检索结果-内蒙古大学图书馆

中国微生物学会兽医微生物学专业委员会2006年学术年会

作者：刘春国刘明杨涛张云张晓霁潘蔚绮中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室农业部动物流感重点开放实验室哈尔滨150001 中国科学院广州生物医药与健康研究院广州510663

分离到一株鹅源H5N2亚型禽流感病毒,S P F鸡静脉接种致病指数为2.99,但鸭子对该病毒不敏感.病毒感染小鼠后仅在肺内复制,但不致病.HA蛋白裂解位点上插入有多个连续的碱性氨基酸(RRRKKR),从分子上证实这是一株高致病性禽流感病毒.核酸序... 详细信息

分离到一株鹅源H5N2亚型禽流感病毒,S P F鸡静脉接种致病指数为2.99,但鸭子对该病毒不敏感.病毒感染小鼠后仅在肺内复制,但不致病.HA蛋白裂解位点上插入有多个连续的碱性氨基酸(RRRKKR),从分子上证实这是一株高致病性禽流感病毒.核酸序列比较分析表明W2株流感病毒HA基因与CK/HB/489/2004(H5N1)同源率达到99.4％,NA基因与CK/JL/53/01(H9N2)同源率达到99.8％;氨基酸水平上,HA与04年分离到的CK/HB/489/200(H5N1)、CK/HN/210/200(H5N1)、WD/GD/314/20(H5N1)和Swan/GX/307/2(H5N1)四株H5N1亚型流感病毒的同源率均为99.3％,NA与CK/JL/53/01(H9N2)同源率为99.6％.HA蛋白中含有8个潜在的糖基化位点,比大多数流感病毒多出一个170位的***蛋白222位和226位分别为Gln和Gly;226位为Leu,在基因序列上保持着与近期大陆分离的H5N1亚型禽流感毒株相近的分子特征.

关键词：禽流感病毒 H5N2亚型高致病性序列分析生物学特性

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H5亚型禽流感病毒HA基因昆虫／杆状病毒系统的表达及对BALB/c小鼠的免疫保护

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科技导报 2006年第3期24卷 5-8页

作者：孟庆文刘光亮于康震童光志刘娣施建忠陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001 东北林业大学博士后流动站黑龙江省农业科学院博士后工作站北京100026 农业部畜牧兽医总站哈尔滨150086

经RT-PCR扩增了禽流感病毒A/Goose/Guangdong/1／96 H5N1亚型1．7kb HA基因的cDNA,将其克隆到pMD18-T中并测序。亚克隆到杆状病毒转移载体pMelBacA的蜜蜂蜂毒素分泌信号下游中,测序正确后与线性化的杆状病毒DNA(Bac-N-BlueTM DNA)共转染... 详细信息

经RT-PCR扩增了禽流感病毒A/Goose/Guangdong/1／96 H5N1亚型1．7kb HA基因的cDNA,将其克隆到pMD18-T中并测序。亚克隆到杆状病毒转移载体pMelBacA的蜜蜂蜂毒素分泌信号下游中,测序正确后与线性化的杆状病毒DNA(Bac-N-BlueTM DNA)共转染Sf9昆虫细胞。将重组杆状病毒感染HFive细胞,72h左右收获细胞,超声波裂解,SDS—PAGE结果表明HA基因在重组杆状病毒感染的HFive细胞中获得表达。蛋白胶薄层扫描分析显示:表达的HA蛋白占重组杆状病毒感染细胞总蛋白含量的17．1％。Western-blot 及血凝实验结果显示,表达的禽流感H5N1亚型病毒HA蛋白具有生物学活性。表达的H5 HA蛋白定量乳化后,皮下多点注射免疫SPF 级BALB/c雌性小鼠,免疫后产生了H5 HA特异抗体,并在三免前后达到并保持较高水平。用致死剂量的HPAIV H5N1攻击小鼠,免疫组小鼠提供了100％的保护力,而对照组小鼠先后发病且死亡:为研制禽流感H5N1亚型病毒亚单位疫苗,防制禽流感奠定了基础。

关键词：禽流感病毒血凝素重组杆状病毒亚单位疫苗免疫保护

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重组高繁殖力疫苗株H5N2(H5/PR8)病毒的制备和鉴定

