检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2009年第7期31卷 501-504页

作者：王艳丽李俊辉姜永萍夏俊裴磊冉多良陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 新疆农业大学动物医学院新疆乌鲁木齐830052

为研制和开发以禽痘病毒为载体的重组病毒疫苗,本研究构建了禽痘病毒通用转移载体pSY681-gfp-gpt,该载体含有gfp和gpt2种报告基因及背对的痘苗病毒晚期启动子P11和早期启动子P7.5,P11启动gfp和gpt两个基因,P7.5用于启动外源基因,在早期... 详细信息

为研制和开发以禽痘病毒为载体的重组病毒疫苗,本研究构建了禽痘病毒通用转移载体pSY681-gfp-gpt,该载体含有gfp和gpt2种报告基因及背对的痘苗病毒晚期启动子P11和早期启动子P7.5,P11启动gfp和gpt两个基因,P7.5用于启动外源基因,在早期启动子P7.5下游引入NotⅡ和AflⅡ两个酶切位点,用于外源基因的插入。为检测禽痘病毒转移载体pSY681-gfp-gpt的有效性,将H9亚型禽流感病毒A/Chicken/Shanghai/10/01(H9N2)的HA基因插入到该载体中构建转移载体pSY681-gfp-gpt-HA9,将转移载体转染已感染禽痘病毒S-FPV-017的鸡胚成纤维细胞,利用gfp和gpt同时进行双重筛选、数轮蚀斑纯化后获得了重组病毒rFPV-gpt-gfp-HA9,通过PCR、westernblot鉴定,结果证明,获得了能稳定表达H9亚型禽流感病毒HA蛋白的重组禽痘病毒rFPV-gpt-gfp-HA9,为今后重组禽痘病毒活载体疫苗的研制奠定了基础。

关键词：重组禽痘病毒绿色荧光蛋白黄嘌呤鸟嘌呤磷酸转移酶 HA基因

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表达小反刍兽疫H蛋白的重组山羊痘病毒疫苗

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生物工程学报 2009年第4期25卷 496-502页

作者：陈伟业曲林茂胡森胡倩倩张倩支海兵黄克和步志高中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室哈尔滨150001 南京农业大学动物医学院南京210095 中国兽医药品监察所北京100081

本研究旨在构建表达小反刍兽疫H蛋白的重组山羊痘病毒,并评价其免疫效力。利用筛选基因gpt和eGFP并结合空斑技术,纯化筛选了重组小反刍兽疫H基因的重组山羊痘病毒(rGPV-PPRV-H),经过PCR鉴定重组病毒已纯化。免疫荧光和蛋白印迹都表明重... 详细信息

本研究旨在构建表达小反刍兽疫H蛋白的重组山羊痘病毒,并评价其免疫效力。利用筛选基因gpt和eGFP并结合空斑技术,纯化筛选了重组小反刍兽疫H基因的重组山羊痘病毒(rGPV-PPRV-H),经过PCR鉴定重组病毒已纯化。免疫荧光和蛋白印迹都表明重组病毒能够感染绵羊羔羊睾丸细胞表达小反刍兽疫H蛋白。以2×106PFU的rGPV-PPRV-H皮内注射免疫山羊6只,并于首次免疫后28d以相同剂量进行二次免疫。免疫后采血分离血清进行病毒中和试验,结果表明,一次免疫后21d,山羊痘病毒中和抗体效价依次为40、80、≥80、≥80、40、≥80,和小反刍兽疫病毒中和抗体效价全部转阳依次为80、80、80、80、40、40、10;二次免疫后14d,山羊痘病毒中和抗体效价抗体全部大于或等于80,小反刍兽疫病毒中和抗体效价依次为≥80、80、≥80、80、80、40,应该具有对山羊痘病毒和小反刍兽疫病毒强毒攻击的完全免疫保护作用。本研究为小反刍兽疫重组山羊痘疫苗的产业化提供了参考。

关键词：重组疫苗小反刍兽疫山羊痘病毒载体中和抗体

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鸡白细胞介素2(IL-2)DNA-壳聚糖纳米粒的制备及体外转染

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农业生物技术学报 2009年第4期17卷 547-553页

