检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2017年第8期39卷 668-671页

作者：曲志远王增马树杰孔晖晖施建忠曾显营陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150069

A/Puerto Rico/8/34(H1N1)(PR8)是高滴度鸡胚适应流感病毒株,WHO 1969年将其推荐为流感病毒疫苗株内部基因供体株,本世纪以来其也被广泛用于H5N1流感疫苗株的内部基因供体株。本研究利用反向遗传技术以携带PB2基因K627E突变的PR8内部基... 详细信息

A/Puerto Rico/8/34(H1N1)(PR8)是高滴度鸡胚适应流感病毒株,WHO 1969年将其推荐为流感病毒疫苗株内部基因供体株,本世纪以来其也被广泛用于H5N1流感疫苗株的内部基因供体株。本研究利用反向遗传技术以携带PB2基因K627E突变的PR8内部基因为骨架,以一株H7N9亚型低致病力禽流感病毒CK/HN的表面基因为供体,并在其HA基因引入V^(186)G和L^(226)Q双点突变,构建了一株重组病毒H7N9(HN)/PR8。固相ELISA受体结合特性分析结果显示,野生病毒CK/HN可同时结合α-2,6-糖链(人源受体成分)和α-2,3-糖链(禽源受体成分),并且与前者的亲和力高于后者;重组病毒H7N9(HN)/PR8对α-2,3-糖链的亲和力明显增高,对α-2,6-糖链的亲和力则显著下降。以10~6鸡胚半数感染量(EID_(50))接种SPF鸡后,CK/HN病毒可在鸡体内复制,通过呼吸道和泄殖腔向外排泄,感染鸡血清均转阳;H7N9(HN)/PR8接种的鸡泄殖腔和呼吸道均无病毒排出,也无血清转阳,表明H7N9(HN)/PR8病毒不能在鸡体内复制。本研究为H7N9疫苗株的构建奠定了重要基础。

关键词： H7N9流感病毒 PR8 反向遗传技术点突变疫苗株

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宿主蛋白TRIB2与流感病毒NP蛋白相互作用的研究

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中国预防兽医学报 2017年第2期39卷 85-89页

作者：周圆赵玉辉张杰赵青青周陈陈王广文梁立滨李俊平姜丽陈化兰李呈军中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150069

流感病毒的核衣壳蛋白(NP)是病毒粒子中重要的结构蛋白,参与流感病毒生命周期的多个过程。为筛选与流感病毒NP相互作用的宿主蛋白,本研究应用酵母双杂交技术(Y2H)技术从A549细胞cDNA文库中筛选到与其相互作用的宿主蛋白Tribble 2(TRIB2)... 详细信息

流感病毒的核衣壳蛋白(NP)是病毒粒子中重要的结构蛋白,参与流感病毒生命周期的多个过程。为筛选与流感病毒NP相互作用的宿主蛋白,本研究应用酵母双杂交技术(Y2H)技术从A549细胞cDNA文库中筛选到与其相互作用的宿主蛋白Tribble 2(TRIB2),并通过免疫共沉淀技术(Co-IP)试验和GST pull down试验进一步证实NP与TRIB2之间存在特异性的直接相互作用。此外,利用激光共聚焦试验证实NP与TRIB2共定位于A549细胞的细胞质内。在A549细胞中过表达TRIB2蛋白后,能够降低流感病毒的滴度,表明TRIB2具有抑制流感病毒的复制功能。本实验为研究流感病毒的复制机理奠定了基础,完善了病毒与宿主相互作用网络。

关键词：酵母双杂交 NP蛋白 TRIB2蛋白流感病毒

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共表达H5亚型AIV HA基因和IBDV VP2基因重组DEV的构建及免疫效力评价

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农业生物技术学报 2017年第7期25卷 1197-1206页

作者：李爱心丁蕾蕾刘璐高立胡玉珍陈普成姜永萍柳金雄王笑梅陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所/兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室甘肃农业大学动物医学学院

