检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医学报 2017年第5期37卷 818-822页

作者：程楠赵永坤于永乐希冀王化磊冯娜张渭蛟高玉伟杨松涛刘维全夏咸柱中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点实验室黑龙江哈尔滨150001 军事医学科学院军事兽医研究所吉林省人兽共患病预防与控制重点实验室吉林长春130062 中国农业大学生物学院农业生物技术国家重点实验室北京100093

本试验对HH-1/86株细小病毒进行了理化性质鉴定和全基因组序列分析。研究结果表明,电镜下可见少量直径20nm左右的立体对称细小病毒粒子。该病毒对热、酸、乙醚具有一定的耐受性,pH在5.8~6.8的0.015mol/L PBS均能凝集0.1%猪红细胞,其中pH... 详细信息

本试验对HH-1/86株细小病毒进行了理化性质鉴定和全基因组序列分析。研究结果表明,电镜下可见少量直径20nm左右的立体对称细小病毒粒子。该病毒对热、酸、乙醚具有一定的耐受性,pH在5.8~6.8的0.015mol/L PBS均能凝集0.1%猪红细胞,其中pH6.5血凝活性最佳。HH-1/86株细小病毒的全基因长5 123nt。其中,A+T含量63.65%,C+G的含量为36.35%。3′末端反向重复序列(inverted terminal repeats,ITR)形成Y型结构,长126nt;5′末端ITR形成U型结构,长198nt。利用MEGA 6.0软件的邻接法(Neighbor-Joining,Replication=1 000)对NS1和VP2基因编码氨基酸进行的种系发生树分析表明,VP2蛋白归于FPV分支,VP2蛋白10个决定抗原性、血凝性和宿主范围的关键氨基酸位点与FPV参照株一致;而NS1蛋白相对保守,归于独立的分支。

关键词：猫细小病毒血凝两端反向重复序列序列分析

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2009年-2014年我国H3N2亚型禽流感病毒生物学特性研究

2009年-2014年我国H3N2亚型禽流感病毒生物学特性研究

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第五届全国禽病分子生物技术青年工作者会议

作者：关立峥张芳肖丽崔鹏飞胡永浩陈化兰邓国华中国农业科学院哈尔滨兽医研究所/农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

H3N2亚型流感病毒具有广泛的感染宿主谱,除了可以感染野鸟和家禽外,还可以感染猪、犬、猫、雪貂等多种哺乳动物,而且是造成人的季节性流感最直接的病原之一.近年来的禽流感监测数据显示,H3N2亚型禽流感病毒在水禽中分离率相对较高、流... 详细信息

H3N2亚型流感病毒具有广泛的感染宿主谱,除了可以感染野鸟和家禽外,还可以感染猪、犬、猫、雪貂等多种哺乳动物,而且是造成人的季节性流感最直接的病原之一.近年来的禽流感监测数据显示,H3N2亚型禽流感病毒在水禽中分离率相对较高、流行地区广,病毒分离阳性率有逐年增多的趋势.为了解近年来我国H3N2亚型禽流感病毒的流行情况,评估该亚型禽流感病毒对哺乳动物感染和传播的潜在风险,对2009-2014年间在我国南方省份的家禽交易市场、养殖场和家禽屠宰场的家禽群体中采集拭子样品,采集到的样品接种鸡胚后进行病毒分离,对不同群体分离到的H3亚型禽流感病毒进行病毒表面基因的序列测定和分析基础上,选取26株代表性病毒进行病毒的全基因组序列分析、抗原性分析、小鼠感染性和致病性实验、受体结合特异性分析以及病毒在豚鼠中的复制能力、直接接触传播和呼吸道飞沫传播能力的检测.

