检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2023年第11期45卷 1095-1100页

作者：孟德锦李奇兵胡玉珍王一涵王波石文军单智博姜丽陈化兰李呈军中国农业科学院哈尔滨兽医研究所、兽医生物技术国家重点实验室/农业农村部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150069

A型流感病毒(IAV)在宿主细胞内复制过程中需要许多宿主因子的参与,同时IAV也能调控多种宿主因子的表达。为寻找调控IAV复制的宿主因子,本研究通过SDS-PAGE电泳检测发现H1N1亚型流感病毒A/WSN/1933株(简写为WSN)感染A549细胞会上调表达55... 详细信息

A型流感病毒(IAV)在宿主细胞内复制过程中需要许多宿主因子的参与,同时IAV也能调控多种宿主因子的表达。为寻找调控IAV复制的宿主因子,本研究通过SDS-PAGE电泳检测发现H1N1亚型流感病毒A/WSN/1933株(简写为WSN)感染A549细胞会上调表达55 ku左右的特异蛋白条带(感染后9 h),将该55 ku左右的蛋白条带切胶回收后进行质谱分析,根据质谱分析的筛选标准选择蛋白得分(Mass score)较高、谱图数(Matches)和序列数(Sequences)较为可信的宿主因子DBNL作为调控IAV复制的潜在研究对象进一步研究。本研究针对DBNL设计特异的siRNA和对照Scrambled siRNA,将其分别转染A549细胞,通过荧光定量PCR确定DBNL siRNA在转录水平的干扰效果显著;利用细胞活力测定试验确定DBNL siRNA的干扰不影响细胞活力。利用DBNL siRNA下调表达A549细胞中的DBNL后,以WSN感染该细胞,在感染后24 h、48 h分别收集细胞上清,利用MDCK细胞进行噬斑滴定试验。试验结果显示,与对照组相比,下调表达DBNL后IAV的滴度极显著降低(P<0.01),表明下调表达DBNL能够抑制A549细胞中的IAV复制。利用siRNA下调表达A549细胞中的DBNL后,以WSN感染A549细胞,采用激光共聚焦试验鉴定IAV NP蛋白的表达与定位情况。结果显示,在病毒感染后6 h,对照组中红色荧光集中分布在细胞质中,而DBNL siRNA组中红色荧光在细胞核与细胞质中均有分布,表明下调表达DBNL能够抑制细胞中IAV NP蛋白的出核。反之,通过转染过表达DBNL的重组质粒,以WSN感染A549细胞,采用激光共聚焦试验鉴定IAV NP蛋白的表达与定位情况。结果显示,在病毒感染后4 h,转染pCAGGS的对照组中红色荧光主要分布在细胞核中,而过表达DBNL组中的红色荧光在细胞核与细胞质中均有分布,表明过表达DBNL能够促进细胞中IAV NP蛋白的出核。以上研究结果证实DBNL正调控IAV的复制与其NP蛋白的出核。本研究丰富了DBNL功能的多样性,为宿主因子调控IAV复制的研究提供参考数据。

关键词：流感病毒 DBNL蛋白 NP蛋白

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野鸟源H8N2亚型禽流感病毒的生物学特性分析

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中国预防兽医学报 2022年第6期44卷 577-582页

作者：田井满李明慧白晓利李玉磊刘丽娜李雁冰陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150069

本研究团队于2019年在常规主动监测野鸟源禽流感病毒(AIV)时,于山东省荣成市分离到一株H8N2亚型AIV,为了解该株H8N2亚型AIV的生物学特性,本研究对其全基因组进行了测序及遗传演化分析。结果显示,该病毒HA和NA基因分别来自鸭源H8N4和H9N... 详细信息

