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H5N1亚型禽流感病毒A/goose/Guangdong/1/96的NS基因对鸡致病能力的影响

中国预防兽医学报 2007年第3期29卷 170-172页

作者：赵凤菊李泽君王爱琴赵玉军陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室沈阳农业大学辽宁沈阳110161 沈阳农业大学

为了解H5N1亚型禽流感病毒经自然途径感染SPF鸡后,病毒的致病能力与NS基因的关系,本文主要从病理学角度比较了两株利用反向基因操作技术拯救的病毒RGSGD/1/96和RGSGD/1/2NS的致病能力。虽然只有NS基因不同,但是这两株病毒经鼻腔感染4周... 详细信息

为了解H5N1亚型禽流感病毒经自然途径感染SPF鸡后,病毒的致病能力与NS基因的关系,本文主要从病理学角度比较了两株利用反向基因操作技术拯救的病毒RGSGD/1/96和RGSGD/1/2NS的致病能力。虽然只有NS基因不同,但是这两株病毒经鼻腔感染4周龄SPF鸡后表现出完全不同的致病能力,RGSGD/1/96对鸡的致死率为100%,感染鸡只的各组织脏器均可发现严重的病理损伤,该病毒在鸡体内复制能力很强,感染后3d、6d,各组织脏器均可发现大量的病毒抗原;GSGD/1/2NS对鸡的致死率为0,病毒在感染鸡体内只引起肺间质少量淋巴细胞浸润,免疫组织化学检查未发现病毒抗原信号。由于两株病毒只有NS基因不同,说明NS基因决定了H5N1亚型禽流感病毒A/goose/Guangdong/1/96对SPF鸡的致病能力。

关键词： H5N1 禽流感病毒 NS基因致病能力

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H5亚型禽流感病毒血凝素基因的克隆及表达

引用

黑龙江畜牧兽医 2007年第4期 20-22页

作者：黎玉梅邓国华冉多良熊蕊陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室国家禽流感参考实验室新疆农业大学动物医学学院新疆乌鲁木齐830052 新疆农业大学动物医学学院

研究以RT-PCR方法从H5N1亚型禽流感病毒A/DKZJ/12/00(H5N1)中获得禽流感病毒HA部分基因,将目的基因定向克隆到原核表达载体pET-32a,将测序和酶切验证正确的阳性重组质粒转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达。结果表明该蛋白得到了可溶性的... 详细信息

研究以RT-PCR方法从H5N1亚型禽流感病毒A/DKZJ/12/00(H5N1)中获得禽流感病毒HA部分基因,将目的基因定向克隆到原核表达载体pET-32a,将测序和酶切验证正确的阳性重组质粒转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达。结果表明该蛋白得到了可溶性的表达,表达蛋白的分子质量为25ku;Western-blot分析结果表明,该蛋白可以与禽流感H5阳性血清反应(禽流感的单克隆抗体所识别),检测HA的抗体时具有良好的免疫原性。

关键词：禽流感病毒 HA基因原核表达诊断抗原

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H7亚型禽流感病毒HA基因在杆状病毒系统中的表达

引用

中国预防兽医学报 2007年第4期29卷 268-271页

作者：郝婧邓国华姜永萍曲站红王桂芹郝永清陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 内蒙古农业大学动物科学与医学学院内蒙古呼和浩特010018

利用PCR反应,以特异性引物扩增禽流感病毒去除信号肽的H7亚型HA密码子优化基因,克隆到杆状病毒转移载体pFastBac-HTB中,转座DH10感受态细胞,通过蓝白斑筛选、PCR鉴定获得阳性克隆,然后提取基因组Bacmid,转染Sf9昆虫细胞,得到含H7亚型流... 详细信息

利用PCR反应,以特异性引物扩增禽流感病毒去除信号肽的H7亚型HA密码子优化基因,克隆到杆状病毒转移载体pFastBac-HTB中,转座DH10感受态细胞,通过蓝白斑筛选、PCR鉴定获得阳性克隆,然后提取基因组Bacmid,转染Sf9昆虫细胞,得到含H7亚型流感病毒HA基因的重组杆状病毒opti-H7HA-Bac。重组杆状病毒接种Sf9昆虫细胞,待绝大部分细胞产生细胞病变后收获细胞,细胞裂解产物经血凝试验、SDS-PAGE及Western blot分析证实。密码子优化的H7 HA基因在重组杆状病毒opti-H7HA-Bac感染Sf9细胞后获得高效表达,且具有良好的蛋白活性及特异免疫反应原性。

