检索结果-内蒙古大学图书馆

中国农业科技导报 2014年第1期16卷 46-51页

作者：赵双成柳金雄陈普成曾显营葛金英乔传玲田国彬姜永萍陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室哈尔滨150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部人兽共患病重点开放实验室哈尔滨150001

为比较以我国首个H5亚型禽流感病毒分离株A/Goose/Guangdong/1/1996(H5N1)[GS/GD/96]为基础构建的新型重组禽流感病毒灭活疫苗(H5N1亚型,Re-1株)、禽流感重组鸡痘病毒载体活疫苗(H5亚型)、禽流感、新城疫重组二联活疫苗(rLH5-1株)以及... 详细信息

为比较以我国首个H5亚型禽流感病毒分离株A/Goose/Guangdong/1/1996(H5N1)[GS/GD/96]为基础构建的新型重组禽流感病毒灭活疫苗(H5N1亚型,Re-1株)、禽流感重组鸡痘病毒载体活疫苗(H5亚型)、禽流感、新城疫重组二联活疫苗(rLH5-1株)以及禽流感DNA疫苗(H5亚型,pH5-GD)的免疫保护效力。分别将四种禽流感疫苗以2.8μg HA/0.3 mL(肌肉注射)、103PFU/100μL(刺种)、106EID50/100μL(滴鼻、点眼)、15μg/200μL(肌肉注射)等不同剂量和方式免疫3周龄SPF鸡,首次免疫3周后再加强免疫一次,加强免疫2周后用106EID50的高致病力禽流感病毒(HPAIV)GS/GD/96鼻腔途径进行攻击,观察发病与死亡情况。分别于攻毒后第3 d、第5 d、第7 d采集喉头及泄殖腔拭子进行病毒分离、滴定检测排毒情况,同时检测免疫及攻毒后血清HI抗体的动态变化。所有疫苗均可对免疫鸡形成100%完全保护(不发病、不致死、不排毒);在病毒攻击前,灭活疫苗(H5N1亚型,Re-1株)、禽流感重组鸡痘病毒载体活疫苗(H5亚型)、禽流感、新城疫重组二联活疫苗(rLH5-1株)以及禽流感DNA疫苗(H5亚型,pH5-GD)所诱导的HI抗体平均水平分别为8.75log2、6.5log2、5.13log2和7.88log2。新型的基因工程疫苗具有良好的免疫保护性,已经或将在H5亚型HPAIV的防治实践中起到有益的补充作用。

关键词：禽流感 H5N1 疫苗保护效力

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一株鸭源H8N4亚型禽流感病毒分离株的全基因组序列分析及致病性的研究

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中国预防兽医学报 2014年第12期36卷 922-925,929页

作者：王晶张芳卢坤鹏关立峥肖丽彭志邓国华陈化兰湖南农业大学湖南长沙410128 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点实验室黑龙江哈尔滨150001

本研究对2012年从湖南活禽市场中分离到的一株鸭源H8N4亚型禽流感病毒(AIV)A/duck/Hu N/S3160/2012(H8N4)进行全基因组序列和进化分析,并对其进行SPF鸡、SPF鸭和BALB/c小鼠的致病性试验。序列分析显示:HA裂解位点序列为339PSIEPK↓GLF3... 详细信息

本研究对2012年从湖南活禽市场中分离到的一株鸭源H8N4亚型禽流感病毒(AIV)A/duck/Hu N/S3160/2012(H8N4)进行全基因组序列和进化分析,并对其进行SPF鸡、SPF鸭和BALB/c小鼠的致病性试验。序列分析显示:HA裂解位点序列为339PSIEPK↓GLF347,为典型的低致病性AIV特征。内部基因来源较复杂,Hu N/160/12的PB1、NS基因分别与A/spot-billed duck/Xianghai/427/2011(H5N2)和A/wild bird/Korea/A81/2009(H5N2)的同源性最高,其余内部基因同源性最高的病毒株来自H2、H3、H4、H7、H10等亚型分离株,呈现明显的异源性。感染性试验结果显示,病毒在SPF鸭体内可以通过呼吸道和消化道向外排毒,并且能够在气管、肾脏、盲肠扁桃体及法氏囊检测到病毒,而不能在鸡体内有效复制及排毒。对小鼠的感染性试验结果显示,仅在鼻甲和肺检测到病毒存在,其他脏器病毒滴定结果为阴性,体重呈一过性下降,表明该病毒为低致病性AIV。