禽流感(Avian influenza,AI)和传染性法氏囊病(Infectious bursal disease,IBD)严重危害家禽养殖业,疫苗免疫是防治的主要手段之一。为探索以鸭瘟病毒(Duck enteritis virus,DEV)(又称鸭病毒性肠炎病毒)为载体,研制在鸡(Gallus gallus)中使用的AI-IBD二联疫苗的可行性,本研究利用overlap PCR及Gateway LR克隆技术,扩增出血凝素(hemagglutinin,HA)-内部核糖体进入位点(internal ribosome entry site,IRES)-病毒蛋白2(virus protein 2,VP2)和VP2-IRES-HA基因片段,并将其克隆入DEV多片段拯救系统T-us78Kan ccd B粘粒短独特区7(unique short region 7,US7)和US8位点之间,利用该系统成功拯救出两株共表达H5亚型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)HA基因和传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)VP2基因的重组病毒r DEV-HA/VP2和r DEV-VP2/HA,并对其进行了初步免疫效果评价。经系统体外实验表明,病毒传至20代,外源基因均能在重组病毒中稳定遗传和表达,且不影响载体病毒的增殖。但免疫效力实验显示,重组病毒以103半数组织培养感染剂量(tissue culture infective dose,TCID50)、104TCID50、105TCID50免疫鸡后14 d,r DEV-HA/VP2最高仅诱导对同源AIV强毒70%的免疫保护和对超强IBDV(very virulent IBDV,vv IBDV)30%的免疫保护,部分鸡中能检测到血凝抑制(hemagglutination inhibition,HI)抗体,但整体水平较低,IBD抗体未检测到;r DEV-VP2/HA最高仅诱导对vv IBDV 40%的免疫保护,不能诱导对同源AIV强毒的免疫保护,HI抗体和IBD抗体均未检测到。结果显示,以IRES串联基因构建鸭瘟载体禽流感传染性法氏囊病二联疫苗的策略不可行。本研究为以DEV为载体构建在鸡中使用的多联疫苗的研究提供参考资料。

关键词：禽流感(AI) 传染性法氏囊病(IBD) 鸭瘟病毒(DEV) 活载体疫苗

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一株低致病性H5N3亚型禽流感病毒(AIV)的生物学特性

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农业生物技术学报 2017年第7期25卷 1170-1177页

作者：关立峥孔兴天韩舒雨谷文丽刘驰煌陈思崔鹏飞胡永浩邓国华陈化兰甘肃农业大学动物医学院中国农业科学院哈尔滨兽医研究所/农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室

H5亚型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)随着其不断进化、变异及对宿主的适应,部分毒株已经稳定存在并获得对其自然宿主的高致病力,这不仅严重危害到养禽业的发展,更对人类的公共卫生安全构成潜在威胁。为了解H5N3亚型AIV的生物... 详细信息

H5亚型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)随着其不断进化、变异及对宿主的适应,部分毒株已经稳定存在并获得对其自然宿主的高致病力,这不仅严重危害到养禽业的发展,更对人类的公共卫生安全构成潜在威胁。为了解H5N3亚型AIV的生物学特性,本研究对2015年江苏省分离的一株低致病性H5N3亚型AIV(A/Duck/Jiangsu/S1665/2015)进行遗传演化分析、小鼠(Mus musculus)感染性实验和受体结合特异性实验。遗传演化分析结果表明,该病毒的8个基因片段(血凝素(hemagglutinin,HA)、神经氨酸酶(neuraminidase,NA)、碱性聚合酶蛋白1(polymerase basic protein 1,PB1)、PB2、酸性聚合酶蛋白(polymerase acid protein,PA)、核蛋白(nucleoprotein,NP)、基质蛋白(matrix protein,M)和非结构蛋白(nonstructural protein,NS))来源均不相同,具有明显的遗传多样性。小鼠感染性实验结果显示,这株病毒可以在小鼠的肺脏和鼻甲内进行有效复制,仅引起小鼠的体重出现阶段性下降,对小鼠呈现低致病性。受体结合特异性分析结果表明,这株病毒同时具有与唾液酸(sialic acid,SA)α2,3-Gal和SAα2,6-Gal受体结合的能力,具有感染人类的潜在风险。本研究通过对这株低致病性的H5N3亚型AIV的生物学特性的系统性分析,发现此株病毒的基因来源具有野鸟源性,且具有感染哺乳动物的潜在风险。研究结果对于H5N3亚型AIV的综合防控具有重要的指导意义。

关键词：禽流感病毒(AIV) H5N3 生物学特性

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一株H6N6亚型野鸟禽流感病毒全基因组序列分析以及对小鼠的感染性研究

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中国预防兽医学报 2017年第6期39卷 431-434页

作者：陈思崔鹏飞关立峥谷文丽施建忠邓国华陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点实验室黑龙江哈尔滨150069

为进一步了解2015年分离于我国新疆野鸟粪便中的一株H6N6亚型禽流感病毒(AIV)A/WB/XJ/S1541/2015(H6N6)的生物学特性,本研究对其进行了全基因组测序、遗传演化分析以及BALB/c小鼠的感染性试验。序列分析结果显示:该分离株HA蛋白裂解位... 详细信息

