检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2010年第4期32卷 301-303页

作者：许静宋家升苏胜杰李雁冰施建忠陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感开放实验室黑龙江哈尔滨150001 内蒙古农业大学动物科学与医学学院内蒙古呼和浩特010018

为评估H5N1亚型禽流感病毒(AIV)在实验室环境下对鸭的致病力,本研究以无特殊病原(SPF)鸭为模型,对我国近年分离的7株病毒进行了致病力分析。结果发现其中4株病毒对鸭致死率为100%,2株病毒对鸭的致死率分别为60%和80%,另外1株病毒,A/goos... 详细信息

为评估H5N1亚型禽流感病毒(AIV)在实验室环境下对鸭的致病力,本研究以无特殊病原(SPF)鸭为模型,对我国近年分离的7株病毒进行了致病力分析。结果发现其中4株病毒对鸭致死率为100%,2株病毒对鸭的致死率分别为60%和80%,另外1株病毒,A/goose/Hubei/51/05(GS/HB/51/05),对鸭无致病力。本研究还发现,与高致病力毒株一样,GS/HB/51/05也可在鸭体内呈全身性复制,并且可通过喉头和泻殖腔向外排泄。我们推测GS/HB/51/05可能是中国南方出现的其他对鸭呈高致病力的H5N1病毒的祖先,对这些病毒的系统研究,可揭示H5N1亚型AIV对鸭的致病力遗传机制。

关键词：禽流感病毒 H5N1亚型感染鸭

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表达绿色荧光蛋白重组狂犬病病毒Flury-LEP的构建及其用于中和抗体检测的研究

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中国预防兽医学报 2010年第8期32卷 581-585页

作者：华涛陶丽红葛金英王喜军沈向真步志高南京农业大学动物医学院江苏南京210095 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开发实验室黑龙江哈尔滨150001

为确定狂犬病病毒(RV)Flury-LEP株外源基因的插入位点及其中和抗体快速检测方法,本研究在建立了RVFlury-LEP株反向遗传操作系统的基础上,构建了表达增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的重组LEP基因组cDNA克隆pCI-LEP-EGFP,并成功拯救出重组病毒(... 详细信息

为确定狂犬病病毒(RV)Flury-LEP株外源基因的插入位点及其中和抗体快速检测方法,本研究在建立了RVFlury-LEP株反向遗传操作系统的基础上,构建了表达增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的重组LEP基因组cDNA克隆pCI-LEP-EGFP,并成功拯救出重组病毒(rLEP-EGFP)。rLEP-EGFP的生物学特性和野生型LEP(wtLEP)在NA细胞和BHK-21细胞中的生长动力学及对小鼠的致病性没有显著差异。rLEP-EGFP在BHK-21细胞中连续传代9次,各代次重组病毒均稳定表达EGFP。重组表达的EGFP可用于中和抗体检测,rLEP-EGFP免疫犬血清经间接免疫荧光(IFA)或荧光下直接观察检测RV中和抗体滴度,两种检测结果显示较好的相似性(p>0.05)。本研究为研制以Flury-LEP株活载体多价疫苗奠定了基础,并为病毒中和抗体的检测提供了更为快捷的新方法。

关键词：狂犬病病毒 Flury-LEP株 EGFP 反向遗传操作多价疫苗病毒中和抗体

来源：评论

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A型禽流感病毒M2蛋白胞外功能区(M2e)基因的原核表达和免疫原性分析

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中国兽医科学 2010年第4期40卷 357-362页

作者：张新涛刘明杜金玲刘春国李洪涛孙恩成石薇琳中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室农业部动物流感开放实验室及国家禽流感参考实验室OIE禽流感参考实验室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030 黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319

为研究A型禽流感病毒M2蛋白胞外功能区(M2e)蛋白亚单位疫苗在鸡体的免疫保护力,利用笔者所在实验室已构建的含M2e基因的质粒pGEM-T-1459,获得顺次串联的基因片段3M2e,将其克隆到原核表达载体pMAL-C2x中,经酶切和DNA测序鉴定正确后转化... 详细信息