作者：张文龙殷喆刘霓红杨涛刘胜旺步志高王君伟吴东来农业部兽医公共卫生重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所东北农业大学动物医学学院

构建了携带鸡白细胞介素2(IL-2)编码基因的重组真核表达质粒,通过复凝聚法制备了含有该重组真核表达质粒的壳聚糖纳米粒子。对制备的IL-2DNA-壳聚糖纳米粒子(IL-2DNA-chitosan nanoparticles)进行了表征。纳米粒子呈球形,粒径分布范围... 详细信息

构建了携带鸡白细胞介素2(IL-2)编码基因的重组真核表达质粒,通过复凝聚法制备了含有该重组真核表达质粒的壳聚糖纳米粒子。对制备的IL-2DNA-壳聚糖纳米粒子(IL-2DNA-chitosan nanoparticles)进行了表征。纳米粒子呈球形,粒径分布范围为50～500nm,表面带正电,电势为+17.8mV,DNA质量占纳米粒子总质量的40.2%。DNA酶保护性、稳定性和体外释放试验证明,制备的纳米粒子在微酸性(pH6.0)和微碱性(pH7.4)环境中稳定性较高,可保护携带的DNA分子不被0.6～0.8U/mL DNA酶的降解。用制备的纳米粒子转染Df-1细胞系,间接免疫荧光检测结果证明,该纳米粒子可携带质粒DNA进入细胞,使携带的外源基因获得表达。流式细胞术检测证明,纳米粒子的转染效率为0.2%,与裸DNA转染对照组相比较,包封入壳聚糖纳米粒子中可提高DNA的转染效率。

关键词：壳聚糖纳米粒子表征转染

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H1N1亚型猪流感病毒反向遗传操作系统的建立及高产细胞型疫苗株的拯救

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中国农业科学 2009年第5期42卷 1797-1804页

作者：刘大飞刘明刘春国杨涛万春和陈浩齐金龙杜金玲李洪涛孙恩成刘大程中国农业科学院哈尔滨兽医研究所/兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室东北农业大学动物医学院黑龙江八一农垦大学动物科技学院莱阳市城厢兽医站

【目的】建立H1N1亚型猪流感病毒反向遗传学操作系统及拯救出能够在动物传代细胞中高水平复制的H1N1亚型猪流感疫苗株。【方法】利用反向遗传操作技术,对猪流感病毒广东分离株进行拯救。【结果】首次成功拯救出全部片段均来自于亲本株... 详细信息

【目的】建立H1N1亚型猪流感病毒反向遗传学操作系统及拯救出能够在动物传代细胞中高水平复制的H1N1亚型猪流感疫苗株。【方法】利用反向遗传操作技术,对猪流感病毒广东分离株进行拯救。【结果】首次成功拯救出全部片段均来自于亲本株的猪流感病毒rH1N1,并且成功拯救出了具有高度细胞适应性毒株re-LM株,研究结果表明二者均具有良好的遗传稳定性。rH1N1经MDCK细胞连续传代培养后,血凝价最高仅为1:64;而re-LM的血凝价最高可以稳定在1:1024,表明该毒株具有细胞繁殖高产的特性。用该重组病毒制备油乳剂灭活苗免疫2月龄仔猪,首免2周即可检测出HI抗体,平均效价在1:32以上,三免后2周HI抗体平均效价达到1:512,说明其有良好的免疫原性。【结论】H1N1亚型猪流感病毒反向遗传操作系统的成功建立为猪流感病毒致病机理、传播机制及病毒基因功能的研究奠定了基础;重组细胞高产型猪流感病毒株的拯救为H1N1亚型猪流感疫苗的研制开辟了新的途径。

关键词：猪流感 H1N1亚型反向遗传操作技术细胞培养型流感疫苗

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密码子优化的H5亚型流感病毒HA基因重组质粒在哺乳动物细胞中的高效表达及其免疫原性的研究

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自然科学进展 2009年第8期19卷 813-818页

作者：刘春国刘明孙恩成李洪涛杜金玲张新涛石薇琳谢金鑫刘大飞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室农业部动物流感重点开放实验室及国家禽流感参考实验室哈尔滨150001 黑龙江八一农垦大学动物科技学院大庆163319