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中国预防兽医学报 2005年第6期27卷 530-534页

作者：施建忠田国彬李雁冰陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室

作为禽流感疫苗株,不但要求其具有良好的免疫原性,而且要求在生产中具有良好的生长特性,现用的A/Turkey/England/N28/73(H5N2)疫苗株,血凝价28,生长滴度较差。本研究利用自然重组法,预制备一株高繁殖力的预备疫苗株,使它的表面基因血凝... 详细信息

作为禽流感疫苗株,不但要求其具有良好的免疫原性,而且要求在生产中具有良好的生长特性,现用的A/Turkey/England/N28/73(H5N2)疫苗株,血凝价28,生长滴度较差。本研究利用自然重组法,预制备一株高繁殖力的预备疫苗株,使它的表面基因血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)来源于A/Turkey/England/N28/73(H5N2)毒株,并使其保持原有的良好的免疫原性,内部基因来源于流感病毒PR8,A/Puerto Rico/8/34(H1N1)毒株,并使其重组病毒赋有了流感病毒PR8高繁殖力的特性。实验结果表明,已获得一株高繁殖力的重组流感病毒H5/PR8,血凝价达到211,生长繁殖特性明显增强。抗原性分析显示,H5/PR8重组病毒与亲本毒株H5N2抗原性无明显差异;致病性分析发现,H5/PR8重组病毒的致病能力较亲本毒株H5N2有明显下降。这为疫苗株的改良奠定了坚实的基础,对禽流感灭活疫苗的生产具有重大意义。

关键词：流感病毒重组 H5N2亚型 PR8

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禽流感病毒A/TurKey/England/N28/73(H5N2)全基因克隆及序列分析

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中国预防兽医学报 2005年第1期27卷 8-12页

作者：刘丽玲王秀荣陈化兰邓国华姜永萍中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室

通过反转录_聚合酶链式反应 (RT_PCR)技术分别扩增了禽流感病毒A/TurKey/England/N2 8/ 73(H5N2 ) (TEN2 8/73)的 8个基因片段即PA、PB1、BP2、NS、NP、M、HA、NA基因 ,将其分别克隆到PMD18_T载体后进行序列测定 :并将克隆到的 8个基因... 详细信息

通过反转录_聚合酶链式反应 (RT_PCR)技术分别扩增了禽流感病毒A/TurKey/England/N2 8/ 73(H5N2 ) (TEN2 8/73)的 8个基因片段即PA、PB1、BP2、NS、NP、M、HA、NA基因 ,将其分别克隆到PMD18_T载体后进行序列测定 :并将克隆到的 8个基因片段与GenBank发表的相应序列进行比较分析 ,绘制HA和NA基因的进化树。结果表明所克隆到的 8个片段均包含相应的病毒基因的完整开放阅读框架 ;HA、NA基因的序列分析表明TEN2 8/ 73符合低致病力禽流感病毒的特征 :HA进化分析发现TEN2 8/ 73与A/Duck/Hongkong/ 6 98/ 79处于不同的分支中 ,与A/Goose/Guangdong/ 1/ 96和A/Goose/Guangdong/ 3/ 97亲缘关系较远 ;NA进化分析表明TEN2 8/ 73与A/Duck/Hongkong/ 86 / 76亲缘关系较近 ,但和A/Leningrad/4 7/ 5 7的NA基因却在不同的分支中。TEN2 8/ 73全基因序列的测定是首次对H5N2亚型AIV的全基因进行序列测定工作。

关键词：禽流感病毒全基因克隆序列分析 RT-PCR 同源性分析鸡禽流感

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两种消毒剂对流感病毒灭活效果的对比研究

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黑龙江畜牧兽医 2005年第3期 9-11页

作者：施建忠田国彬李雁冰冯菊艳陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室

采用Klein-Defors悬浮杀灭与感染试验方法,研究“卫可”、“卫康”两种消毒剂在不同浓度下,分别与流感H5N1和H9N2亚型病毒作用 5min和 10min,对流感病毒的灭活作用。结果表明:这两种消毒剂在相同或不同的浓度范围内,对病毒的杀灭率是有... 详细信息