为研究A型禽流感病毒M2蛋白胞外功能区(M2e)蛋白亚单位疫苗在鸡体的免疫保护力,利用笔者所在实验室已构建的含M2e基因的质粒pGEM-T-1459,获得顺次串联的基因片段3M2e,将其克隆到原核表达载体pMAL-C2x中,经酶切和DNA测序鉴定正确后转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western-blot分析,结果显示,表达出一分子质量为60 ku的可溶性融合蛋白(MBP-3M2e),与预期值相符,该蛋白表达量约占菌体表达量的59.8%。间接免疫荧光和间接ELISA检测结果显示,用纯化后的融合蛋白免疫的SPF鸡血清可与流感病毒的M2蛋白发生反应,且其抗体效价较高,表明纯化后的重组融合蛋白具有良好的免疫原性。

关键词： A型禽流感病毒 M2e基因原核表达免疫原性

来源：评论

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A型禽流感病毒不同拷贝数基质蛋白胞外区基因的原核表达及免疫保护力研究

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中国预防兽医学报 2010年第10期32卷 795-799页

作者：李洪涛张新涛刘明刘春国杜金玲石薇琳孙恩成中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感开放实验室及国家禽流感参考实验室/OIE禽流感参考实验室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319

为研究含禽流感病毒(AIV)不同拷贝数基质蛋白胞外功能区(M2e)亚单位疫苗在SPF鸡体中的免疫保护效力差异,根据已发表的高致病性AIV M2基因序列设计合成两对引物,利用PCR技术扩增单个M2e基因片段,以此为基础顺次串联得到不同拷贝数的M2e... 详细信息

为研究含禽流感病毒(AIV)不同拷贝数基质蛋白胞外功能区(M2e)亚单位疫苗在SPF鸡体中的免疫保护效力差异,根据已发表的高致病性AIV M2基因序列设计合成两对引物,利用PCR技术扩增单个M2e基因片段,以此为基础顺次串联得到不同拷贝数的M2e基因片段,并将其克隆到pMAL-C2x载体中,构建不同拷贝数的A型AIV M2e基因的重组表达质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE鉴定。表达产物经纯化后免疫家兔、SPF鸡,制备抗M2e融合蛋白的多克隆抗体。Western blot和间接免疫荧光试验检测纯化的融合蛋白免疫原性,间接ELISA测定鸡血清抗体水平,表明MBP-3M2e融合蛋白的抗体水平较高,且MBP-3M2e亚单位疫苗产生最好的免疫保护力。

关键词： A型禽流感病毒 M2e基因原核表达多克隆抗体免疫保护力

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流行性乙型脑炎病毒E蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

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中国兽医杂志 2010年第1期46卷 3-5页

作者：赵付荣华荣虹王斌陈娜莎阿合买提.买买提步志高新疆农业大学动物医学院新疆乌鲁木齐830052 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部兽医公共卫生重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

流行性乙型脑炎病毒(JEV)是一种严重危害人畜健康的虫媒病毒。表面囊膜蛋白(E蛋白)是该病毒的主要结构蛋白。本研究利用原核表达的乙型脑炎病毒SA14-14-2株结构蛋白E蛋白作为免疫原,免疫6周龄BALB/c小鼠,采用淋巴细胞杂交瘤技术进行融合... 详细信息

流行性乙型脑炎病毒(JEV)是一种严重危害人畜健康的虫媒病毒。表面囊膜蛋白(E蛋白)是该病毒的主要结构蛋白。本研究利用原核表达的乙型脑炎病毒SA14-14-2株结构蛋白E蛋白作为免疫原,免疫6周龄BALB/c小鼠,采用淋巴细胞杂交瘤技术进行融合,经有限稀释法获得1株特异性针对JEV E蛋白的杂交瘤细胞,命名为5D4,经测定5D4单抗亚类属于IgG2a,轻链为κ链。经Western blot证实所得杂交瘤细胞分泌的抗体可特异地与JEV E蛋白结合。结果表明,所制备的抗JEV E蛋白的单抗对病原检测具有很高的特异性,为JEV准确快速的病原诊断和JEV感染相关的基础性研究提供了物质基础。

