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第六届全国会员代表大学暨第11次学术研讨会

作者：姜永萍张洪波张平静于康震田国斌陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室农业部畜牧兽医总站

将H5亚型禽流感DNA疫苗pCAGGoptiHA5对SPF鸡、商品蛋鸡、鹅和鸭的免疫效力进行了实验室研究。pCAGGoptiHA5以10μg剂量加强免疫3周龄SPF鸡和5周龄商品蛋鸡,加强免疫后2周分别用100LD50的HPAIV A/Goose/GuangDong/1/96(H5N1)[Gs/GD/1/96(H5N1)]鼻腔途径进行攻击,pCAGGoptiHA5以100μg剂量加强免疫4周龄本地鹅和金定鸭,加强免疫后2周分别用100LD50的HPAIVA/Duck/ShanghaiNanhui/16/2004(H5N1)[DK/SHNH/1604(H5N1)]鼻腔途径进行攻击,其免疫保护效力通过免疫和攻毒后的HI抗体反应水平、攻毒后的AGP抗体测定、病毒分离与滴定以及对发病率和死亡率的统计等几个方面来综合评价。结果,10μg pCAGGoptiHA5加强免疫可对SPF鸡形成100%完全保护(不发病、不致死、不排毒),10μg剂量pCAGGoptiHA5加强免疫可对商品蛋鸡形成100%的保护(不发病、不致死),100μg pCAGGoptiHA5加强免疫可对鹅和鸭均形成100%的保护(不发病、不致死)。结果表明,pCAGGoptiHA5作为免疫效果良好、成本低廉的DNA疫苗,有望成为预防H5亚型高致病力禽流感的高效、安全新型基因工程疫苗。

关键词：禽流感 H5亚型 DNA疫苗免疫效力

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禽流感重组鸡痘病毒载体活疫苗(H5亚型)研究与应用

禽流感重组鸡痘病毒载体活疫苗(H5亚型)研究与应用

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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第六届全国会员代表大会暨第11次学术研讨会

作者：乔传玲于康震姜永萍李呈军田国彬王秀荣陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室及兽医生物技术国家重点实验室全国畜牧兽医总站

本研究利用DNA重组技术,以我国H5N1亚型禽流感病毒早期分离株的HA和NA基因为抗原基因供体,以高度成熟安全的鸡痘病毒疫苗株S-FPV-017为载体,构建了一株可共表达HA和NA基因的重组鸡痘病毒疫苗株。经细胞连续传代确证了重组病毒良好的遗... 详细信息

本研究利用DNA重组技术,以我国H5N1亚型禽流感病毒早期分离株的HA和NA基因为抗原基因供体,以高度成熟安全的鸡痘病毒疫苗株S-FPV-017为载体,构建了一株可共表达HA和NA基因的重组鸡痘病毒疫苗株。经细胞连续传代确证了重组病毒良好的遗传稳定性,经鸡体内连续传代证实了其毒力稳定性。大量的实验室研究与现地应用结果表明,该疫苗免疫后对鸡十分安全、无任何不良反应;免疫后1周可诱导免疫效力产生,免疫持续期可达10个月。

关键词：禽流感重组鸡痘病毒疫苗

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检测H1～15禽流感病毒亚型的DNA芯片初步研究

检测H1～15禽流感病毒亚型的DNA芯片初步研究

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第六次学术研讨会

作者：王秀荣于康震刘丽玲乔传玲石锐孙凯孔宪刚陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

对流感病毒14个血凝素亚型的基因芯片检测技术进行了初步研究.通过RT-PCR克隆禽流感病毒血凝素基因片段,获得重组质粒.从重组质粒扩增大约500bp的DNA片段,浓缩后点到氨基化玻璃载体上,制成芯片.待检病毒样品用TrozolLS提取RNA,反转录过... 详细信息

