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中国生物工程学会第三次全国会员代表大会暨学术讨论会

作者：李建伟崔尚金孟庆文于康震金红唐秀英田国斌刘宝全中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物流感中心中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物流感中心东北农业大学动物医学院

本研究对一株H9N2亚型禽流感病毒(AIV)—A/Chick/Shandong/6/96(H9N2)进行了全病毒基因序列分析。分析结果表明,该毒株8个基因的核苷酸序列皆与1994年分离株—A/Chicken/Bei jing/1/94(H9N2)具有很高的同源性(96.0—98.6％),推导其血凝... 详细信息

本研究对一株H9N2亚型禽流感病毒(AIV)—A/Chick/Shandong/6/96(H9N2)进行了全病毒基因序列分析。分析结果表明,该毒株8个基因的核苷酸序列皆与1994年分离株—A/Chicken/Bei jing/1/94(H9N2)具有很高的同源性(96.0—98.6％),推导其血凝素(HA)裂解位点处的氨基酸序列为A-R-S-S-R,完全符合H9 AIV欧亚分支中的A/Chicken/Beijing/1/94类亚系的特征;虽然其神经氨酸酶(NA)基因与

关键词：禽流感病毒基因序列分析分离株

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禽流感病毒分离株A/Goose/Guangdong/1/96(H5N1)全基因克隆及序列分析

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中国预防兽医学报 2000年第3期22卷 232-235页

作者：张建林于康震陈化兰唐秀英田国斌中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物流感研究中心哈尔滨150001

本研究用无特定病原体 (SPF)鸡胚增殖禽流感病毒鹅体分离株A/Goose/Guangdong/1/96 (H5N1) (GD1/96 ) ,提取病毒基因组总RNA ,运用反转录_聚合酶链反应 (RT_PCR)技术分别扩增该病毒分离株的 8个基因片段的cDNA ,分别克隆后进行序列测定... 详细信息

本研究用无特定病原体 (SPF)鸡胚增殖禽流感病毒鹅体分离株A/Goose/Guangdong/1/96 (H5N1) (GD1/96 ) ,提取病毒基因组总RNA ,运用反转录_聚合酶链反应 (RT_PCR)技术分别扩增该病毒分离株的 8个基因片段的cDNA ,分别克隆后进行序列测定。序列分析结果表明 ,所扩增到的 8个片段均包含相应的病毒基因的完整开放阅读框架。GD1/96株与 1997年香港禽流感事件中的 4株香港流感病毒分离株 (分别来自人、鸡、鸭和鹅 )的HA基因的高度同源性说明它们可能起源于同一种系 ,但NS基因的差异说明它们分属于不同的基因群系。GD1/96株与香港流感病毒分离株的核苷酸和推导的氨基酸序列的同源性较低 ( 6 3.9%～ 98.1%) ,而香港流感病毒分离株之间的核苷酸和氨基酸序列的同源性很高 ( 96 .5 %～ 10 0 %) ,且香港各流感病毒分离株的NA均缺失 5 7个核苷酸 ( 19个氨基酸 )残基。因此 ,内地H5N1分离株GD1/96与

关键词：禽流感病毒分离株全基因克隆序列分析

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禽流感病毒重组核蛋白在琼扩诊断中的应用

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中国预防兽医学报 2000年第S1期22卷 25-27页

作者：邓国华邓国华唐秀英田国彬于康震于康震中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物流感研究中心哈尔滨150001

利用杆状病毒表达禽流感病毒型特异性抗原－核蛋白，并就重组核蛋白作为禽流感琼扩诊断抗原地特异性和敏感性及作为抗原的其它特性进行了研究，并与普通全病毒琼扩抗原进行了应用比较试验，对３５４份现地可疑血清样品进行了检测，结果... 详细信息