本研究团队于2019年在常规主动监测野鸟源禽流感病毒(AIV)时,于山东省荣成市分离到一株H8N2亚型AIV,为了解该株H8N2亚型AIV的生物学特性,本研究对其全基因组进行了测序及遗传演化分析。结果显示,该病毒HA和NA基因分别来自鸭源H8N4和H9N2亚型AIV,其部分内部基因来源于野鸟源AIV,而且该H8N2亚型AIV的PB2基因起源于北美,表明该H8N2亚型AIV是一株跨大陆、跨物种、多亚型的重组AIV。关键氨基酸位点分析显示,其HA蛋白碱性裂解位点氨基酸序列为SIEPK/GLF,为低致病AIV分子标志;PB1蛋白出现D622G突变,NS1蛋白存在P^(42)S、I^(106)M、C^(138)F突变,提示其具有增强对哺乳动物致病性的潜在能力。采用该H8N2亚型AIV感染SPF鸡后采集各脏器及拭子样品,接种鸡胚后通过病毒滴定试验检测,结果显示,该病毒不能通过SPF鸡的喉头或泄殖腔排毒,且在感染鸡各脏器中均未检测到该病毒的有效复制。进一步采用该病毒感染BALB/c小鼠后观察临床症状,并采集各脏器后利用普通鸡胚进行脏器病毒滴定试验,结果显示,小鼠感染病毒后无明显临床症状和体质量下降。该H8N2亚型AIV虽不致死小鼠,但在其肺脏、鼻甲、肾脏以及脾脏均可有效复制。本研究对该H8N2亚型AIV的部分生物学特性进行了探究,为H8N2亚型AI的综合防控提供参考依据。

关键词：禽流感病毒 H8N2 野鸟跨大陆重组跨种感染

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一株新型重配H9N8亚型禽流感病毒的分子进化分析及其对小鼠的感染性研究

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中国预防兽医学报 2022年第7期44卷 691-696页

作者：颜成崔鹏飞邢鑫谷文丽张元成衡武昌王丛丛邓国华陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业农村部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150069

2020年5月,本实验室在对禽流感常规监测时从广西一鸭场分离到一株H9N8亚型禽流感病毒(AIV),命名为A/duck/Guangxi/S10590/2020(H9N8)(简称DK/GX/S10590/2020)。为了解该H9N8分离株的生物学特性和公共卫生风险,本研究对其进行了全基因组... 详细信息

2020年5月,本实验室在对禽流感常规监测时从广西一鸭场分离到一株H9N8亚型禽流感病毒(AIV),命名为A/duck/Guangxi/S10590/2020(H9N8)(简称DK/GX/S10590/2020)。为了解该H9N8分离株的生物学特性和公共卫生风险,本研究对其进行了全基因组序列及遗传演化分析,并采用贝叶斯端点定年法进行进化分析;进一步以小鼠为动物模型,评价该AIV对哺乳动物的感染性。全基因组序列经BLAST比对,结果显示,该病毒株与H1N1、H3N8、H4N8、H6N1、H7N3、H7N7和H9N2等多种亚型野鸟源低致病性AIV(LPAIV)具有较高同源性,提示其可能是由多种LPAIV在病毒传播过程中经过复杂重配而形成。遗传演化及贝叶斯进化分析结果显示,该病毒可能在2018年末重配产生,后由东亚-澳大利西亚迁徙线上的野鸟引入广西鸭群。特殊氨基酸位点分析结果显示,该病毒HA蛋白裂解位点为PAASNR/GL,仅含有一个碱性氨基酸,且其HA蛋白具有T分子特征,进一步表明该AIV为LPAIV,且具有结合人型唾液酸受体的潜在能力;此外,在内部基因表达蛋白中发现了PB1蛋白的LP、PB1-F2蛋白的LS、PA蛋白的KE和VD、NP蛋白的VM和KQ、以及M1蛋白的HY和AV等多个可增强H9亚型AIV对鸡或哺乳动物组织嗜性的突变,表明该病毒株具有潜在感染鸡和哺乳动物的风险。小鼠感染性试验结果显示,该病毒仅在小鼠鼻甲中低水平复制,对小鼠呈低致病力。本研究为H9亚型AIV的监测和流行病学评估提供了数据支持。

关键词：禽流感病毒 H9N8 重配感染性

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欧亚类禽H1N1猪流感病毒HA蛋白单克隆抗体的制备及竞争ELISA检测方法的建立

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中国预防兽医学报 2022年第9期44卷 946-951,976页

作者：王飞飞黄凯伦宋祖晨刘雅茹张丹丹杨焕良乔传玲陈化兰陈艳中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业农村部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150069

为建立一种快速检测欧亚类禽H1N1猪流感病毒(EA H1N1 SIV)抗体的检测方法,本研究以EA H1N1 SIV代表株A/Swine/Liaoning/445/2018(LN445)灭活的全病毒免疫BALB/c小鼠,通过HI试验筛选得到7株HA蛋白单克隆抗体(MAb),分别命名为1B3、2B12、... 详细信息