关键词：乙型脑炎病毒 E蛋白单克隆抗体

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猪流感病毒河南株的分离鉴定和生物学特性

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华北农学报 2010年第4期25卷 107-110页

作者：赵朴郑玉姝贾贝贝刘丽艳刘兴友李海燕河南科技学院动物科学学院河南新乡453003 动物疫病和残留物防控河南省高校工程技术研究中心河南新乡453003 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所、兽医生物技术国家重点实验室、农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

从河南省有呼吸道症状的5个不同猪场采集棉拭子和肺组织样品。样品处理后,通过尿囊腔途径接种10日龄SPF鸡胚。获得3株病毒,经血凝和血凝抑制试验鉴定,为H3N2亚型流感病毒,并对其部分生物学特性进行了研究。结果表明,其半数鸡胚感染量(EI... 详细信息

从河南省有呼吸道症状的5个不同猪场采集棉拭子和肺组织样品。样品处理后,通过尿囊腔途径接种10日龄SPF鸡胚。获得3株病毒,经血凝和血凝抑制试验鉴定,为H3N2亚型流感病毒,并对其部分生物学特性进行了研究。结果表明,其半数鸡胚感染量(EID50)分别是0-9.56/0.2mL,10-8.56/0.2mL和10-8.44/0.2mL,对小白鼠的半数致死量(LD50)分别是10-1.56/0.1mL,10-1.45/0.1mL和10-1.50/0.1mL;它们的血凝素对热不稳定,能凝集1%马、牛、驴、猪、绵羊、鸡、兔、豚鼠、小白鼠及人O型血的红细胞。这为了解河南猪群中流行的流感病毒奠定了基础。

关键词：猪流感病毒分离鉴定生物学特性

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本地毛形线虫49 ku排泄分泌蛋白基因的克隆及序列分析

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动物医学进展 2010年第10期31卷 68-71页

作者：郑宝亮边传周王秀荣宋铭忻郑州牧业工程高等专科学校河南郑州450011 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030

为了获得本地毛形线虫(Trichinella nativa)49 ku ES蛋白的结构基因,用Trizol提取***肌幼虫的总RNA,用RT-PCR方法扩增出了编码***49 ku排泄分泌蛋白的结构基因。将PCR产物与T载体连接并经过大肠埃希菌增殖后送检测序。序列测定表明,目... 详细信息

为了获得本地毛形线虫(Trichinella nativa)49 ku ES蛋白的结构基因,用Trizol提取***肌幼虫的总RNA,用RT-PCR方法扩增出了编码***49 ku排泄分泌蛋白的结构基因。将PCR产物与T载体连接并经过大肠埃希菌增殖后送检测序。序列测定表明,目的基因TNPG长度为951bp,核苷酸序列同已发表的***相应的序列P49同源性为98.63%,所推导的氨基酸序列同源性为99.05%。为***49 ku ES蛋白结构基因的进一步研究打下基础。

关键词：本地毛形线虫旋毛形线虫 49ku排泄分泌蛋白基因序列

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禽流感病毒M2e多表位疫苗的构建和免疫原性检测

禽流感病毒M2e多表位疫苗的构建和免疫原性检测

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新型疫苗研发及基因工程疫苗应用研讨会

作者：刘明张新涛刘春国中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感参考实验室

为进行禽流感病毒M2蛋白胞外功能区M2e表位疫苗的免疫效果,通过PCR技术构建了M2e表位多拷贝串联基因片断,将其克隆到原核表达载体,经酶切鉴定和DNA测序鉴定正确后,获得重组表达质粒pMAL-3M2e。重组质粒转化BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱... 详细信息