关键词：禽流感病毒 H8N4亚型基因组分析致病性

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2009-2011年环洞庭湖区主要活禽批发市场低致病禽流感监测情况

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中国人兽共患病学报 2014年第10期30卷 1075-1078页

作者：黄建龙王昌建邓国华谭丹范仲鑫何世成朱春霞汪洪冰刘道新湖南省动物疫病预防控制中心长沙410014 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

目的了解环洞庭湖区主要活禽批发市场低致病性禽流感病毒的分布和流行情况,为该地区活禽批发市场低致病性禽流感的防控措施提供一些依据。方法对在活禽批发市场上采集的拭子样品先由尿囊腔接种SPF鸡胚,然后用血凝试验(HA)测定所收集的... 详细信息

目的了解环洞庭湖区主要活禽批发市场低致病性禽流感病毒的分布和流行情况,为该地区活禽批发市场低致病性禽流感的防控措施提供一些依据。方法对在活禽批发市场上采集的拭子样品先由尿囊腔接种SPF鸡胚,然后用血凝试验(HA)测定所收集的尿囊液,对HA测定有滴度的再进行血凝抑制试验(HI)和RT-PCT方法相结合鉴定病毒的亚型。结果2009-2011年冬春季节,我们在环洞庭湖地区主要活禽批发市场上共分离到627株低致病性禽流感病毒,总的分离率为22.2%,其中鸭拭子低致病性禽流感病毒的分离率最高,达到24.6%,其次是鸡拭子,达到21.5%,鹅拭子为11%。在所监测的5家活禽批发市场中共分离到H3、H4、H6、H9、H10型和H11等6种亚型的低致病性禽流感病毒,其中H9、H6和H4亚型比较高,其分离率分别可达到11%、6.3%和3.4%。结论活禽批发市场中低致病性禽流感隐性带毒的情况普遍存在,其发生禽流感疫情的威胁较大。建议整顿规范市场经营管理,特别是要建立活禽交易市场定期休市制度。

关键词：低致病性禽流感活禽批发市场监测

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甲流病毒NS基因降低H5N1禽流感病毒对小鼠的致病力的研究

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中国预防兽医学报 2014年第3期36卷 243-245页

作者：孔晖晖张乾义张莹谷春阳姜永萍关云涛陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001 甘肃农业大学甘肃兰州730070

为研究NS基因对流感病毒致病力的影响,本实验以一株H5N1禽流感病毒(AIV)A/duck/Guangxi/35/2001(DK/35)为亲本病毒株,利用反向遗传技术,以我国首例甲型H1N1流感病毒分离株A/Sichuan/01/2009(SC/01)的NS基因对DK/35株进行单基因替换,拯... 详细信息

为研究NS基因对流感病毒致病力的影响,本实验以一株H5N1禽流感病毒(AIV)A/duck/Guangxi/35/2001(DK/35)为亲本病毒株,利用反向遗传技术,以我国首例甲型H1N1流感病毒分离株A/Sichuan/01/2009(SC/01)的NS基因对DK/35株进行单基因替换,拯救出一株重组H5N1 AIV。动物实验表明,SC/01株的NS基因能够使DK/35株对小鼠的致病力减弱。我们推测SC/01株的NS基因主要是通过调节宿主干扰素的产生致弱DK/35株的毒力。进一步对致弱机制进行系统研究,为生产弱毒活疫苗提供一种新的策略。

关键词： H5N1禽流感病毒重组致病性 NS基因

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H5N1亚型禽流感病毒感染SPF鸡脾脏蛋白质组分析

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中国预防兽医学报 2014年第7期36卷 519-523页

作者：赵玉辉陈普成包红梅王秀荣李广兴东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

为鉴定H5N1亚型禽流感病毒(AIV)感染鸡脾脏的差异表达蛋白,本研究利用双向电泳(2-DE)和质谱(MS)技术相结合的蛋白质组学方法对AIV感染的鸡脾脏蛋白进行检测。通过2-DE图谱分析,获得37个差异表达蛋白点,经MS鉴定出36个差异蛋白点;GO软件... 详细信息