为建立一种快速检测欧亚类禽H1N1猪流感病毒(EA H1N1 SIV)抗体的检测方法,本研究以EA H1N1 SIV代表株A/Swine/Liaoning/445/2018(LN445)灭活的全病毒免疫BALB/c小鼠,通过HI试验筛选得到7株HA蛋白单克隆抗体(MAb),分别命名为1B3、2B12、2E1、3B4、3F6、3G5、3H12。抗体亚类鉴定结果显示,HA蛋白MAb除3B4重链为IgG1之外,其余均为IgG2a,7株MAb轻链均为κ链。间接免疫荧光试验结果显示,7株HA蛋白MAb均可以与EA H1N1 SIV发生特异性反应。采用纯化的EA H1N1 SIV(LN445)灭活全病毒作为包被抗原,以EA H1N1 SIV SPF猪阳性血清作为待检血清,选取HA蛋白MAb 2B12作为竞争抗体,经条件优化后初步建立了检测EA H1N1 SIV抗体的竞争ELISA方法。特异性试验结果显示EA H1N1 SIV的阳性血清对2B12 MAb具有良好的阻断作用,而甲型H1N1 SIV、H3N2 SIV、猪圆环病毒2型(PCV2)、轮状病毒(RV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、非洲猪瘟病毒(ASFV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)和肠致病性大肠杆菌(EPEC)阳性血清对其均无阻断作用,表明该方法的特异性较强;敏感性试验结果显示,该方法对HI效价为1:10的EA H1N1 SIV阳性血清检测仍为阳性结果,敏感性较高;重复性试验结果显示,该方法批内、批间变异系数均小于10%,重复性较好。利用本研究建立的竞争ELISA方法与GB/T 27535-2011猪流感HI抗体检测方法同时对100份临床猪血清样品进行检测,结果显示该方法与国标HI检测方法总体符合率为81%,表明该方法的准确性较高。本研究为EA H1N1 SIV抗体检测和流行病学调查提供了有效的检测手段。

关键词：欧亚类禽H1N1 猪流感病毒单克隆抗体竞争ELISA方法

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TRIM74对流感病毒复制机制影响的研究

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中国预防兽医学报 2022年第10期44卷 1025-1033页

作者：叶苗苗孙楠李奇兵石文军王波王广文姜丽陈化兰李呈军中国农业科学院哈尔滨兽医研究所、兽医生物技术国家重点实验室/农业农村部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150069

为探究三方基序蛋白74(TRIM74)对流感病毒复制的影响,本研究设计并合成靶向TRIM74基因的siRNA,即siTRIM74-331,将其转染A549细胞后,利用荧光定量PCR检测siTRIM74-331对细胞中TRIM74转录水平的干扰效率,利用细胞活力检测试剂盒检测该siRN... 详细信息

为探究三方基序蛋白74(TRIM74)对流感病毒复制的影响,本研究设计并合成靶向TRIM74基因的siRNA,即siTRIM74-331,将其转染A549细胞后,利用荧光定量PCR检测siTRIM74-331对细胞中TRIM74转录水平的干扰效率,利用细胞活力检测试剂盒检测该siRNA对细胞活力的影响。结果表明siTRIM74-331的干扰效率较好且不影响细胞活力。将siTRIM74-331转染A549细胞后感染禽流感病毒(AIV)A/WSN/1933株(WSN),并于感染后24 h、48 h分别进行噬斑滴定,结果显示干扰TRIM74的表达可抑制流感病毒的复制。利用慢病毒包装系统构建TRIM74过表达细胞系(A549-pLVX-TRIM74)和对照细胞系(A549-pLVX),并经qPCR及western blot鉴定正确后,将WSN株(MOI 0.01)分别感染上述两种细胞,并于感染后24 h、48 h收集细胞上清分别进行噬斑滴定。结果表明,过表达TRIM74能够显著促进流感病毒的复制。将WSN株(MOI 5)分别感染A549细胞和HEK293T细胞后,分别采用qPCR和western blot检测细胞中内源TRIM74的转录及蛋白表达水平,结果表明WSN能够刺激细胞内源TRIM74的转录与表达,推测宿主细胞可能通过增强TRIM74的表达响应流感病毒的感染。为探究TRIM74在宿主细胞天然免疫反应中发挥的作用,将不同剂量的表达质粒pTRIM74-V5转染HEK293T细胞,经western blot确定其能够在细胞中呈剂量依赖性表达后,将上述剂量的p TRIM74-V5与p RL-TK、pIFN-β-Luc报告质粒共转染HEK293T细胞(1组);同时将上述剂量的pTRIM74-V5与p RL-TK、pISRE-Luc报告质粒共转染HEK293T(2组),24 h后感染仙台病毒(SeV),12 h后采用双荧光素酶试验检测过表达TRIM74对IFN-β和ISRE启动子活性的影响。结果显示,转染空载体的对照细胞在感染SeV后上述两种启动子的活性均升高,而1组和2组细胞中该两种启动子的活性均极显著下降,且随pTRIM74-V5转染量的升高二者的活性均呈下降趋势。分别将SeV和poly(I:C)刺激TRIM74过表达及干扰其表达的HEK293T细胞,12 h后采用q PCR分别检测各组细胞中IFN-β和ISG56 mRNA的转录水平。结果显示,TRIM74过表达的各组细胞中IFN-β及ISG56 mRNA的转录水平均显著高于未刺激的Mock组细胞,且均极显著低于转染空载体的阴性对照细胞;干扰TRIM74表达的各组细胞中IFN-β及ISG56 mRNA的转录水平均显著高于未刺激的Mock组细胞,且均极显著或者显著高于转染NC siRNA的阴性对照细胞,表明TRIM74能够负调控细胞中相应干扰素的分泌。本研究结果首次表明TRIM74能够促进流感病毒的复制,并负调控宿主细胞中IFN-β信号通路,该研究丰富了流感病毒与宿主因子间的调控网络,为深入了解TRIM74蛋白的功能奠定了实验基础。