关键词：禽流感病毒全基因组序列抗原性感染性致病性

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禽白血病病毒对禽流感疫苗免疫效果的影响

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中国预防兽医学报 2016年第5期38卷 394-397页

作者：李鑫曾显营高玉龙白洁石文军陈化兰田国彬中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点开放实验室/农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

为研究禽白血病病毒(ALV)对禽流感(AI)疫苗免疫效果的影响,本研究将1日龄SPF鸡经腹腔接种ALV HLJ09DH02株后,于21日龄免疫重组禽流感病毒(AIV)灭活疫苗(H5N1亚型,Re-8)或禽流感-新城疫重组二联活疫苗(r LH5-8),免疫后与未感染ALV的免疫... 详细信息

为研究禽白血病病毒(ALV)对禽流感(AI)疫苗免疫效果的影响,本研究将1日龄SPF鸡经腹腔接种ALV HLJ09DH02株后,于21日龄免疫重组禽流感病毒(AIV)灭活疫苗(H5N1亚型,Re-8)或禽流感-新城疫重组二联活疫苗(r LH5-8),免疫后与未感染ALV的免疫对照鸡同时检测血清HI抗体并采用H5N1亚型高致病性AIV攻毒。结果显示:实验鸡感染ALV后HI抗体滴度均显著低于相应的未感染ALV的免疫对照组(p<0.05)。感染ALV后,免疫Re-8灭活疫苗及其对照组攻毒后的排毒鸡数分别为4/10和0/10,存活率分别为90%和100%;感染ALV后,免疫r LH5-8活疫苗及其对照组攻毒后的排毒鸡数分别为10/10和0/10,存活率分别为0和100%;未感染ALV的AI免疫鸡均不发病、不死亡、不排毒;空白对照鸡攻毒后3 d内全部死亡并且排毒。本研究表明,ALV对AI灭活疫苗和活疫苗均具有显著免疫抑制作用,建议加强种鸡ALV的净化,降低对AI等疫苗免疫效果的影响。

关键词：禽白血病禽流感疫苗免疫效果影响

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Wnt/β-Catenin信号通路对流感病毒复制的影响

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中国预防兽医学报 2016年第5期38卷 343-347页

作者：王金光梁立滨朱鹏阳李俊平孙楠赵玉辉罗维玉姜丽陈化兰李呈军中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

Wnt/β-Catenin信号通路是广泛存在于多种真核生物中的一条高度保守的信号通路,但对于该信号通路是否参与流感病毒的复制及其对流感病毒致病性的影响目前还缺乏深入研究,为研究其对流感病毒复制的影响,本研究通过转染Wnt/β-Catenin信... 详细信息

Wnt/β-Catenin信号通路是广泛存在于多种真核生物中的一条高度保守的信号通路,但对于该信号通路是否参与流感病毒的复制及其对流感病毒致病性的影响目前还缺乏深入研究,为研究其对流感病毒复制的影响,本研究通过转染Wnt/β-Catenin信号通路荧光素酶报告质粒Topflash试验,表明甲型H1N1流感病毒感染后可以抑制Wnt/β-Catenin信号通路的激活。而当先转染β-Catenin蛋白真核表达重组质粒激活Wnt/β-Catenin信号通路后,再感染甲型H1N1流感病毒时,结果显示病毒复制受到了抑制,并且这种抑制作用不依赖于病毒NS1蛋白C端的PBM结构域。此外,将不同亚型流感病毒NS1蛋白真核表达重组质粒与Topflash质粒共转染,以检测其对Wnt/β-Catenin信号通路的激活能力时,结果表明H1N1的NS1可以更显著地激活Wnt/β-Catenin信号通路。本研究为进一步深入研究流感病毒感染与Wnt/β-Catenin信号通路的相互关系奠定了基础。

关键词：流感病毒 Wnt/β-Catenin信号通路 NS1蛋白

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我国部分省份猪群中流感病毒血清学抗体的调查

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中国预防兽医学报 2016年第1期38卷 11-14页

作者：隋金钰杨大为杨焕良陈艳许榜丰尹航乔传玲陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

为了解近年来我国猪群中流感病毒的感染与流行情况，本研究分别对2013年11～12月期间采集于福建等9个重点养猪省份的2198份以及2014年3～4月期间采自于广东和湖南两省的3654份猪血清样品进行了血凝抑制（HI）抗体的检测。选取欧亚类禽型... 详细信息