关键词：禽流感 H7亚型 HA基因重组杆状病毒

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猪流感病毒RT-PCR快速检测方法的建立

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动物医学进展 2007年第1期28卷 42-45页

作者：杨焕良乔传玲陈艳辛晓光陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

根据猪流感病毒M基因序列设计了一对扩增M基因684 bp片段的特异性引物,建立了RT- PCR快速诊断猪流感的方法,采用该方法检测出H1、H3、H5和H9 4个亚型猪流感病毒标准参考株为阳性,猪副黏病毒、圆环病毒2型和猪繁殖与呼吸综合征病毒检测... 详细信息

根据猪流感病毒M基因序列设计了一对扩增M基因684 bp片段的特异性引物,建立了RT- PCR快速诊断猪流感的方法,采用该方法检测出H1、H3、H5和H9 4个亚型猪流感病毒标准参考株为阳性,猪副黏病毒、圆环病毒2型和猪繁殖与呼吸综合征病毒检测结果呈阴性。RT-PCR最少可检测到1 000 EID_(50)的病毒量核酸,可直接从猪流感病毒感染小鼠的组织样品中检测到病毒。

关键词：猪流感病毒诊断反转录-聚合酶链式反应

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H5N1亚型禽流感病毒NS1基因的克隆及在***中的表达

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新疆农业大学学报 2007年第3期30卷 69-72页

作者：刘威龙焦培荣刘畅阿合买提.买买提陈化兰新疆农业大学动物医学学院乌鲁木齐830052 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室哈尔滨150001

选择一株H5N1亚型高致病性禽流感病毒株A/Goose/Guangdong/1/96(简写为GD/1/96),根据测得的NS基因序列,设计一对特异性引物NS1U/NS1L,RT-PCR方法扩增该毒株的NS1基因。将酶切处理后的基因片段定向克隆到原核表达载体PET-32a(+),并进一... 详细信息

选择一株H5N1亚型高致病性禽流感病毒株A/Goose/Guangdong/1/96(简写为GD/1/96),根据测得的NS基因序列,设计一对特异性引物NS1U/NS1L,RT-PCR方法扩增该毒株的NS1基因。将酶切处理后的基因片段定向克隆到原核表达载体PET-32a(+),并进一步酶切分析和序列测定,鉴定出NS1基因的阳性重组子。阳性质粒转化*** 21(DE3)感受态细胞,在IPTG诱导下,经SDS-PAGE和Western-blotting分析鉴定,成功的在细菌包涵体中表达出45 kD的NS1融合蛋白。重组蛋白经Ni-NTA *** Resins纯化。

关键词： H5N1禽流感病毒 NS1蛋白克隆原核表达纯化

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A型流感病毒M2蛋白研究进展

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动物医学进展 2007年第7期28卷 56-60页

作者：万春和刘明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

M2蛋白是A型流感病毒所特有的一种结构保守的非糖基化的跨膜蛋白,主要在病毒脱壳时酸化病毒粒子的内部环境,在表面血凝素糖蛋白合成过程中作为质子通道调节高尔基体跨膜转移通道的pH。其核苷酸序列高度保守,几乎不发生变异。其25位~43... 详细信息

M2蛋白是A型流感病毒所特有的一种结构保守的非糖基化的跨膜蛋白,主要在病毒脱壳时酸化病毒粒子的内部环境,在表面血凝素糖蛋白合成过程中作为质子通道调节高尔基体跨膜转移通道的pH。其核苷酸序列高度保守,几乎不发生变异。其25位~43位氨基酸多肽是金刚烷胺类抗流感病毒药物的作用靶位,氨基酸极小变异都可能导致流感病毒抗药性的产生。M2蛋白胞外区域的氨基酸残基多肽（M2e）的特异性抗体可以在感染流感病毒的动物血清中检测出来,将M2e与相关佐剂联合使用可极大的提高机体对流感病毒的免疫力,在病毒感染中起重要作用,是一种潜在的交叉保护性抗原,常被用来探索具有广谱性和持久性的流感＂通用疫苗＂。