为进行禽流感病毒M2蛋白胞外功能区M2e表位疫苗的免疫效果,通过PCR技术构建了M2e表位多拷贝串联基因片断,将其克隆到原核表达载体,经酶切鉴定和DNA测序鉴定正确后,获得重组表达质粒pMAL-3M2e。重组质粒转化BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导后经SDS-PAGE和Western blot鉴定得到与预期值相符的重组融合蛋白。融合蛋白得到高效可溶性表达,表达量约占菌体表达量的60%。间接ELISA表明,通过MBP树脂柱分离纯化的重组蛋白具有较好的免疫原性,该试验为M2e亚单位疫苗研究的进一步开展奠定了基础。

关键词：禽流感病毒 M2e表位疫苗免疫原性

来源：评论

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H7亚型禽流感病毒RT-LAMP快速检测方法的建立

H7亚型禽流感病毒RT-LAMP快速检测方法的建立

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第八次学术研讨会

作者：包红梅王秀荣赵玉辉陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室

根据GenBank中登录的H7亚型禽流感病毒（H7-AIV）血凝素基因序列,设计了一套特异识别HA基因序列中6个不同区段的环介导恒等温扩增（LAMP）引物,并以此套引物建立了一种基于RT-LAMP（逆转录环介导等温核酸扩增）技术的H7亚型禽流感病毒... 详细信息

根据GenBank中登录的H7亚型禽流感病毒（H7-AIV）血凝素基因序列,设计了一套特异识别HA基因序列中6个不同区段的环介导恒等温扩增（LAMP）引物,并以此套引物建立了一种基于RT-LAMP（逆转录环介导等温核酸扩增）技术的H7亚型禽流感病毒诊断方法。结果表明,该方法对H7-AIV RNA的最小检测限为10,灵敏度高于普通一步法RT-PCR 100倍;全部反应可在1.5 h内完成;在反应体系中添加SYBR GREENⅠ染料后,可通过肉眼观察有无荧光直接判定结果。灵敏性及特异性试验证明,该方法灵敏度高、特异性好,能够作为H7亚型禽流感病毒的快速诊断方法。

关键词： H7亚型禽流感病毒逆转录环介导恒等温扩增快速检测

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两湖地区H6亚型禽流感病毒HA及NA的基因序列分析

两湖地区H6亚型禽流感病毒HA及NA的基因序列分析

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第八次学术研讨会

作者：丁晴微齐瑛琳李印施建忠崔鹏飞于杨崔佳莹陈化兰邓国华中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室

2008年～2009年间,哈尔滨兽医研究所动物流感实验室在两湖地区的市场检测过程中分离到了14株H6亚型禽流感病毒,其中H6N2亚型有12株,H6N6亚型有2株。我们对这14株病毒的HA,NA进行序列测定和进化分析。结果发现DK/HN/284/09的HA片段与其... 详细信息

2008年～2009年间,哈尔滨兽医研究所动物流感实验室在两湖地区的市场检测过程中分离到了14株H6亚型禽流感病毒,其中H6N2亚型有12株,H6N6亚型有2株。我们对这14株病毒的HA,NA进行序列测定和进化分析。结果发现DK/HN/284/09的HA片段与其他13株的HA差异很大,达到19.4%～20.2%,其余13株毒同源性在94.2%～99.9%。H6N2亚型间的NA片段的同源性在91.1%～99.9%,差异性比较大。两株H6N6的NA片段同源性为89.5%,差异显著;这些数据表明:不同毒株呈现出明显的时间和地域性差异。与我国周边地区的H6亚型禽流感毒株进行比较发现,只有DK/HN/284/09的HA片段与香港早期的毒株可能有着共同的来源,其余都和香港和韩国等的毒株有着较大的差异性,HA基因的糖基化位点也有所不同,表现出明显的异源性。

关键词：禽流感病毒 H6亚型 HA NA 基因分析

来源：评论

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