主要原因,然而不管是IAV引起的季节性流感暴发还是周期性的全球流感大流行,主要归因于IAV逃避宿主免疫反应的策略。越来越多的证据表明IAV已经进化出高超的策略克服宿主的抗病毒信号,如抗原变异和编码辅助蛋白(NS1和PB1-F2)。深入理解IAV逃避宿主免疫的策略,有助于揭示IAV感染的机制和发现针对IAV的抗病毒药物的靶标。因此,本文综述了IAV逃避抗病毒免疫策略的最新进展。

关键词： A型流感病毒免疫逃避抗原变异 NS1 PB1-F2

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禽流感病毒M2e多表位疫苗的构建和免疫原性检测

禽流感病毒M2e多表位疫苗的构建和免疫原性检测

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新型疫苗研发及基因工程疫苗应用研讨会

作者：刘明张新涛刘春国中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感参考实验室

为进行禽流感病毒M2蛋白胞外功能区M2e表位疫苗的免疫效果,通过PCR技术构建了M2e表位多拷贝串联基因片断,将其克隆到原核表达载体,经酶切鉴定和DNA测序鉴定正确后,获得重组表达质粒pMAL-3M2e。重组质粒转化BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱... 详细信息

为进行禽流感病毒M2蛋白胞外功能区M2e表位疫苗的免疫效果,通过PCR技术构建了M2e表位多拷贝串联基因片断,将其克隆到原核表达载体,经酶切鉴定和DNA测序鉴定正确后,获得重组表达质粒pMAL-3M2e。重组质粒转化BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导后经SDS-PAGE和Western blot鉴定得到与预期值相符的重组融合蛋白。融合蛋白得到高效可溶性表达,表达量约占菌体表达量的60%。间接ELISA表明,通过MBP树脂柱分离纯化的重组蛋白具有较好的免疫原性,该试验为M2e亚单位疫苗研究的进一步开展奠定了基础。

关键词：禽流感病毒 M2e表位疫苗免疫原性

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两湖地区H6亚型禽流感病毒HA及NA的基因序列分析

两湖地区H6亚型禽流感病毒HA及NA的基因序列分析

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第八次学术研讨会

作者：丁睛微齐瑛琳李印施建忠崔鹏飞于杨崔佳莹陈化兰邓国华中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨 150001

08年～2009年间，哈尔滨兽医研究所动物流感实验室在两湖地区的市场检测过程中分离到了14株H6亚型禽流感病毒，其中H6N2亚型有12株，H6N6亚型有2株。我们对这14株病毒的HA，NA进行序列测定和进化分析。结果发现DK/HN/284/09的HA片段与其...

08年～2009年间，哈尔滨兽医研究所动物流感实验室在两湖地区的市场检测过程中分离到了14株H6亚型禽流感病毒，其中H6N2亚型有12株，H6N6亚型有2株。我们对这14株病毒的HA，NA进行序列测定和进化分析。结果发现DK/HN/284/09的HA片段与其他13株的HA差异很大，达到19.4％～20.2％,其余13株毒同源性在94.2％～99.9％。H6N2亚型间的NA片段的同源性在91.1％～99.9％，差异性比较大。两株H6N6的NA片段同源性为89.5％，差异显著;这些数据表明：不同毒株呈现出明显的时间和地域性差异。与我国周边地区的H6亚型禽流感毒株进行比较发现，只有DK/HN/284/09的HA片段与香港早期的毒株可能有着共同的来源，其余都和香港和韩国等的毒株有着较大的差异性，HA基因的糖基化位点也有所不同。表现出明显的异源性。

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