为了解近年来我国猪群中流感病毒的感染与流行情况，本研究分别对2013年11～12月期间采集于福建等9个重点养猪省份的2198份以及2014年3～4月期间采自于广东和湖南两省的3654份猪血清样品进行了血凝抑制（HI）抗体的检测。选取欧亚类禽型猪H1N1（EAH1N1）、2009甲型H1N1（2009／H1N1）、H3N2亚型猪流感病毒（SIV）、H5N1禽流感病毒（AIV）、H9N2AIV及H7N9流感病毒制备的HI标准抗原作为检测抗原。结果显示，2013年我国猪群中EAH1N1、2009／H1N1、H3N2SIV、H5N1AⅣ、H9N2AIV及H7N9流感病毒平均抗体阳性率分别为49，73％、11．87％、1．71％、0、0、1．36％：2014年分别为48。52％、12．10％、1．04％、0、0、2．05％。检测结果表明2013年～2014年间我国猪群中H1N1亚型SIV感染比较普遍，H3N2、H9N2流感病毒抗体阳性率较低，未检测到H5N1、H7N9流感病毒抗体。

关键词：流感病毒血清学抗体猪血凝抑制试验

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NA蛋白对流感病毒受体结合特性影响的研究

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中国预防兽医学报 2016年第7期38卷 518-522页

作者：马树杰孔晖晖施建忠谷春阳宋洋铭曲志远关云涛陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

为研究两株H7亚型流感病毒A/chicken/Jilin/SD020/2014(H7N2)(简称JL/020)和A/Anhui/1/2013(H7N9)(简称AH/1)受体结合特异性差异的影响机制,本实验利用反向遗传操作技术,构建一系列重配病毒和HA基因点突变病毒,检测其对受体结合特性的... 详细信息

为研究两株H7亚型流感病毒A/chicken/Jilin/SD020/2014(H7N2)(简称JL/020)和A/Anhui/1/2013(H7N9)(简称AH/1)受体结合特异性差异的影响机制,本实验利用反向遗传操作技术,构建一系列重配病毒和HA基因点突变病毒,检测其对受体结合特性的影响。固相ELISA检测结果表明血凝素蛋白(HA)中的57和312位氨基酸不影响流感病毒的受体结合特性,而神经氨酸酶蛋白(NA)使r-JL/020(AH/1骨架)结合SAα2,3Gal受体的结合能力高于r-AH/1(R57K/R312K),表明NA影响了流感病毒受体结合特性;同源建模进一步发现HA中的57和312位点与流感病毒受体结合结构域相距较远;交叉血凝抑制试验(HI)结果表明,H7单因子血清和H7N9全病毒血清对拯救的JL/020和AH/1病毒株的抑制价没有差异,而N2单因子血清对病毒的抑制能力存在差异。以上结果表明,NA蛋白影响了流感病毒的受体结合特性。本研究表明,除HA以外,NA也能够影响流感病毒的受体结合特性,该实验为进一步研究流感病毒受体结合特性提供了实验依据。

关键词：流感病毒受体结合特性血凝抑制 NA蛋白

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两株H3N8亚型禽流感病毒(AIV)的生物学特性

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农业生物技术学报 2016年第7期24卷 980-986页

作者：崔鹏飞卢昆鹏陈思肖丽关立峥邓国华陈化兰甘肃农业大学动物医学院中国农业科学院哈尔滨兽医研究所/农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室

H3N8亚型流感病毒宿主范围广泛,除了可以感染野鸟和家禽外,还可以感染多种哺乳动物,并且H3N8亚型流感病毒跨物种传播的现象也时有发生,对养殖业和人类生命健康都具有重要威胁。为了解H3N8亚型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)的... 详细信息