利用杆状病毒表达禽流感病毒型特异性抗原－核蛋白，并就重组核蛋白作为禽流感琼扩诊断抗原地特异性和敏感性及作为抗原的其它特性进行了研究，并与普通全病毒琼扩抗原进行了应用比较试验，对３５４份现地可疑血清样品进行了检测，结果表明：该抗原可以特异性地定性检测出所有１５个禽流感病毒亚型的抗血清，与普通全病毒琼扩抗原的检测结果一致，但沉淀线更细密、清晰，保存方便；与我国广泛流行的１５种禽类其它病原体的抗血清没有任何交叉反应，表明该重组核蛋白作为禽流感琼扩抗原特异、敏感、生物安全性更可靠和生产成本更低廉，有利于进一步扩大禽流感疫情调查范围和加大监测力度。

关键词：重组核蛋白琼扩抗原检测

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我国禽流感防制研究进展

我国禽流感防制研究进展

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中国畜牧兽医学会禽病学会分会第十次学术研讨会

作者：于康震付朝阳崔尚金步志高唐秀英中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物流感研究中心中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物流感研究中心中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物流感研究中心

动物流感研究中心的成立有力地推动了我国禽流感的防制研究工作。本文将就我国在禽流感疫情调查、诊断和监测、病毒分离鉴定、疫苗免疫、病毒分子生物学等诸多方面的研究现状作一简要综述。

关键词：禽流感防制进展

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表达禽流感病毒血凝素基因重组禽痘病毒的构建

表达禽流感病毒血凝素基因重组禽痘病毒的构建

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中国畜牧兽医学会禽病学会分会第十次学术研讨会

作者：贾永清乔传玲张建林于康震刘宝全中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物流感研究中心中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室东北农业大学动物医学院

将AIV广东分离株A/Goose/Guangdong/3/96(H5N1)HA基因正向克隆于pSY538的EcoR Ⅰ位点,将LacZ报告基因插入Sma Ⅰ位点,然后切取含外源基因和报告基因的Not Ⅰ片段克隆于pSY681的Not Ⅰ位点,构建AIV HA基因重组禽痘病毒转移载体,经酶切分... 详细信息

将AIV广东分离株A/Goose/Guangdong/3/96(H5N1)HA基因正向克隆于pSY538的EcoR Ⅰ位点,将LacZ报告基因插入Sma Ⅰ位点,然后切取含外源基因和报告基因的Not Ⅰ片段克隆于pSY681的Not Ⅰ位点,构建AIV HA基因重组禽痘病毒转移载体,经酶切分析和PCR鉴定后,利用脂质体转染试剂盒在鸡胚成纤维细胞上与F-017禽痘病毒弱毒疫苗株进行共转染。经重组病毒筛选与纯化,获得遗传性状稳定的AIV HA基因重组禽痘病毒。

关键词：禽流感 HA基因重组禽痘病毒

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表达禽流感病毒血凝素基因重组禽痘病毒的构建

表达禽流感病毒血凝素基因重组禽痘病毒的构建

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中国畜牧兽医学会禽病学分会第十次学术研讨会

作者：贾永清乔传玲中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物流感研究中心(哈尔滨) 东北农业大中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室(哈尔滨)

将AIV广东分离株A/Goose/Guangdong/3/96(H5N1)HA基因正向克隆于pSY538的EcoR I 位点，将LacZ报告基因插入Sma I位点，然后切取含外源基因和报告基因的Not I片段克隆于pSY681的Not I位点，构建AIV HA基因重组禽痘病毒转移载体，经酶切... 详细信息

将AIV广东分离株A/Goose/Guangdong/3/96(H5N1)HA基因正向克隆于pSY538的EcoR I 位点，将LacZ报告基因插入Sma I位点，然后切取含外源基因和报告基因的Not I片段克隆于pSY681的Not I位点，构建AIV HA基因重组禽痘病毒转移载体，经酶切分析和PCR鉴定后，利用脂质转染试剂盒在鸡胚成纤维细胞上与F-017禽痘病毒弱毒苗株进行共转染。经重组病毒筛选与纯化，获得遗传性状稳定的AIV HA基因重组禽痘病毒。