关键词： A型流感病毒 M2蛋白疫苗

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H5亚型禽流感病毒单克隆抗体的制备和鉴定

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新疆农业大学学报 2007年第4期30卷 25-28页

作者：黎玉梅邓国华冉多良熊蕊陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室暨国家禽流感参考实验室哈尔滨150001 新疆农业大学动物医学学院乌鲁木齐830052

采用高致病性禽流感病毒(HPAIV)H5N1亚型A/Duck/Zhenjiang/11/00(DZJ/1100)毒株作为免疫原,免疫8周龄BALB/C雌性小鼠,三次加强免疫后取脾细胞与SP2/0细胞融合,用表达的重组核蛋白(NP)包被ELISA的方法检测筛选,阳性细胞克隆经有限稀释法... 详细信息

采用高致病性禽流感病毒(HPAIV)H5N1亚型A/Duck/Zhenjiang/11/00(DZJ/1100)毒株作为免疫原,免疫8周龄BALB/C雌性小鼠,三次加强免疫后取脾细胞与SP2/0细胞融合,用表达的重组核蛋白(NP)包被ELISA的方法检测筛选,阳性细胞克隆经有限稀释法克隆培养,最后获得H5亚型特异性的单克隆抗体,抗体亚类检测结果表明该抗体亚类为IgG1型k链抗体。ELISA以及免疫荧光检测表明该抗体有良好的特异性。

关键词： H5亚型禽流感单克隆抗体 ELISA IFA

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H1亚型猪流感病毒血凝素基因在昆虫细胞中的表达及其间接ELISA方法的初步建立

H1亚型猪流感病毒血凝素基因在昆虫细胞中的表达及其间接ELISA方...

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第七届全国病毒学学术研讨会暨第二届武汉现代病毒学国际研讨会

作者：万春和刘明刘春国张晓霁杨涛张云郭东春中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室

根据 GenBank 发表的 H1亚型猪流感 HA 基因序列设计引物,扩增出 HA 基因片段,将其克隆到 pFastBacGP67B 杆状病毒载体上,筛选阳性重组转座载体 pFastBacGP67B-H1,转化含有杆状病毒穿梭载体(bacmid)的 DH10Bac 感受态细

关键词：昆虫细胞猪流感流感病毒血凝素基因 ELISA

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流感病毒M2蛋白研究进展

流感病毒M2蛋白研究进展

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次学术研讨会

作者：万春和刘明刘春国张晓霁杨涛中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室

目前,每年的流感流行都会造成世界范围内约有10%～20%的人感染流感病毒,其中约有300～500万人会产生严重症状,并可导致大约25～50万人的死亡,给整个人类社会带来很大的经济负担。目前的禽流感疫情更是引起全世界的关注和恐慌,截至2007年... 详细信息

目前,每年的流感流行都会造成世界范围内约有10%～20%的人感染流感病毒,其中约有300～500万人会产生严重症状,并可导致大约25～50万人的死亡,给整个人类社会带来很大的经济负担。目前的禽流感疫情更是引起全世界的关注和恐慌,截至2007年4月2日,世界卫生组织(WHO)证实已经有288人感染禽流感,其中170人死亡。全世界已有超过218亿只的家禽染病死亡或遭扑杀,造成的经济损失高达400亿美元[1-2]。

关键词：流感病毒氨基酸序列胞外区金刚烷胺金刚乙胺

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重组细胞高产型H3N2猪流感病毒株的拯救

重组细胞高产型H3N2猪流感病毒株的拯救

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第七届全国病毒学学术研讨会暨第二届武汉现代病毒学国际研讨会

作者：杨涛刘明刘春国张云刘大飞陈浩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室农业部动物流感重点开放实验室

为拯救出一株能够在动物传代细胞中高水平复制的 H3N2亚型猪流感疫苗株, 本研究利用反向遗传操作技术,将 A/Goose/Dalian/3/01(H9N2)毒株的 PB1、PA、 NP、M、NS 基因和 A/PR/8毒株的 PB2基因作为内部基因与猪流感病毒

关键词：猪流感病毒

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