H3N8亚型流感病毒宿主范围广泛,除了可以感染野鸟和家禽外,还可以感染多种哺乳动物,并且H3N8亚型流感病毒跨物种传播的现象也时有发生,对养殖业和人类生命健康都具有重要威胁。为了解H3N8亚型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)的生物学特性,本研究对2013年贵州省分离的两株H3N8亚型AIV(A/duck/Guizhou/S1092/2013(H3N8)(简称DK/GZ/S1092/2013)和A/duck/Guizhou/S1145/2013(H3N8)(简称DK/GZ/S1145/2013))进行了遗传演化分析、小鼠(Mus musculus)感染性实验和受体结合特异性实验。遗传演化分析结果表明,这两株病毒具有明显的遗传多样性,除了血凝素(hemagglutinin,HA)基因位于同一个进化分支外,其他7个基因片段均具有不同起源。感染性实验结果表明,这两株病毒不需要提前适应就可以在小鼠的肺脏和鼻甲内有效复制,对小鼠呈现低致病性,小鼠感染病毒后未出现明显临床症状,且DK/GZ/S1092/2013仅引起小鼠的体重下降1.8%,DK/GZ/S1145/2013仅引起小鼠的体重下降0.8%。受体结合特异性分析结果表明,这两株病毒同时具有结合禽源唾液酸(sialic acid,SA)α2,3-Gal受体和人源SAα2,6-Gal受体的能力,具有感染人类的潜在风险。本研究通过对两株H3N8亚型AIV的生物学特性进行系统分析,发现H3N8亚型AIV具有感染哺乳动物的潜在风险。研究结果对于H3N8亚型AIV的综合防控具有重要的指导意义。

关键词：禽流感病毒(AIV) H3N8 生物学特性

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人源肺细胞cDNA文库构建及与流感病毒NP互作宿主蛋白的筛选

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中国农业科学 2016年第22期49卷 4451-4459页

作者：罗维玉朱鹏阳张杰胡永浩孔晖晖梁立滨周圆李呈军姜丽陈化兰甘肃农业大学动物医学院中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室

【目的】构建肺组织细胞Calu-3及A549的高质量酵母cDNA文库并筛选与流感病毒NP蛋白相互作用的宿主因子,为深入研究流感病毒NP蛋白功能、病毒复制及致病机制奠定基础。【方法】提取等量Calu-3及A549细胞的总RNA,混合后反转录生成cDNA,利... 详细信息

【目的】构建肺组织细胞Calu-3及A549的高质量酵母cDNA文库并筛选与流感病毒NP蛋白相互作用的宿主因子,为深入研究流感病毒NP蛋白功能、病毒复制及致病机制奠定基础。【方法】提取等量Calu-3及A549细胞的总RNA,混合后反转录生成cDNA,利用长距离PCR(LD-PCR)扩增合成dscDNA,用CHROMA SPINTM+TE-400纯化柱纯化dsDNA,按照Clontech公司的Make Your Own"Mate&Plate"Library System操作程序,将带有同源臂的dscDNA与线性化p GADT7-Rec共同转化Y187酵母感受态细胞,涂布SD/-Leu平板后于30℃培养4d左右,收集所有菌落,混匀分装即为Calu-3和A549细胞cDNA的酵母文库,并对文库库容、滴度及多样性进行分析。利用Eco RⅠ和Bam HⅠ双酶切将A/Auhui/2/2005(H5N1)NP定向插入pGBKT7载体,构建高致病性流感病毒NP的诱饵质粒p GBKT7-NP,经验证该质粒无自激活活性,并进一步采用构建完成的Calu-3/A549细胞酵母文库进行杂交筛选,筛选得到的正确阅读的猎物质粒与诱饵质粒共转Y2H Gold酵母菌,分别以BD-P53/AD-T7作为阳性对照和BD-Lam/AD-T7作为阴性对照,挑取最终在SD/-Trp/-Leu/-Ade/-His/X-α-gal/Aro A(SD/-4/X/A)固体培养板上生长良好且变蓝的菌落,即为候选与目标蛋白互作阳性的蛋白,提取酵母质粒,进行测序分析、序列比对和Gene Ontology分析。【结果】提取两种细胞RNA 28S与18S条带清晰,5S条带暗淡,表明所提RNA质量较高,基本无降解;对提取的RNA反转录纯化获得dscDNA,dscDNA条带呈弥散状,片段大小分布于500—2 000bp之间,说明不同丰度及大小的RNA均成功反转录;构建的dscDNA文库库容为1.5×10~7,滴度为2.2×10~8cfu/m L,重组率为88%,PCR鉴定文库插入片段,条带大小不一、多样性好;利用诱饵质粒与文库进行双杂交筛选,回交验证后得到11个与NP蛋白互作的宿主因子。经Gene Ontology分析显示,11个宿主因子参与的生物过程包括:细胞凋亡、胚胎发育、可变剪接、转录调节及细胞增殖等;涉及的分子功能包括:GTP结合活性、金属离子结合活性、DNA结合活性及转录因子活性。【结论】成功构建同时含有Calu-3和A549两种人源肺细胞cDNA的酵母文库,文库覆盖cDNA更全面,为后期筛选与流感病毒其它蛋白互作的宿主蛋白奠定基础,筛选得到与NP蛋白存在相互作用的宿主因子为进一步深入研究NP功能提供了可靠的前期数据。

