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第六次人畜共患病学术交流会

作者：赵朴李海燕杨焕良陈化兰于康震卢中华中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点开放实验室(黑龙江哈尔滨) 全国畜牧兽医总站(北京) 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点开放实验室(黑龙江哈尔滨) 河南农业大学牧医工程学院(河南郑州)

GenBank中登录的猪流感病毒参照序列设计了扩增神经氨酸酶(NA)基因的特异性引物.从猪流感抗毒A/Swine/Inner Mongolia/547/01(H3N2)株感染的鸡胚液中直接提取病毒RNA,经RT-PCR扩增后将其克隆到pMD18-T载体上,进行序列测定和拼接.用Hind... 详细信息

GenBank中登录的猪流感病毒参照序列设计了扩增神经氨酸酶(NA)基因的特异性引物.从猪流感抗毒A/Swine/Inner Mongolia/547/01(H3N2)株感染的鸡胚液中直接提取病毒RNA,经RT-PCR扩增后将其克隆到pMD18-T载体上,进行序列测定和拼接.用HindⅢ酶切后,亚克隆到杆状病毒转移载体pMeLBacB上,得到重组转移载体pMelBacNA,然后与线性化杆状病毒DNA(Bac-N-Blue<'TM>DNA)共转染于sf9昆虫细胞.经3轮噬斑纯化,提取其DNA经PCR鉴定,获得重组杆状病毒株.SDS-PAGE结果显示,目的基因已获得表达,Western blot和神经氨酸酶活性检测结果显示表达产物具有良好的免疫原性和神经氨酸酶活性,为SIV亚单位疫苗和NA基因的深入研究奠定了基础.

关键词：猪流感病毒神经氨酸酶基因重组杆状病毒真核表达

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H1N1亚型猪流感病毒中国分离株血凝素基因分子演化的研究

H1N1亚型猪流感病毒中国分离株血凝素基因分子演化的研究

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第六次人畜共患病学术交流会

作者：陈君彦李海燕申之义陈化兰于康震毕英佐中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室(哈尔滨) 内蒙古农业大学动物科学与医学学院(呼和浩特) 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室(哈尔滨) 内蒙古农业大学动物科学与医学学院(呼和浩特) 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室(哈尔滨) 全国畜牧兽医总站(北京) 华南农业大学动物科学学院(广州)

本研究对2001年中国华南及东北地区的15株H1N1亚型猪流感病毒(SIV)分离株的血凝素(HA)基因进行了序列测定和分析,并绘制了进化树.研究结果表明,15株H1N1 SIV的HA基因核甘酸全长为1778bp,共编码566个氨基酸;而且,15株H1N1亚型SIV的HA1蛋... 详细信息

本研究对2001年中国华南及东北地区的15株H1N1亚型猪流感病毒(SIV)分离株的血凝素(HA)基因进行了序列测定和分析,并绘制了进化树.研究结果表明,15株H1N1 SIV的HA基因核甘酸全长为1778bp,共编码566个氨基酸;而且,15株H1N1亚型SIV的HA1蛋白在10、11、23、87、287位都存在高度保守的糖基化位点,此外,在276位多了一个"-NTT-"糖基化位点,与参考毒株SW/IW/930/01一致,这可能是近期H1N1亚型SIV的一个分子特征.本研究进一步发现,15株H1N1亚型SIV的HA基因切割位点氨基酸组成为IPSIQSR↓G,具有非高致病力毒株分子特征;而其受体结合位点在HA蛋白上第226位是Q,第228位为G,可能具有感染禽的潜力.经同源性比较,15株H1N1亚型SIV的HA基因与古典型H1N1猪谱系中的WIS/4754/94的同源性相对最高,核苷酸和氨基酸序列同源性分别达到95.7~96.1﹪和96.5~97.2﹪.由同源性比较结果和进化树分析可见,15株H1N1亚型SIV的HA基因皆属于古典型的H1N1猪谱系.