关键词： TRIM74 流感病毒干扰素

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宿主因子KRT2影响A型流感病毒复制的研究

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中国预防兽医学报 2022年第3期44卷 237-242页

作者：王一涵石文军李奇兵胡玉珍赵玉辉王广文严娅姜丽陈化兰李呈军中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业农村部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150069

本实验室前期通过质谱分析筛选到宿主因子II型角蛋白2(KRT2),推测其可能与流感病毒复制相关。为进一步研究KRT2对流感病毒复制的影响,本研究将真核表达质粒pCAGGS-KRT2-Myc转染至HEK293T细胞24 h后,感染A/WSN/1933(H1N1)株病毒,采用噬... 详细信息

本实验室前期通过质谱分析筛选到宿主因子II型角蛋白2(KRT2),推测其可能与流感病毒复制相关。为进一步研究KRT2对流感病毒复制的影响,本研究将真核表达质粒pCAGGS-KRT2-Myc转染至HEK293T细胞24 h后,感染A/WSN/1933(H1N1)株病毒,采用噬斑滴定、western blot及激光共聚焦技术检测过表达KTR2蛋白对流感病毒复制影响,结果显示,过表达KRT2蛋白后流感病毒滴度和NP蛋白表达均下降;激光共聚焦试验检测结果显示,过表达KRT2蛋白后,流感病毒复制早期NP蛋白向细胞核内的聚积受到了抑制。针对KRT2基因设计特异性siRNA-1/2,转染A549细胞后采用细胞活力检测试剂盒检测下调KRT2蛋白表达后对A549细胞活力影响,进一步利用荧光定量PCR方法检测干扰效率,筛选最佳siRNA,结果显示,与对照siRNA相比,KRT2特异性siRNA处理不影响A549细胞活力,且siRNA-2能更有效降低KRT2的表达。以A/WSN/1933(H1N1)株病毒感染siRNA-2转染后的A549细胞,采用噬斑滴定、western blot及激光共聚焦技术检测siRNA-2干扰下调KTR2蛋白表达对流感病毒复制影响,上述试验结果均显示,KRT2表达下调后病毒滴度和NP蛋白表达均显著提高;激光共聚焦试验结果显示,下调KRT2蛋白表达后,流感病毒在复制早期阶段受到了抑制。本研究结果首次表明,KRT2是一种负调控流感病毒复制的宿主因子。本研究丰富了流感病毒与宿主因子互作的网络,也深化了对宿主因子影响流感病毒复制机制的认知。

关键词：角蛋白2 流感病毒病毒复制

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鸭肠炎病毒疫苗株UL41和UL40基因间隔区作为其复制非必需区的鉴定

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中国预防兽医学报 2022年第9期44卷 996-1000页

作者：刘静赵玉博焦晨晨陈普成胡玉珍姜永萍陈化兰柳金雄中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150069