关键词：流感病毒 NP蛋白 cDNA文库构建酵母双杂交系统宿主因子

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四株鸭源H3N8亚型禽流感病毒对SPF鸡的感染性分析

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畜牧兽医学报 2016年第6期47卷 1209-1214页

作者：崔鹏飞彭志张芳关立峥肖丽李莉莎邓国华陈化兰甘肃农业大学动物医学院兰州730070 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

为评价鸭源H3N8亚型禽流感病毒对鸡的感染风险,作者选取了4株HA基因位于不同进化分支的病毒进行了SPF鸡的感染性试验。结果表明,这4株H3N8亚型禽流感病毒不需要提前适应就可以感染鸡,病毒对鸡不同脏器的组织嗜性存在较大差异。鸡感染病... 详细信息

为评价鸭源H3N8亚型禽流感病毒对鸡的感染风险,作者选取了4株HA基因位于不同进化分支的病毒进行了SPF鸡的感染性试验。结果表明,这4株H3N8亚型禽流感病毒不需要提前适应就可以感染鸡,病毒对鸡不同脏器的组织嗜性存在较大差异。鸡感染病毒后未表现出明显的临床症状,大部分感染鸡可以通过呼吸道和消化道向外排毒。此外,DK/ZJ/S4088/2013和DK/GZ/S1245/2013这两株病毒还可以由感染组的鸡传播给接触组的鸡。综上所述,本研究中的4株鸭源H3N8亚型禽流感病毒具有感染鸡并在鸡群间传播的潜在风险,在家禽的饲养和流通环节中应尽量避免鸡群与鸭群的接触。

关键词：禽流感病毒 H3N8 鸡感染性

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类禽型H1N1猪流感病毒HA蛋白单克隆抗体的制备及特性分析

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中国兽医科学 2016年第4期46卷 491-495页

作者：杨大为隋金钰吴运谱许榜丰杨焕良陈艳乔传玲陈化兰东北农业大学黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

为获得类禽型H1N1猪流感病毒（SIV）血凝素（HA）蛋白的单克隆抗体（McAb）,选取病毒A/swine/Zhejiang/245/2013（H1N1）,经增殖、纯化后作为免疫原,3次免疫BALB/c小鼠,取其脾与骨髓瘤细胞（SP2/0）进行融合,利用ELISA方法进行筛选,克... 详细信息

为获得类禽型H1N1猪流感病毒（SIV）血凝素（HA）蛋白的单克隆抗体（McAb）,选取病毒A/swine/Zhejiang/245/2013（H1N1）,经增殖、纯化后作为免疫原,3次免疫BALB/c小鼠,取其脾与骨髓瘤细胞（SP2/0）进行融合,利用ELISA方法进行筛选,克隆得到4株杂交瘤细胞株,分别命名为5H7、2H3、2G4、8D7。4株单克隆抗体的腹水ELISA效价为1×10^9以上,HI效价高于8 log2。Western-blot试验与间接免疫荧光试验结果表明,4株McAbs均可与病毒HA蛋白发生特异性的反应。本研究将为进一步建立H1亚型SIV的相关检测方法及开展HA蛋白表位的研究奠定基础。

关键词：猪流感病毒单克隆抗体类禽型H1N1

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