为了提高流感病毒血凝素(HA)基因的表达量及其免疫原性,按照哺乳动物偏爱密码子将A/Goose/HLJ/QFY/04(H5N1)流感病毒的血凝素基因进行优化改造,然后插入到真核表达载体pCI-neo中,构建了真核表达质粒pCI-opti-HA.将此质粒和含野生HA基因... 详细信息

为了提高流感病毒血凝素(HA)基因的表达量及其免疫原性,按照哺乳动物偏爱密码子将A/Goose/HLJ/QFY/04(H5N1)流感病毒的血凝素基因进行优化改造,然后插入到真核表达载体pCI-neo中,构建了真核表达质粒pCI-opti-HA.将此质粒和含野生HA基因的真核表达质粒pCI-wt-HA分别转染Vero或293T细胞,通过免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)和蛋白免疫印迹(WB)实验比较HA蛋白的表达量.将两种重组质粒免疫Balb/c小鼠,比较两者诱导的抗体产生水平.三次免疫后两周用强毒攻击,通过体温和体重变化评价两种重组质粒的免疫保护效果.IP-MA和WB实验结果表明:密码子优化后,HA蛋白在哺乳动物细胞中的表达水平显著提高.酶联免疫吸附实验(ELISA)结果表明:小鼠免疫后密码子优化的重组质粒诱导的特异性抗体效价较高.攻毒试验结果表明:两种重组质粒均能够提供较好的保护.

关键词： H5亚型流感病毒 HA 密码子优化 DNA疫苗免疫效果

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猪流感病毒HA基因的克隆及杆状病毒转移载体的构建

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生物技术通报 2009年第9期25卷 97-100页

作者：赵朴郑玉姝贾贝贝乔传玲陈化兰刘兴友李海燕河南科技学院动物科学学院新乡453003 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室农业部动物流感重点开放实验室哈尔滨150001

猪流感病毒(swine influenza virus,SIV)不仅给养猪业造成重大经济损失,而且威胁人类健康。血凝素(hemag-glutinin,HA)是SIV囊膜上的重要免疫原,介导病毒吸附和膜融合。针对流感病毒的中和抗体主要以HA靶标阻断受体结合,本研究通过RT-PC... 详细信息

猪流感病毒(swine influenza virus,SIV)不仅给养猪业造成重大经济损失,而且威胁人类健康。血凝素(hemag-glutinin,HA)是SIV囊膜上的重要免疫原,介导病毒吸附和膜融合。针对流感病毒的中和抗体主要以HA靶标阻断受体结合,本研究通过RT-PCR扩增了猪流感病毒A/Swine/Inner Mongolia/547/01(H3N2)的HA基因,并将其克隆入pMD18-T载体。重组pMD18-T经KpnI和PstI酶切后得到的HA基因插入pMelBacA载体的KpnI/PstI位点。PCR和限制性内切酶分析鉴定表明成功构建了pMelBacA-HA转移载体。这为开发HA亚单位疫苗奠定了基础。

关键词：猪流感病毒 HA基因克隆转移载体

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鸭肠炎病毒UL41、UL42基因的克隆与分析

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中国预防兽医学报 2009年第12期31卷 988-990页

作者：陈普成柳金雄曾青华姜永萍田国彬陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点实验室/兽医生物国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 湖南农业大学动物医学院湖南长沙410128

依据GenBank登录的鸭肠炎病毒(DEV)核苷酸序列设计引物,利用长片段PCR技术扩增了DEV基因组UL36与UL43基因之间的未知序列,扩增所得片段长度约为15kb,经EcoRⅤ单酶切,将其中的3.9kb片段克隆到pUC18中。序列分析表明该3.9kbEcoRⅤ片段含有... 详细信息