关键词：猪流感病毒血凝素序列分析分子演化正粘病毒科流感病毒

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H5N1亚型高致病性禽流感病毒A/goose/Guangdong/1/96株反向基因操作系统的建立

H5N1亚型高致病性禽流感病毒A/goose/Guangdong/1/96株反向基因操...

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中国畜牧兽医学会禽病学分会第12次学术研讨会

作者：李泽君焦培荣于康震陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点实验室和兽医生物技术国家重点实验室(哈尔滨) 农业部畜牧兽医总站(北京)

A/goose/Guangdong/1/96(GSGD/1/96)是我国分离的第一株H5N1亚型禽流感病毒,它不仅是97香港感染并致人死亡的H5N1亚型流感病毒HA基因供体株,而且是我国目前流行的H5亚型流感病毒的共同祖先.本研究建立了该病毒的8质粒反向基因操作系统,... 详细信息

A/goose/Guangdong/1/96(GSGD/1/96)是我国分离的第一株H5N1亚型禽流感病毒,它不仅是97香港感染并致人死亡的H5N1亚型流感病毒HA基因供体株,而且是我国目前流行的H5亚型流感病毒的共同祖先.本研究建立了该病毒的8质粒反向基因操作系统,并通过细胞传染成功拯救了该病毒(R-GSGD/1/96).R-GSGD/1/96在对SPF鸡和Balb/c小鼠的致病性方面保持了与亲本野毒(W-GSGD/1/96)一致的生物学特性,即对鸡都是高致病性毒株,R-GSGD/1/96与W-GSGD/1/96的静脉致病指数分别为2.01和2.10;救获病毒与野生病毒一样,尽管106EID<,50>经鼻腔感染后1~2d内能从肺脏检测到低滴度的病毒,但不能在小鼠体内成功复制.GSGD/1/96反向基因操作系统的成功建立为进一步开展我国高致病性禽流感病毒分离株的生物学特性、遗传衍化及结构与其功能关系研究奠定了基础.

关键词：禽流感病毒反向基因操作 H5N1亚型生物学特性遗传衍化

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H5N1亚型高致病性禽流感病毒A/goose/Guangdong/1/96株反向基因操作系统的建立

H5N1亚型高致病性禽流感病毒A/goose/Guangdong/1/96株反向基因操...

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中国畜牧兽医学会2004年学术年会暨第五届全国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会

A/goose/Guangdong/1/96(GSGD/1/96)是我国分离的第一株H5N1亚型禽流感病毒,它不仅是97香港感染并致人死亡的H5N1亚型流感病毒HA基因供体株,而且是我国目前流行的H5亚型流感病毒的共同祖先.本研究建立了该病毒的8质粒反向基因操作系统,并通过细胞转染成功拯救了该病毒(R-GSGD/1/96).R-GSGD/1/96在对SPF鸡和Balb/c小鼠的致病性方面保持了与亲本野毒(W-GSGD/1/96)一致的生物学特性,即对鸡都是高致病性毒株,R-GSGD/1/96与W-GSGD/1/96的静脉致病指数分别为2.01和2.10;救获病毒与野生病毒一样,尽管10<'6>EID<,50>经鼻腔感染小鼠后1-2天内能从肺脏检测到低滴度的病毒,但不能在小鼠体内成功复制.GSGD/1/96反向基因操作系统的成功建立为进一步开展我国高致病性禽流感病毒分离株的生物学特性、遗传衍化及结构与其功能关系研究奠定了基础.