关键词：基因重组血凝素禽痘病毒

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表达H5N1亚型高致病性禽流感病毒HA基因的DNA疫苗可保护SPF鸡抵抗同型病毒的致死性攻击

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中国预防兽医学报 2000年第S1期22卷 173-页

作者：姜永萍姜永萍陈化兰陈化兰于康震于康震张建林张建林步志高唐秀英田国彬中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物流感研究中心哈尔滨150001

将高致病力禽流感病毒分离株Ａ／Ｇｏｏｓｅ／Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ／１／９６（ＨＳＮ１）（ＧＤ／１／９６）的ＨＡ基因ｃＤＮＡ片段克隆于强启动子ＣＭＶ下游，构建了ＤＮＡ疫苗质粒ｐＣＩＨ５，对其免疫保护性进行了三批不同层次的... 详细信息

将高致病力禽流感病毒分离株Ａ／Ｇｏｏｓｅ／Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ／１／９６（ＨＳＮ１）（ＧＤ／１／９６）的ＨＡ基因ｃＤＮＡ片段克隆于强启动子ＣＭＶ下游，构建了ＤＮＡ疫苗质粒ｐＣＩＨ５，对其免疫保护性进行了三批不同层次的动物保护试验。试验Ｉ分为两部分，第一部分为ｐＣＩＨ５一次免疫组（１０μｇ、４０μｇ、７０μｇ、１００μｇ、１５０μｇ）、油苗组及空白对照组，第二部分为ｐＣＩＨ５两次免疫组（５μｇ、２０μｇ、３５μｇ、５０μｇ）及其对照组，ｐＣＩＨ５以２００μｌ腿肌两点注射，一次免疫组于免疫后３周以１０ＬＤ５０ＣＤ／１／９６攻毒，两次免疫组首免后３周加强免疫一次，二免后２周以５０ＬＤ５０ＣＤ／１／９６攻毒，免疫及攻毒前后均采血检测ＨＩ抗体和ＡＧＰ抗体，攻毒后７天采集泻殖腔棉拭子分离病毒。试验Ⅱ分为５０μｇ和１００μｇ（１００μｌ）两次免疫组及对照组，攻毒剂量为１０ＬＤ５０ＣＤ／１／９６。试验Ⅲ为试验Ⅱ的重复试验，但免疫注射体积为２００μｌ。结果，三批试验的所有对照鸡在攻毒后２－８天全部死亡；试验Ⅰ中１０μｇ、４０μｇ、７０μｇ、１００μｇ和１５０μｇｐＣＩＨ５一次免疫，但免疫保护率分别为１２．５％（１／８?

关键词：禽流感病毒血凝索基因 DNA疫苗免疫保护

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禽流感病毒血凝素基因重组鸡痘病毒的构建及其免疫保护性

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中国预防兽医学报 2000年第S1期22卷 179-页

作者：马文军马文军陈化兰陈化兰于康震于康震张建林张建林田国彬唐秀英中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物流感研究中心哈尔滨150001

以脂质体转染技术构建了表达禽流感病毒（ＡＩＶ）血凝素（ＨＡ）基因的重组鸡痘病毒ｒＦＰＶ－ＨＡ，该病毒在鸡胚成纤维细胞内能稳定产生子代病毒，经翅皮下５Ｘ１０５ＰＦＵ／羽免疫８周龄ＳＰＦ鸡，免疫后第３周用１００ＥＬ... 详细信息