对流感病毒14个血凝素亚型的基因芯片检测技术进行了初步研究.通过RT-PCR克隆禽流感病毒血凝素基因片段,获得重组质粒.从重组质粒扩增大约500bp的DNA片段,浓缩后点到氨基化玻璃载体上,制成芯片.待检病毒样品用TrozolLS提取RNA,反转录过程中用Cy5标记样品cDNAs.将标记样品与芯片杂交,扫描芯片上待检样品与芯片上捕捉探针的结合位点,杂交信号与预期设想一致.结果显示,DNA芯片技术可以提供一种有效的AIV血凝素亚型鉴别诊断方法。

关键词：禽流感病毒基因芯片检测血凝素亚型鉴定 RT-PCR 鉴别诊断

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不同致病力禽流感病毒的细胞生长特性

不同致病力禽流感病毒的细胞生长特性

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第六次学术研讨会

作者：刘丽玲王秀荣陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

究用2个不同亚型的AIV感染Madin-Darbycaninekidney(MDCK)细胞,通过观察细胞病变、红细胞凝集实验、间接免疫荧光等探讨不同致病力禽流感病毒(AIV)在MDCK细胞上的生长特性;同时取这2株不同浓度(10-2～10-7)AIV在MDCK上培养72h的细胞培... 详细信息

究用2个不同亚型的AIV感染Madin-Darbycaninekidney(MDCK)细胞,通过观察细胞病变、红细胞凝集实验、间接免疫荧光等探讨不同致病力禽流感病毒(AIV)在MDCK细胞上的生长特性;同时取这2株不同浓度(10-2～10-7)AIV在MDCK上培养72h的细胞培养上清0.1mL接种于9～11日龄鸡胚尿囊腔,37℃孵育48h～72h,无菌收获尿囊液,再做红细胞凝集实验.结果显示:这2个亚型AIV感染MDCK细胞后,血凝价(HA)最高为27,表现为较低的红细胞凝集活性,高致病力禽流感病毒(HPAIV)红细胞凝集活性较低致病力禽流感病毒(LPAIV)出现的要早一些;上述2个亚型AIV的MDCK培养上清接种鸡胚48～72h后,HA较高,在25.5～210之间,而且HPAIV-A/Goose/Guangdong/1/96高于LPAIV-A/Turkey/England/N28/73.这2株AIV均可致MDCK细胞发生病变,但病变程度和病变出现的时间不同,A/Goose/Guangdong/1/96[H5N1]感染MDCK细胞后3d可见明显病变,A/Turkey/England/N28/73[H5N2]感染MDCK细胞后4～5d可见明显病变;2个亚型不同浓度(10-2～10-7)AIV的间接免疫荧光结果均为阳性.以上结果表明HPAIV和LPAIV可致MDCK细胞病变,但红细胞凝集活性较低,接种鸡胚后红细胞凝集活性显著提高.

关键词：禽流感病毒 MDCK细胞红细胞凝集活性间接免疫荧光

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高致病性禽流感时空分布规律研究——传播的风险评估框架的初步建立

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中国禽业导刊 2005年第20期22卷 18-19页

作者：崔尚金王靖飞吴春燕李曦符芳童光志孔宪刚中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室农业部动物疫病诊断与流行病学中心哈尔滨150001

高致病性禽流感的防控措施主要包括迅速确诊技术;疫区隔离封锁,扑杀病禽;对高风险、可能被传染的区域实施强制免疫等。在该病的防控工作中尚未运用风险评估方法,也无风险评估指标体系,难以正确识别其风险程度,无法进行风险跟踪与控制。... 详细信息