为鉴定H5N1亚型禽流感病毒(AIV)感染鸡脾脏的差异表达蛋白,本研究利用双向电泳(2-DE)和质谱(MS)技术相结合的蛋白质组学方法对AIV感染的鸡脾脏蛋白进行检测。通过2-DE图谱分析,获得37个差异表达蛋白点,经MS鉴定出36个差异蛋白点;GO软件注释分析显示差异蛋白参与多种重要的生物学过程,包括代谢、合成、运输、生物调节和免疫反应等;荧光定量PCR(qPCR)验证表明感染组中组织转谷氨酰胺酶(TGM2)、结蛋白(DES)、β-2微球蛋白(B2M)基因呈现上调趋势,而P40核糖体相关蛋白(RPSA)、肌动蛋白相关蛋白(ACTR3)基因与对照组相比表达水平下调,这些基因表达趋势均与2-DE结果一致。本研究结果为进一步研究宿主与病毒相互作用和抗病毒感染的机制奠定了基础。

关键词：禽流感病毒脾脏双向凝胶电泳蛋白质组

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H5亚型禽流感病毒LAMP快速检测方法的建立

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中国预防兽医学报 2014年第2期36卷 107-110页

作者：包红梅李一经王秀荣陈化兰东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

为建立快速检测H5亚型禽流感病毒(AIV)的方法,本研究根据GenBank中登录的H5亚型AIV HA基因序列,设计了一套特异识别HA基因序列中6个不同区段的环介导恒等温扩增(LAMP)引物,建立了基于LAMP技术检测H5亚型AIV的检测方法。结果表明,该方法... 详细信息

为建立快速检测H5亚型禽流感病毒(AIV)的方法,本研究根据GenBank中登录的H5亚型AIV HA基因序列,设计了一套特异识别HA基因序列中6个不同区段的环介导恒等温扩增(LAMP)引物,建立了基于LAMP技术检测H5亚型AIV的检测方法。结果表明,该方法对H5 AIV RNA的最小检测限为0.1 pfu,灵敏度高于普通一步法RT-PCR 10倍;扩增反应可以在30 min内完成;在反应体系中添加钙黄绿素(FD)荧光染料后,可以通过肉眼观察有无荧光直接判定结果。灵敏性及特异性试验表明,该方法灵敏度高、特异性好,能够作为H5亚型AIV的病原学快速检测方法。

关键词：禽流感病毒 LAMP方法 H5亚型禽流感病毒

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表达传染性法氏囊病毒VP2蛋白的重组火鸡疱疹病毒的构建

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中国预防兽医学报 2014年第7期36卷 515-518页

作者：李奇蒙陈普成柳金雄姜永萍王笑梅田雨胡永浩陈化兰甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

为构建表达传染性法氏囊病毒(IBDV)VP2蛋白的重组火鸡疱疹病毒(rHVT-VP2),本研究利用RT-PCR方法扩增IBDV的VP2基因构建了重组真核表达质粒pCAGG-VP2,并采用限制性内切酶将携带Pec复合启动子和CMV增强子的VP2基因表达盒(Pec-VP2)切下,连... 详细信息

为构建表达传染性法氏囊病毒(IBDV)VP2蛋白的重组火鸡疱疹病毒(rHVT-VP2),本研究利用RT-PCR方法扩增IBDV的VP2基因构建了重组真核表达质粒pCAGG-VP2,并采用限制性内切酶将携带Pec复合启动子和CMV增强子的VP2基因表达盒(Pec-VP2)切下,连接于Gateway系统入门质粒pENTR构建pENTR-VP2。采用Gateway LR克隆技术将pENTR-VP2与构建的重组粘粒f5354ccdBK+共同参与基因片段互换反应,构建重组粘粒f5354-VP2。f5354-VP2与其他4个相互重叠覆盖HVT全基因组的粘粒经酶切线性化后共同转染CEF细胞,并拯救出重组病毒rHVT-VP2。将重组病毒在CEF细胞中连续传代20次,每隔5代采用PCR、western blot和间接免疫荧光进行检测,结果表明VP2蛋白均得到稳定地表达。rHVT-VP2的构建为进一步研究其免疫学特性奠定了基础。

关键词：传染性法氏囊病毒火鸡疱疹病毒 VP2

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2012年-2013年我国养猪重点省份猪流感的血清学调查

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中国预防兽医学报 2014年第6期36卷 431-434页