为进一步了解2015年分离于我国新疆野鸟粪便中的一株H6N6亚型禽流感病毒(AIV)A/WB/XJ/S1541/2015(H6N6)的生物学特性,本研究对其进行了全基因组测序、遗传演化分析以及BALB/c小鼠的感染性试验。序列分析结果显示:该分离株HA蛋白裂解位点的氨基酸序列为^(339)PQIETR↓GL^(346),仅有1个碱性氨基酸,具有低致病性AIV的分子特征。此外,分离株表面基因HA、NA均与一株H6N6亚型猪流感病毒A/swine/Guangdong/K6/2010高度同源,而内部基因均与H6N6亚型AIV A/pigeon/Guangxi/161/2014(H6N6)高度同源,提示该分离株基因来源的多样性。小鼠的感染性试验结果显示:该病毒可在小鼠的肺脏和鼻甲中有效复制,病毒滴度分别为5.33 log_(10) EID_(50)/mL、4.50 log10EID50/m L,提示其具有感染哺乳动物的潜在风险。本研究结果为H6亚型AIV的持续性监测和相关生物学特性的研究奠定基础。

关键词：禽流感病毒 H6N6 生物学特性

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禽流感病毒M2蛋白抑制细胞自噬体降解的研究

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中国预防兽医学报 2017年第1期39卷 5-9页

作者：谷琳琳马勇包红梅徐海峰孙佳善王秀荣陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

为探究禽流感病毒(AIV)M2蛋白对细胞自噬的影响,本研究构建了pEGFP-LC3和pCAF-M2重组质粒,并采用脂质体将这两种重组表达质粒共转染293T细胞或Hela细胞中,同时以单独转染这两种重组质粒的细胞作为对照组,利用间接免疫荧光和westernblot... 详细信息

为探究禽流感病毒(AIV)M2蛋白对细胞自噬的影响,本研究构建了pEGFP-LC3和pCAF-M2重组质粒,并采用脂质体将这两种重组表达质粒共转染293T细胞或Hela细胞中,同时以单独转染这两种重组质粒的细胞作为对照组,利用间接免疫荧光和westernblot的方法检测细胞自噬体及自噬流情况。自噬体检测结果表明,AIVM2蛋白能够诱导转染细胞内自噬体积累。通过LC3-IIturnover试验、mRFP-GFP-LC3双荧光指示系统以及pEGFP-LC3与LAMP1的共定位检测进一步证明,M2蛋白通过阻断自噬体与溶酶体融合,抑制溶酶体对自噬体的降解从而诱导自噬体积累。本研究揭示AIVM2蛋白对细胞自噬的发生具有重要作用,为深入研究自噬在A型流感病毒复制中的调节作用奠定基础。

关键词：细胞自噬 AIV M2蛋白

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1株猪源2009/H1N1流感病毒反向遗传系统的建立

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畜牧与兽医 2017年第1期49卷 61-64页

作者：许榜丰孟沙沙吴运谱陈艳杨焕良乔传玲陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

为建立1株猪源2009/H1N1流感病毒A/swine/Heilongjiang/44/2009(HLJ44)的反向遗传系统,利用双向表达质粒p HW2000,分别构建了该病毒株8个基因节段的重组质粒,将其共转染于293T和MDCK混合培养的细胞,拯救出重组病毒R-HLJ44。测序结果表明... 详细信息

为建立1株猪源2009/H1N1流感病毒A/swine/Heilongjiang/44/2009(HLJ44)的反向遗传系统,利用双向表达质粒p HW2000,分别构建了该病毒株8个基因节段的重组质粒,将其共转染于293T和MDCK混合培养的细胞,拯救出重组病毒R-HLJ44。测序结果表明,R-HLJ44与亲本病毒HLJ44的核苷酸序列完全一致;二者在细胞上具有相似的增殖特性;抗原性未发生变化;分别以106TCID50的剂量鼻腔感染BALB/c小鼠,结果显示R-HLJ44与亲本HLJ44在小鼠脏器中的复制滴度也基本一致。以上结果表明拯救的重组病毒保持了与亲本病毒一致的生物学特性。该病毒反向遗传系统的建立,为进一步研究H1N1亚型流感病毒的致病分子机制及新型疫苗研制等奠定了基础。

关键词：流感病毒猪 2009/H1N1 反向遗传系统

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流感病毒NP蛋白与宿主蛋白SNRPA的相互作用研究

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中国预防兽医学报 2017年第3期39卷 167-171页

作者：张杰罗维玉周圆王广文赵玉辉周陈陈黄山雨李呈军陈化兰姜丽中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150069 甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070