高致病性禽流感的防控措施主要包括迅速确诊技术;疫区隔离封锁,扑杀病禽;对高风险、可能被传染的区域实施强制免疫等。在该病的防控工作中尚未运用风险评估方法,也无风险评估指标体系,难以正确识别其风险程度,无法进行风险跟踪与控制。风险评估是指为了决策的需要,以科学为基础对具有不确定性的事件或结果进行逻辑判断的一种过程,是将专家经验知识和现代数学方法相结合,建立风险评估指标体系,确定指标值和权重,建立综合评价模型,最后用合适的阈值来确定风险程度或根据风险因素的权重采取相应防控措施。风险评估在工程学、生态学、信息学、项目投资、环境保护、生物防治、动植物检疫、生物多样性研究等诸多领域广泛应用。在动物医学领域中,如口蹄疫、蓝舌病、牛海绵状脑病等流行病的监测中都运用风险分析方法。联合国粮农组织呼吁在区域一级建立能够满足局部区域以及国际社会需要的高致病性禽流感风险预警的兽医监视框架,风险评估框架对科学防控高致病性禽流感有重要决策意义。

关键词：高致病性禽流感风险评估方法框架规律研究时空分布评估指标体系防控措施传播综合评价模型风险分析方法

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禽流感发生的流行病

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中国禽业导刊 2005年第22期22卷 4-7页

今年以来,国外高致病性禽流感疫情呈明显扩大态势,特别是进入秋冬季以后,候鸟向南迁徙,家禽调运频繁,极易造成疫情传人和爆发.禽流感虽然没有像2003年的SARS疫情那样明显地影响和改变我们的生活,但接连由动物引发的威胁到人类健康甚至... 详细信息

今年以来,国外高致病性禽流感疫情呈明显扩大态势,特别是进入秋冬季以后,候鸟向南迁徙,家禽调运频繁,极易造成疫情传人和爆发.禽流感虽然没有像2003年的SARS疫情那样明显地影响和改变我们的生活,但接连由动物引发的威胁到人类健康甚至生存的疫情,还是让人产生很多的联想和思索.微生物远在人类出现之前就存在于这个星球上了,也将伴随着人类生命的进化而进化,或许它在人类生命消失之后还会存在于这个星球.而由于微生物对环境的适应力极强,它不会像动物或者植物那样出现某个种类的灭绝,科学的发展,也只能是尽力控制病毒.流感病毒也是如此.禽流感的发生和流行有其必然的因素.今年导致禽流感流行传染的原因除了周边国家发生禽流感以外,主要如下:对禽粪检疫力度不够或缺少主动监测;候鸟迂徙导致疫情蔓延;人畜禽间保持密切接触等.农业部对全国部分地区发生的禽流感疫情高度重视,特别派国家动物流行病学研究中心专家赴疫区,协助开展流行病学调查和疫情追踪工作.总结禽流感的发生与流行,希望能对禽流感的防制提供参考.

关键词：高致病性禽流感疫情动物流行病学人类健康 SARS疫情流行病学调查流感病毒周边国家主动监测部分地区研究中心

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禽流感发生的流行病学分析与应对措施

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中国禽业导刊 2005年第22期22卷 4-7页

作者：崔尚金李曦符芳王靖飞吴春燕童光志孔宪刚中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室农业部动物疫病诊断与流行病学研究中心哈尔滨150001

文章详细阐述了禽流感病毒的特性以及禽流感流行的主客观规律,作者认为对禽类缺少检疫和监测,人、畜、禽间密切接触,候鸟迁徙等因素会造成禽流感爆发流行,并对如何有效防控禽流感提出了具体措施,指出对禽流感建立主动监测和预警系统是... 详细信息

文章详细阐述了禽流感病毒的特性以及禽流感流行的主客观规律,作者认为对禽类缺少检疫和监测,人、畜、禽间密切接触,候鸟迁徙等因素会造成禽流感爆发流行,并对如何有效防控禽流感提出了具体措施,指出对禽流感建立主动监测和预警系统是十分必要的。

关键词：高致病性禽流感疫情动物流行病学人类健康 SARS疫情流行病学调查流感病毒周边国家主动监测部分地区研究中心

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两株H5N1亚型禽流感病毒诱导的BALB/C小鼠细胞凋亡初步研究

两株H5N1亚型禽流感病毒诱导的BALB/C小鼠细胞凋亡初步研究

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中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第十三次学术讨论会和中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十二次学术讨论会