为探寻鸭肠炎病毒(DEV)基因组中可插入外源基因的复制非必需区,本研究利用CRISPR/Cas9基因编辑技术,构建重组质粒pX459-ul4140和含有红色荧光蛋白(RFP)表达框架的穿梭片段UL41-RFP-UL40,转染后拯救重组病毒,并对其进行噬斑纯化。通过PC... 详细信息

为探寻鸭肠炎病毒(DEV)基因组中可插入外源基因的复制非必需区,本研究利用CRISPR/Cas9基因编辑技术,构建重组质粒pX459-ul4140和含有红色荧光蛋白(RFP)表达框架的穿梭片段UL41-RFP-UL40,转染后拯救重组病毒,并对其进行噬斑纯化。通过PCR和荧光显微镜观察对重组病毒进行鉴定,结果显示,经拯救得到表达RFP的重组病毒rDEV-ul4140RFP;所有代次的rDEV-ul4140RFP在显微镜下均能观察到红色荧光,表明重组病毒中的RFP基因稳定存在。将rDEV-ul4140RFP和亲本病毒DEV疫苗株接种鸡胚成纤维细胞(CEFs)后,收集24 h、48 h、72 h、96 h的细胞和上清,检测TCID并绘制生长曲线。结果显示,rDEV-ul4140RFP在CEF中的生长曲线和亲本DEV疫苗株无显著差异。利用SPF鸭对rDEV-ul4140RFP的免疫保护效果进行评价。攻毒保护实验结果显示,rDEV-ul4140RFP和亲本病毒DEV疫苗株均能对SPF鸭提供100%的免疫保护。本研究结果证实DEV基因组UL41和UL40基因间隔区可作为外源基因的插入位点,为以DEV为载体构建相关重组疫苗提供参考依据。

关键词：鸭肠炎病毒 CRISPR/Cas9 复制非必需区

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N9亚型禽流感病毒NA蛋白在昆虫细胞中的表达与鉴定

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中国预防兽医学报 2022年第7期44卷 777-781页

作者：衡武昌崔鹏飞张元成邢鑫谷文丽颜成孔兴天王丛丛彭大新邓国华陈化兰扬州大学兽医学院江苏扬州225009 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150069

为了表达具有反应原性的N9亚型禽流感病毒(AIV)神经氨酸酶(NA)蛋白,本研究将DK/HuN/S11670/2015(H11N9)株NA基因克隆至杆状病毒转移载体中,构建重组转移载体pFastBacHT A-N9并经PCR和测序鉴定后转化DH10Bac感受态细胞,经PCR鉴定获得了... 详细信息

为了表达具有反应原性的N9亚型禽流感病毒(AIV)神经氨酸酶(NA)蛋白,本研究将DK/HuN/S11670/2015(H11N9)株NA基因克隆至杆状病毒转移载体中,构建重组转移载体pFastBacHT A-N9并经PCR和测序鉴定后转化DH10Bac感受态细胞,经PCR鉴定获得了重组杆粒rBacmid-N9,转染昆虫细胞sf21获得重组杆状病毒rBaculovirus-N9。将获得的P3代重组杆状病毒感染sf21细胞后经间接免疫荧光试验(IFA)检测N9蛋白的表达和定位,采用western blot鉴定N9蛋白的反应原性。将杆状病毒表达的重组N9蛋白包被ELISA酶标板,初步建立间接ELISA方法,利用该方法分别检测N9蛋白抗体阳性鸡血清和阴性鸡血清。IFA和western blot结果显示,N9蛋白正确表达且主要锚定在细胞膜上,表达的N9蛋白可以与鼠源N9蛋白单克隆抗体发生特异性反应。间接ELISA方法结果显示,初步建立的间接ELISA方法可以检测鸡血清中的N9抗体。上述结果表明,经杆状病毒—昆虫细胞表达的N9蛋白具有良好的反应原性,为N9 AIV检测试剂盒的研发奠定了基础。

关键词：禽流感病毒神经氨酸酶 N9亚型昆虫细胞杆状病毒

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H5亚型不同分支禽流感病毒HA基因混编文库的构建

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中国预防兽医学报 2021年第12期43卷 1245-1251页

作者：焦晨晨王波赵玉博丁蕾蕾刘静陈普成姜永萍陈化兰柳金雄中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150069

为探究DNA Shuffling能否用于H5亚型不同分支禽流感病毒(AIV)HA基因混编文库的建立,以及利用该基因文库构建重组牛痘病毒文库的可行性,本研究构建了包含H5亚型AIV 2.3.4.4分支代表株A/Chicken/Guizhou/S4184/2017(H5N6)(简称GZ/S4184)和... 详细信息