采用Klein-Defors悬浮杀灭与感染试验方法,研究“卫可”、“卫康”两种消毒剂在不同浓度下,分别与流感H5N1和H9N2亚型病毒作用 5min和 10min,对流感病毒的灭活作用。结果表明:这两种消毒剂在相同或不同的浓度范围内,对病毒的杀灭率是有区别的。尽管每种消毒剂在本身稀释浓度范围内都有较好的杀毒效果,但在应用中也应考虑其他因素的影响。因此,我们推荐使用该消毒剂的工作浓度为 100%杀灭病毒的稀释度,这将为其临床应用提供依据,对环境消毒和防止流感爆发具有参考价值。

关键词：消毒剂流感病毒临床应用对比研究毒作用灭活效果爆发浓度推荐使用环境消毒

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在DNA芯片平台上探测AIV不同亚型cDNA

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中国农业科学 2005年第2期38卷 394-398页

作者：王秀荣邓国华于康震石锐刘丽玲乔传玲陈化兰孔宪刚中国农业科学院哈尔滨兽医研究所/农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所/农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

对以基因芯片技术为基础的检测H5、H7、H9亚型禽流感病毒的快速诊断技术进行了研究。试验中所使用的病毒为A/Goose/Guangdong/1/96(H5N1)、A/African　starling/983/79(H7N1)和　A/Turkey/Wisconsin/1/66(H9N2)。通过RT-PCR获得大约500　bp的禽流感病毒基因cDNAs片段,克隆,从重组质粒扩增DNA片段,并点到玻璃载体上,制成芯片。在病毒RNA反转录过程中,用Cy5标记样品　cDNAs。样品　cDNAs是一个包括禽流感病毒HA和M基因的混合物。依据M基因鉴别型,依据HA基因鉴别亚型。扫描芯片上探针结合位点,杂交信号与预期设想基本一致。结果显示,DNA芯片技术可以提供一种有效的AIV诊断方法。

关键词：禽流感病毒基因芯片亚型鉴定

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含氯复方消毒剂对禽流感病毒灭活效果的研究

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中国消毒学杂志 2005年第4期22卷 395-397页

作者：施建忠田国彬李雁冰冯菊艳陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室哈尔滨150001 国家禽流感参考实验室

采用K le in-Defors悬浮灭活试验与鸡胚感染试验方法,对含氯复方消毒剂灭活H5N1和H9N2亚型禽流感病毒的效果进行了检测。结果,该含氯消毒剂在125 mg/L以上时,对两种禽流感病毒的杀灭率可达到99.99%以上。在实际应用中,推荐该消毒剂的使... 详细信息

采用K le in-Defors悬浮灭活试验与鸡胚感染试验方法,对含氯复方消毒剂灭活H5N1和H9N2亚型禽流感病毒的效果进行了检测。结果,该含氯消毒剂在125 mg/L以上时,对两种禽流感病毒的杀灭率可达到99.99%以上。在实际应用中,推荐该消毒剂的使用浓度为有效氯167 mg/L。结论,该复方含氯消毒剂对两种禽流感病毒有很好的灭活效果。

关键词：含氯消毒剂悬浮杀灭试验禽流感病毒

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H1N1猪流感广东株血凝素基因的克隆与序列分析

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畜牧兽医学报 2005年第2期36卷 172-176页

作者：胡永浩姚学萍李海燕赵有淑杨焕良陈化兰甘肃农业大学动物医学院兰州730070 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室哈尔滨150001

用RT- PCR方法扩增H1N1亚型猪流感病毒广东分离株 A/Swine/GuangDong/711/2001 HA基因,对其进行了克隆和测序。结果显示,HA基因全长 1 771 bp,共编码 579 个氨基酸。A/Swine/GuangDong/711/2001HA基因编码的氨基酸序列中有 8 个糖基化... 详细信息