作者：余丹丹张书霞陈化兰南京农业大学动物医学院南京农业大学动物医学院中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点实验室/兽医生物技术国家重点实验室

1 目的1997香港H5N1禽流感病毒感染人事件预见着流感流行进入了一个新的时代,因为这是首次完成未经中间宿主适应而直接由禽感染人并引起严重疾病和致人死亡事件。为了解H5N1亚型高致病性禽流感病毒致病机理,我们应用香港流感发生后几年... 详细信息

1 目的1997香港H5N1禽流感病毒感染人事件预见着流感流行进入了一个新的时代,因为这是首次完成未经中间宿主适应而直接由禽感染人并引起严重疾病和致人死亡事件。为了解H5N1亚型高致病性禽流感病毒致病机理,我们应用香港流感发生后几年中建立起的哺乳动物模型BALB/C小鼠来对这两株病毒感染并诱导细胞凋亡的能力进行研究。本文用A/Duck/Guangdong/40/2000(H5N1)和A/Duck/Guangxi/35/2001(H5N1)两株H5N1亚型毒株感染BALB/C小鼠后,应用了组织病理学的方法,研究高致病性禽流感病毒对哺乳动物的致病作用,以期为禽流感病毒对哺乳动物的致病机理提供新的思路。

关键词：禽流感病毒哺乳动物 BALB/C 细胞凋亡初步研究

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两株H5N1亚型禽流感病毒NS1基因诱导细胞凋亡的研究

两株H5N1亚型禽流感病毒NS1基因诱导细胞凋亡的研究

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中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第十三次学术讨论会和中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十二次学术讨论会

目的:研究A/Duck/Guangdong/40/2000(H5N1)(简称DKGD/40/00)和A/Duck/Guangxi/35/2001(简称DKGX/35/01)两株H5N1亚型禽流感病毒的NS1基因对Hela细胞凋亡的影响,为该两株病毒的致病机理提供依据。材料与方法:病毒株A/Duck/Guangdong/40/2000(H5N1)(简称DKGD/40/00)和A/Duck/Guangxi/35/2001(H5N1)(简称DKGX/35/01)由哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室保存;10日龄的SPF鸡胚由中国农业科学院哈尔滨兽医研究所实验动物中心提供;引物参照NS1基因序列保守区设计。并引入EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ两个酶切位点,由上海博亚生物技术有限公司合成;病毒NS1基因的克隆与表达

关键词：禽流感病毒 NS1 细胞凋亡

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两株H5N1亚型禽流感病毒诱导鸡胚成纤维细胞凋亡的初步研究

两株H5N1亚型禽流感病毒诱导鸡胚成纤维细胞凋亡的初步研究

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中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第十三次学术讨论会和中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十二次学术讨论会

目的:为了弄清禽流感病毒的毒力强弱与细胞凋亡的关系,我们进行了生物学特性差异明显的A/Duck/Guangdong/40/2000(H5N1)和A/Duck/Guangxi/35/2001(H5N1)两株H5N1亚型禽流感病毒对鸡胚成纤维细胞的感染实验,并检测了细胞凋亡指标,以期为... 详细信息

目的:为了弄清禽流感病毒的毒力强弱与细胞凋亡的关系,我们进行了生物学特性差异明显的A/Duck/Guangdong/40/2000(H5N1)和A/Duck/Guangxi/35/2001(H5N1)两株H5N1亚型禽流感病毒对鸡胚成纤维细胞的感染实验,并检测了细胞凋亡指标,以期为该两株病毒的致病机理及相关比较研究提供参考依据。方法:用灭菌PBS将含有两株病毒的尿囊液分别以十倍比稀释到10-4,置于冰上。接种100μl禽流感病毒稀释液于鸡胚成纤维细胞上,37℃吸附30min,PBS洗涤3次,加入5ml 2%DMEM维持液。置37℃5%CO2培养箱培养,逐日观察,出现细胞病变时收集细胞供DNA抽提及流式细胞仪测试。

关键词：鸡胚成纤维细胞禽流感病毒初步研究

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