以脂质体转染技术构建了表达禽流感病毒（ＡＩＶ）血凝素（ＨＡ）基因的重组鸡痘病毒ｒＦＰＶ－ＨＡ，该病毒在鸡胚成纤维细胞内能稳定产生子代病毒，经翅皮下５Ｘ１０５ＰＦＵ／羽免疫８周龄ＳＰＦ鸡，免疫后第３周用１００ＥＬＤ５０的ＨＡ基因同源ＡＩＶＡ／ＡｒｆｉＳｔａｒ／Ｅｎｇ－Ｑ／９８３／７９（Ｈ７Ｎ１）进行人工感染。１周后用棉拭子于泄殖腔取样，进行病毒分离。免疫后第３周及攻毒后第１、２周对所有动物进行翅静脉采血，检测血凝抑制（ＨＩ）抗体和免疫沉淀（ＡＧＰ）抗体。结果，攻毒前重组病毒免疫组可检测到很低的ＨＩ抗体，检测不到ＡＧＰ抗体，野生型病毒（Ｆ０１７）接种组和空白对照组ＨＩ抗体和ＡＧＰ抗体均为阴性。攻毒后重组病毒免疫组的ＨＩ抗体上升速度明显高于野生型病毒接种组和空白对照组。重组病毒免疫组有６／８的鸡为流感病毒分离阴性，野生型病毒接种组和空白对照组的试验鸡病毒分离全部为阳性。这些结果表明我们所构建的表达Ｈ７亚型ＡＩＶ　ＨＡ基因的重组鸡痘病毒可诱导鸡产生有效的免疫保护反应，肠道排毒显著减少。同时也表明，重组禽痘病毒可作为一种预防禽流感候选标记疫苗，藉此可望较好地解决全病毒灭活疫苗成本高和疫苗免疫鸡与自然感染鸡?

关键词：禽流感病毒血凝素基因重组鸡痘病毒

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表达H5亚型禽流感病毒血凝素和神经氨酸酶双基因重组禽痘病毒的构建

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中国预防兽医学报 2000年第S1期22卷 178-页

作者：乔传玲乔传玲于康震于康震贾永清刘明刘明孟庆文孟庆文田国彬唐秀英中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物流感研究中心哈尔滨150001 东北农业大学动物医学院

血凝素（ＨＡ）和神经氨酸酶（ＮＡ）是禽流感病毒（ＡＩＶ）的两种表面糖蛋白，主要诱导机体产生体液免疫应答。本研究采用ＳＤＳ－蛋白酶Ｋ法提取禽流感病毒分离株Ａ／Ｇｏｏｓｅ／Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ／３／９６（Ｈ５Ｎ１）的ＳＰＦ... 详细信息

血凝素（ＨＡ）和神经氨酸酶（ＮＡ）是禽流感病毒（ＡＩＶ）的两种表面糖蛋白，主要诱导机体产生体液免疫应答。本研究采用ＳＤＳ－蛋白酶Ｋ法提取禽流感病毒分离株Ａ／Ｇｏｏｓｅ／Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ／３／９６（Ｈ５Ｎ１）的ＳＰＦ鸡胚尿囊毒ＲＮＡ，ＲＴ－ＰＣＲ扩增完整的ＮＡｃＤＮＡ基因，将其克隆到载体ｐＳＹ５３８中的禽痘病毒早晚期启动子ＬＰ２ＥＰ２的下游，然后再将含有启动子的ＮＡ基因片段亚克隆到已有的ＡＩＶＨＡ基因重组禽痘病毒转移载体ｐＳＹ（ＨＡ＋ＬａｃＺ）中，构建了ＨＡ、ＮＡ双重组禽痘病毒转移载体ｐＳＹ（ＨＡ＋ＮＡ＋ＬａｃＺ），将它与禽痘病毒疫苗株Ｓ－ＦＰＶ－０１７共转染鸡胚成纤维细胞，在Ｘ－ｇａｌ存在的条件下，经蓝斑筛选、六选蚀斑纯化、ＰＣＲ鉴定等，结果表明已获得一株能同时稳定表达ＨＡ和ＮＡ蛋白的重组禽痘病毒，为禽流感基因工程病毒活载体疫苗的研究奠定了基础。

关键词：禽流感病毒血凝素基因神经氨酸酶基因重组禽痘病毒

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