用RT- PCR方法扩增H1N1亚型猪流感病毒广东分离株 A/Swine/GuangDong/711/2001 HA基因,对其进行了克隆和测序。结果显示,HA基因全长 1 771 bp,共编码 579 个氨基酸。A/Swine/GuangDong/711/2001HA基因编码的氨基酸序列中有 8 个糖基化位点,5 个位于 HA1 基因的第 27、28、40、104 和 287 位点,3 个位于HA2基因的21、153和213位点。与H1N1亚型猪流感经典毒株比较后发现,血凝素糖基化位点并不是高度保守的。将A/Swine/GuangDong/711/2001与自GenBank读取的1918年人流感毒株 A/South Carolina/1/18、1991 年人流感毒株A/MD/12/91和1997年猪流感毒株 A/Swine/Wisconsin/238/97 等进行核苷酸同源性比较分析,A/Swine/GuangDong/711/2001与A/South Carolina/1/18、A/MD/12/91和 A/Swine/Wisconsin/238/97 等毒株的核苷酸同源性分别为 93. 9%、94. 7%和 93. 9%。从系统发生树来看, A/Swine/GuangDong/711/2001 与 A/SouthCarolina/1/18和A/Swine/Wisconsin/238/97的亲缘关系相近。

关键词：猪流感病毒 HA基因位点毒株广东株 l基因序列分析人流感血凝素基因亚型

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中国禽(番鸭)呼肠孤病毒分离株S1基因全序列分析

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中国预防兽医学报 2005年第2期27卷 105-111页

作者：王劭邓国华吴异健吴宝成陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001 福建农林大学动物科学学院福建福州350002

采用RT_PCR技术 ,分别以DRV_YH、DRV_YJL两株中国禽 (番鸭 )呼肠孤病毒RNA为模板 ,扩增了S1全基因的cDNA片段。将S1cDNA克隆到T载体后进行序列测定 ,测序结果表明所扩增的cDNA片段长 16 4 3个核苷酸 ,包含了完整的S1基因的三个开放阅读... 详细信息

采用RT_PCR技术 ,分别以DRV_YH、DRV_YJL两株中国禽 (番鸭 )呼肠孤病毒RNA为模板 ,扩增了S1全基因的cDNA片段。将S1cDNA克隆到T载体后进行序列测定 ,测序结果表明所扩增的cDNA片段长 16 4 3个核苷酸 ,包含了完整的S1基因的三个开放阅读框架 (ORF1,ORF2和ORF3)和基因两端的非编码区。核苷酸序列比较分析结果表明 :DRV_YH与ARV_S1133,176分别有 6个 ,10个核苷酸的差异 ,DRV_YJL与ARV_S1133,176分别有 8个 ,12个核苷酸的差异 ,DRV_YH与DRV_YJL有

关键词：禽番鸭呼肠孤病毒 S1基因

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具有HI活性的抗H5亚型流感病毒特异性单克隆抗体的研制

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中国预防兽医学报 2005年第5期27卷 329-332页

作者：张立春邓国华刘振勇田国彬于康震陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

以H5N1亚型禽流感病毒分离株A/Duck/Zhejiang/11/00(H5N1)(DZJ/1100)作为免疫原,浓缩纯化后免疫BALB/c小鼠,三次免疫后,取免疫小鼠脾细胞与SP2/O细胞融合,融合阳性细胞用血凝抑制(HI)方法进行检测,阳性细胞株经三代克隆纯化后,获得三株... 详细信息

以H5N1亚型禽流感病毒分离株A/Duck/Zhejiang/11/00(H5N1)(DZJ/1100)作为免疫原,浓缩纯化后免疫BALB/c小鼠,三次免疫后,取免疫小鼠脾细胞与SP2/O细胞融合,融合阳性细胞用血凝抑制(HI)方法进行检测,阳性细胞株经三代克隆纯化后,获得三株能稳定分泌抗血凝素特异性HI单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为DD7、FG10、CG12。三株杂交瘤细胞株产生的小鼠腹水和细胞培养液上清的HI滴度分别是213、215、211和278、、23。与其他具有血凝活性的禽类病毒以及其他14个HA亚型的禽流感病毒的交叉HI试验表明:这三株单抗具有良好的禽流感病毒亚型特异性;与其他H5亚型流感病毒分离株的HI试验和中和试验证实这三株单抗具有良好的交叉性(分别为7/8、8/8、8/8)和中和活性(6/8、8/8、8/8)。该亚型特异性单克隆抗体的研制成功为H5亚型禽流感病毒的疫情病原学快速诊断提供了坚实的物质保障。

关键词：禽流感血凝抑制试验单克隆抗体

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