依据GenBank登录的鸭肠炎病毒(DEV)核苷酸序列设计引物,利用长片段PCR技术扩增了DEV基因组UL36与UL43基因之间的未知序列,扩增所得片段长度约为15kb,经EcoRⅤ单酶切,将其中的3.9kb片段克隆到pUC18中。序列分析表明该3.9kbEcoRⅤ片段含有2个完整的转录方向相反的与单纯疱疹病毒(HSV)UL41和UL42基因同源的ORF,命名为DEV UL41和UL42基因。通过氨基酸序列比对发现:DEVUL41基因含有5个高度保守位点,而UL42含有2个,进化树分析表明DEV与疱疹病毒科α疱疹病毒亚科的马立克病毒、火鸡疱疹病毒的进化关系非常相近,为DEV的分类提供了参考依据。

关键词： DEV UK41基因 UIA2基因进化分析分类

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猪流感疫苗的研究进展

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黑龙江畜牧兽医 2009年第6期 32-33页

作者：刘大飞刘明刘春国杨涛刘大程中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001 莱阳市城厢兽医站山东莱阳265200

猪流感（swine influenza，SI）是由流感病毒引起的一种严重呼吸道疾病，临床以突发、高热、咳嗽、呼吸困难、衰竭、高发病率、低死亡率为特征。迄今已发现的A型猪流感病毒（swine influenza virus，SIV）有H1N1、H1N2、H1N7、H3N1、H3N... 详细信息

猪流感（swine influenza，SI）是由流感病毒引起的一种严重呼吸道疾病，临床以突发、高热、咳嗽、呼吸困难、衰竭、高发病率、低死亡率为特征。迄今已发现的A型猪流感病毒（swine influenza virus，SIV）有H1N1、H1N2、H1N7、H3N1、H3N2、 H3N3、H3N6、H4N6、H5N1和H9N2等10种不同血清亚型。自被发现以来，猪流感已成为严重危害猪群的疾病之一，已遍及亚洲、欧洲、非洲、南美洲、北美洲等，可谓全球流行。目前，世界范围内流行的猪流感血清型主要有人源H3N2、经典猪H1N1和类禽源H1N13种。

关键词：猪流感病毒流感疫苗呼吸道疾病 virus 呼吸困难血清亚型 H9N2 H5N1

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鸽源H5N1亚型禽流感病毒株的全基因克隆及序列分析

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中国兽医学报 2009年第1期29卷 6-11页

作者：钱爱东孟庆峰王伟利刘明吉林农业大学吉林长春130118 吉林出入境检验检疫局吉林长春130062 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

根据已知禽流感病毒(AIV)的8个基因序列设计合成11对特异引物,通过反转录-聚合酶链式反应技术,分别成功扩增出鸽源H5N1亚型的全基因序列,将其分别克隆到pMD18-T载体后进行序列测定。同时将8个基因片段与GenBank发表的相应序列进行比较,... 详细信息

根据已知禽流感病毒(AIV)的8个基因序列设计合成11对特异引物,通过反转录-聚合酶链式反应技术,分别成功扩增出鸽源H5N1亚型的全基因序列,将其分别克隆到pMD18-T载体后进行序列测定。同时将8个基因片段与GenBank发表的相应序列进行比较,绘制各基因的进化树。结果表明所克隆到的8个片段均包含相应病毒基因的完整开放阅读框架,长度分别为1 7301、3711、5422、3222、3302、2331、020、884 bp核苷酸,分别编码568、450、499、757、759、716、351、230个氨基酸。该毒株有7个潜在糖基化位点;在HA裂解位点附近有6个碱性氨基酸序列插入,符合高致病力禽流感病毒的特点。该毒株与参考毒株的序列比较分析结果表明分离株基因具有多样性。

关键词：鸽禽流感病毒基因克隆序列测定

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猪流感病毒NP基因的克隆及杆状病毒转移载体的构建

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西南农业学报 2009年第5期22卷 1453-1455页

作者：赵朴郑玉姝贾贝贝乔传玲陈化兰刘兴友李海燕河南科技学院动物科学学院河南新乡453003 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

本研究通过RT-PCR扩增了猪流感病毒A/Swine/Inner Mongolia/547/01(H3N2)的NP基因,并将其克隆入pMD18-T载体。重组pMD18-T经SalI和EcoR I酶切后得到的NP基因插入pMelBacB载体的SalI/EcoRI位点。PCR和限制性内切酶分析鉴定表明成功构建了... 详细信息

关键词：猪流感病毒 NP基因克隆转移载体

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