为探究DNA Shuffling能否用于H5亚型不同分支禽流感病毒(AIV)HA基因混编文库的建立,以及利用该基因文库构建重组牛痘病毒文库的可行性,本研究构建了包含H5亚型AIV 2.3.4.4分支代表株A/Chicken/Guizhou/S4184/2017(H5N6)(简称GZ/S4184)和2.3.2.1d分支代表株A/Chicken/Liaoning/SD007/2017(H5N1)(简称LN/SD007)HA基因的重组质粒pRB-GZ/S4184HA和pRB-LN/SD007HA,并经PCR鉴定正确后分别作为模板经PCR扩增两种病毒的HA基因,并利用DNaseⅠ消化后,选择两种病毒10 bp~50 bp的HA基因等质量混合后作为模板,经Shuffling PCR混编后,选取弥散条带大量集中在2000 bp左右的Shuffling PCR产物为模板经特异性PCR扩增两种AIV的混编HA(mHA)基因。结果显示,获得2000 bp左右的mHA基因,且与从上述两种重组质粒扩增的HA基因片段大小基本一致。将mHA基因克隆至pRB21质粒中,构建pRB21-mHA质粒文库,并经PCR鉴定和测序分析其多样性。结果显示,随机挑选200个菌落检测pRB21-mHA质粒文库的阳性率为92.5%,且均呈现2种亲本病毒HA基因的碱基特性且均不相同,表明构建了HA基因序列呈现多样性的pRB21-mHA质粒文库。利用pRB21-mHA质粒文库转染预先感染缺陷牛痘病毒(rdVV-ΔVP37)的CV-1细胞,构建重组牛痘病毒(rVV-mHA)库,并分别经PCR、测序和间接免疫荧光试验(IFA)鉴定。结果显示,随机挑选的200个病毒噬斑,检测重组牛痘病毒库rVV-mHA的阳性率为96%;且其mHA基因编码的氨基酸序列均呈现出2种亲本病毒HA基因的氨基酸序列特性且均不相同;IFA鉴定结果显示,mHA基因均能够通过重组牛痘病毒在细胞中正确表达。以上结果表明,利用Shuffling PCR技术获得了同时呈现H5亚型AIV GZ/S4184和LN/SD007株HA基因特性的pRB21-mHA质粒文库和rVV-mHA库。本研究首次基于H5亚型不同分支AIV的HA基因,利用DNA Shuffling技术建立了Shuffling PCR方法用于构建AIV的mHA基因文库,并利用该基因文库构建重组牛痘病毒文库,为后续相关研究奠定了物质和技术基础。

关键词：禽流感病毒不同分支病毒血凝素 Shuffling PCR

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一株低致病性H5N6亚型禽流感病毒(AIV)的生物学特性分析

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中国预防兽医学报 2021年第8期43卷 801-805,811页

作者：李明慧田井满白晓利刘丽娜李雁冰陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业农村部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150069

2019年11月本实验室从家禽监测样品中分离鉴定到一株低致病性H5N6亚型禽流感病毒(AIV),命名为A/chicken/Hebei/S1/2019(H5N6)(简称CK/HeB/S1/19)。为进一步了解其生物学特点,本实验对其全基因组测序并进行遗传演化分析,结果显示,该病毒... 详细信息

2019年11月本实验室从家禽监测样品中分离鉴定到一株低致病性H5N6亚型禽流感病毒(AIV),命名为A/chicken/Hebei/S1/2019(H5N6)(简称CK/HeB/S1/19)。为进一步了解其生物学特点,本实验对其全基因组测序并进行遗传演化分析,结果显示,该病毒属于2.3.4.4h分支,碱性裂解位点为PLRESR↓GLF,属于低致病性AIV(LPAIV)。对其各基因节段分别经BLAST比对后发现,其外部基因来源于H5N6亚型AIV,内部基因完全来源于H9N2亚型AIV,推测该分离株为一株重组病毒。将CK/HeB/S1/19病毒株接种SPF鸡及BALB/c小鼠研究其致病性,结果显示,该病毒虽然能够感染鸡,但不能在鸡体内有效复制,而该病毒未经适应就可在3只小鼠的鼻甲和肺中进行复制,对小鼠呈低致病性。本研究为H5亚型AIV的检测和其感染的综合防控提供了参考依据。

关键词：禽流感病毒低致病性 H5N6 进化分析致病性

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