流感病毒核蛋白(NP)是由病毒RNA节段5编码的主要结构蛋白,与病毒基因组RNA及聚合酶(PB1、PB2、PA)构成核糖核蛋白(vRNP)复合体,是病毒基因组的转录和复制的基本功能单位。本实验室采用酵母双杂交技术从人细胞系cDNA文库中筛选与流感病... 详细信息

流感病毒核蛋白(NP)是由病毒RNA节段5编码的主要结构蛋白,与病毒基因组RNA及聚合酶(PB1、PB2、PA)构成核糖核蛋白(vRNP)复合体,是病毒基因组的转录和复制的基本功能单位。本实验室采用酵母双杂交技术从人细胞系cDNA文库中筛选与流感病毒NP蛋白相互作用的宿主蛋白U1 small nuclear ribonucleoprotein A(SNRPA)。本研究通过酵母回交验证、免疫共沉淀(Co-IP)和GST pull down试验进一步证实NP与SNRPA之间存在直接相互作用。利用siRNA干扰基因的表达后,流感病毒的复制滴度在24 h和48 h分别下降2.7倍和1.75倍,表明SNRPA蛋白表达对流感病毒的复制发挥正调控作用。本研究丰富了流感病毒蛋白与宿主蛋白之间的蛋白质调控网络,为进一步研究流感病毒复制调控的机制奠定了基础。

关键词：酵母双杂交 Co-IP NP蛋白 SNRPA蛋白相互作用

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2015—2016年湖南省长沙市活禽批发市场禽流感流行病学调查

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中国动物检疫 2018年第2期35卷 5-8页

作者：黄建龙王昌建邓国华何世成宁华杰张朝阳林源湖南省动物疫病预防控制中心湖南长沙410014 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 长沙市动物疫病预防控制中心湖南长沙410013

为了解当地活禽批发市场的禽流感病毒污染状况,提升禽流感防控针对性,2015—2016年先后4次对长沙市两大活禽批发市场进行了禽流感流行病学调查,共在35个摊位分离到禽流感病毒,发现群阳性率为43.6%,禽流感病毒总分离率为14.24%,分离到H3... 详细信息

为了解当地活禽批发市场的禽流感病毒污染状况,提升禽流感防控针对性,2015—2016年先后4次对长沙市两大活禽批发市场进行了禽流感流行病学调查,共在35个摊位分离到禽流感病毒,发现群阳性率为43.6%,禽流感病毒总分离率为14.24%,分离到H3、H5、H6、H7、H9和H10等6种亚型禽流感病毒。其中,H9和H5亚型禽流感病原阳性率较高,分别为8.7%和3.8%。调查结果表明,长沙市活禽批发市场中的禽流感病毒污染面较广。建议加强活禽市场管理,特别要做好市场的清洗消毒工作。

关键词：活禽批发市场禽流感病毒分离流行病学调查长沙市

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应用酵母双杂交系统筛选与流感病毒PB2蛋白相互作用的宿主蛋白

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中国预防兽医学报 2017年第1期39卷 15-19页

作者：孙楠梁立滨王金光李俊平罗维玉赵玉辉朱鹏阳姜丽陈化兰李呈军中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点实验室黑龙江哈尔滨150069 甘肃农业大学动物医学学院甘肃兰州730070

流感病毒PB2蛋白可以作用于病毒mRNA转录起始阶段,辅助病毒mRNA引物的合成,并能够影响病毒的宿主范围,参与禽流感病毒在哺乳动物宿主体内的适应过程。本研究利用2009甲型H1N1流感病毒PB2蛋白作为"诱饵"蛋白,通过经典酵母双杂... 详细信息

流感病毒PB2蛋白可以作用于病毒mRNA转录起始阶段,辅助病毒mRNA引物的合成,并能够影响病毒的宿主范围,参与禽流感病毒在哺乳动物宿主体内的适应过程。本研究利用2009甲型H1N1流感病毒PB2蛋白作为"诱饵"蛋白,通过经典酵母双杂交系统筛选由Calu-3、A549、THP-1和U251 4种细胞构建的cDNA文库,筛选到多个与PB2蛋白相互作用的宿主蛋白。针对其中筛选到的一种宿主蛋白FHL2,进行免疫共沉淀(Co-IP)和激光共聚焦(Confocal)试验,证实了PB2蛋白和FHL2蛋白二者之间存在相互作用,并且转染瞬时过表达FHL2发现该蛋白可以负调控流感病毒复制,为进一步研究PB2蛋白与FHL2蛋白互作及影响病毒复制的分子机制奠定了基础。

关键词：流感病毒 PB2蛋白酵母双杂交免疫共沉淀激光共聚焦 FHL2

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