作者：刘丽萍乔传玲杨焕良隋金钰王昌建陈艳邱立新唐小明何世成陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001 湖南省动物疫病预防控制中心湖南长沙410002

为进一步了解我国猪流感病毒（SIV）的流行现状，本研究于2012年10月至2013年12月从全国养猪重点省份的养殖场、屠宰场采集猪血清样品共计5 856份，以类禽型H1N1（EA H1N1）、2009甲型H1N1（pdm/09 H1N1）和H3N2亚型SIV 抗原作为标准抗... 详细信息

为进一步了解我国猪流感病毒（SIV）的流行现状，本研究于2012年10月至2013年12月从全国养猪重点省份的养殖场、屠宰场采集猪血清样品共计5 856份，以类禽型H1N1（EA H1N1）、2009甲型H1N1（pdm/09 H1N1）和H3N2亚型SIV 抗原作为标准抗原，采用血凝抑制（HI）试验方法进行抗体检测。结果显示，我国猪群中SIV抗体阳性率分别为55.52 %、13.92 %和2.00 %，其中EA H1N1 SIV抗体平均阳性率高于其它亚型。2013年1月和3月份，又集中在广东和湖南两个省份的部分养殖场和屠宰场采集猪血清样品共计9 910份，采用ELISA进行抗体检测。结果共检出阳性血清3 518份，平均阳性率分别为36.14 %和34.89 %。本实验结果表明2012年～2013年我国猪群中SIV感染比较普遍。

关键词：猪流感血清学抗体血凝抑制 ELISA

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猪caspase-1 p20多克隆抗体制备及其在猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒感染中的初步应用

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中国预防兽医学报 2014年第2期36卷 98-101页

作者：刘园园李江南刘琴芳张枫张利杰黄丽穆杨翁长江西北农林科技大学动物医学院陕西杨凌712100 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点实验室黑龙江哈尔滨150001

为研究猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)在感染细胞中对半胱氨酸蛋白水解酶Ⅰ(caspase-1)的激活作用,本研究以PRRSV HuN4株感染猪肺泡巨噬细胞(PAM)的cDNA为模板,构建caspase-1 p20蛋白的重组表达质粒,以表达的重组蛋白p20为抗原制备... 详细信息

为研究猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)在感染细胞中对半胱氨酸蛋白水解酶Ⅰ(caspase-1)的激活作用,本研究以PRRSV HuN4株感染猪肺泡巨噬细胞(PAM)的cDNA为模板,构建caspase-1 p20蛋白的重组表达质粒,以表达的重组蛋白p20为抗原制备了兔抗猪p20的多克隆抗体。利用制备的多抗对PRRSV HuN4株(0.1 MOI)感染的PAM进行western blot检测,结果表明在PRRSV感染PAM 24 h后胞内caspase-1被大量诱导表达,同时caspase-1被水解激活并释放出p20。该研究结果为进一步阐明PRRSV感染细胞后引起IL-1β升高的分子机制研究奠定了基础。

关键词：猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒肺泡巨噬细胞半胱氨酸蛋白水解酶I p20 兔源多抗

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蓝舌病病毒一步RT-PCR检测方法的建立

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中国预防兽医学报 2014年第9期36卷 712-714页

作者：冯瑜菲赵国辉徐青元杨涛孙恩成李俊平吴东来东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

为建立蓝舌病病毒（BTV）群特异性核酸检测方法,本研究针对BTV S10基因保守区域设计并合成1对特异性引物,建立了一步RT-PCR检测方法,并分别进行了特异性试验、敏感性试验以及临床样品的检测.实验结果表明：该方法对BTV1～24型均有特异... 详细信息

为建立蓝舌病病毒（BTV）群特异性核酸检测方法,本研究针对BTV S10基因保守区域设计并合成1对特异性引物,建立了一步RT-PCR检测方法,并分别进行了特异性试验、敏感性试验以及临床样品的检测.实验结果表明：该方法对BTV1～24型均有特异性反应,而对茨城病毒（IBAV）、中山病毒（CV）和赤羽病病毒（AKAV）无交叉反应,具有良好的特异性;最低检出量为102 TCID50/mL.此外,该方法能有效的从羊的抗凝血样品中检测出BTV核酸.本研究所建立的一步RT-PCR检测方法可以用于BTV的快速检测及流行病学调查.

关键词：蓝舌病病毒分子诊断 bluetongue virus (BTV)

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