关键词：禽流感病毒反向基因操作 H5N1亚型生物学遗传衍化

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H3N2亚型猪流感病毒中国分离株的克隆纯化及生物学特性

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中国兽医学报 2003年第6期23卷 560-563页

作者：李海燕辛晓光于康震杨焕良李雁冰赵朴毕英佐中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室华南农业大学动物科学学院广东广州510642

以有限稀释克隆法对 2 9株 H3N2亚型猪流感病毒 ( SIV)不同地区分离株进行纯化 ,并对其生物学特性进行了研究。结果 ,8株对鸡呈现中等致病力 ,2 1株对鸡呈现低致病力。不同地区 SIV分离株 (第 5代 )的 EID50 差异较大 ,以安徽分离株最... 详细信息

以有限稀释克隆法对 2 9株 H3N2亚型猪流感病毒 ( SIV)不同地区分离株进行纯化 ,并对其生物学特性进行了研究。结果 ,8株对鸡呈现中等致病力 ,2 1株对鸡呈现低致病力。不同地区 SIV分离株 (第 5代 )的 EID50 差异较大 ,以安徽分离株最高 ,为 10 - 1 0 .77/ 0 .2 m L,其他毒株在 10 - 5.5～ 10 - 1 0 .56 / 0 .2 m L 之间。黑龙江省分离株和浙江省分离株的L D50 高达 10 - 2 .84 / 0 .1m L ,其他分离株在 10 - 1 .1 7～ 10 - 2 .56 / 0 .1m L之间。经鸡胚分离传代后 ,SIV分离株均能凝集0 .7%人“O”型血、绵羊、兔、豚鼠、小鼠、大鼠及鸡的红细胞 ,其红细胞凝集谱的差异主要表现在对马、牛、驴、猪红细胞的凝集特性上。大部分 SIV分离株为热不稳定型 ,部分毒株表现为中等热稳定型和热稳定型。从其抗原特性看 ,大部分 SIV分离株表现为亲和相 ,对 AIV参考毒株 DKUK6 3和 SIV参考毒株 SWTN77表现出较高的 HI滴度 ;部分分离株经鸡胚传代后 ,出现了相别的变异。

关键词：猪流感流感病毒 H3N2亚型中国分离株克隆纯化生物学特性有限稀释克隆法

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表达禽流感病毒核蛋白基因重组禽痘病毒的构建及其免疫保护性研究

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中国农业科学 2003年第6期36卷 704-708页

作者：乔传玲于康震姜永萍张建林邓国华孟庆文田国斌唐秀英中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室农业部动物流感研究中心农业部动物流感研究中心农业部动物流感研究中心哈尔滨150001 农业部动物流感研究中心哈尔滨150001现在农业部畜牧兽医局工作

从含有禽流感病毒A/Goose/Guangdong/1/96 (H5N1)核蛋白 (NP)基因的质粒pUCNP中切下NP基因片段 ,将其亚克隆到pSY5 38质粒 ,再将带有痘苗病毒启动子P11的LacZ基因也平端克隆到pSY5 38质粒 ,然后切下同时含有NP及LacZ基因的片段 ,再亚克... 详细信息

从含有禽流感病毒A/Goose/Guangdong/1/96 (H5N1)核蛋白 (NP)基因的质粒pUCNP中切下NP基因片段 ,将其亚克隆到pSY5 38质粒 ,再将带有痘苗病毒启动子P11的LacZ基因也平端克隆到pSY5 38质粒 ,然后切下同时含有NP及LacZ基因的片段 ,再亚克隆到禽痘病毒载体pSY6 81,从而构建出表达核蛋白基因的重组禽痘病毒转移载体pSY(NP +LacZ)。应用脂质体介导的方法将转移载体转染已感染禽痘病毒S FPV 0 17的鸡胚成纤维细胞 ,在X gal存在的条件下 ,利用蓝白斑筛选、数轮蚀斑纯化以及PCR、Western blot鉴定 ,结果证明 ,获得了能高效表达AIVNP蛋白的重组禽痘病毒rFPV NP。SPF鸡体内的免疫保护试验结果表明 ,它能够诱导机体产生较高水平的NP特异性抗体 ,并对H5N1和H7N1这 2种亚型高致病力禽流感病毒的攻击提供一定的保护。

关键词：禽流感病毒重组禽痘病毒核蛋白基因免疫保护性

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5种禽用多联疫苗的安全性和免疫效力试验