检索结果-内蒙古大学图书馆

西南农业学报 2009年第5期22卷 1453-1455页

作者：赵朴郑玉姝贾贝贝乔传玲陈化兰刘兴友李海燕河南科技学院动物科学学院河南新乡453003 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

本研究通过RT-PCR扩增了猪流感病毒A/Swine/Inner Mongolia/547/01(H3N2)的NP基因,并将其克隆入pMD18-T载体。重组pMD18-T经SalI和EcoR I酶切后得到的NP基因插入pMelBacB载体的SalI/EcoRI位点。PCR和限制性内切酶分析鉴定表明成功构建了... 详细信息

关键词：猪流感病毒 NP基因克隆转移载体

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

表达小反刍兽疫病毒F蛋白的重组山羊痘病毒疫苗的研究

引用

中国预防兽医学报 2009年第6期31卷 415-420页

作者：曲林茂陈伟业胡倩倩胡森张倩支海兵黄克和步志高南京农业大学动物医学院江苏南京210095 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／农业部兽医公共卫生重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001 中国兽医药品监察所北京100081

本研究利用gpt筛选基因和eGFP报告基因纯化筛选重组小反刍兽疫病毒(PPRV)F基因的重组山羊痘病毒(rGPV-PPRV-F),并经过PCR鉴定。免疫荧光和蛋白印迹试验都证实重组病毒能够感染绵羊羔羊睾丸细胞并表达PPRVF蛋白。以2×106PFU的rGPV-P... 详细信息

本研究利用gpt筛选基因和eGFP报告基因纯化筛选重组小反刍兽疫病毒(PPRV)F基因的重组山羊痘病毒(rGPV-PPRV-F),并经过PCR鉴定。免疫荧光和蛋白印迹试验都证实重组病毒能够感染绵羊羔羊睾丸细胞并表达PPRVF蛋白。以2×106PFU的rGPV-PPRV-F皮内注射免疫山羊3只,并于首次免疫后第28d以相同剂量进行二次免疫。分别于一免后21d和二免后14d采血后分离血清进行病毒中和试验。结果表明,一免后21d山羊痘病毒(GPV)中和抗体效价依次为1∶40、≥1∶80、≥1∶80,PPRV中和抗体效价依次别为1∶20、1∶40、1∶20,全部阳转;二免后14d,GPV中和抗体效价≥1∶80,PPRV中和抗体效价依次为1∶20、1∶80、1∶40。本研究为小反刍兽疫重组山羊痘疫苗的产业化奠定了基础。

关键词：小反刍兽疫 F蛋白山羊痘病毒载体重组疫苗中和抗体

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

鸡IFN-γDNA-壳聚糖纳米粒的制备及体外转染

鸡IFN-γDNA-壳聚糖纳米粒的制备及体外转染

引用

中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第十六次、中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十五次学术研讨会

作者：殷喆张文龙刘霓红杨涛步志高王君伟吴东来中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室黑龙江哈尔滨 150001 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨 150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室黑龙江哈尔滨 150001 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨 150030

构建了携带鸡干扰素(IFN-)重组真核表达质粒pCAGGS-ChIFNr-,制备成承载pCAGGS-ChlFN- 的壳聚糖纳米粒子。透射电镜观察制备的纳米粒子呈不规则球形,光子相关色谱(PCS)仪测定显示纳米粒子的平均粒径为172.6+5.1nm;Zeta电位为20.8±2.... 详细信息

构建了携带鸡干扰素(IFN-)重组真核表达质粒pCAGGS-ChIFNr-,制备成承载pCAGGS-ChlFN- 的壳聚糖纳米粒子。透射电镜观察制备的纳米粒子呈不规则球形,光子相关色谱(PCS)仪测定显示纳米粒子的平均粒径为172.6+5.1nm;Zeta电位为20.8±2.9mV;载基因纳米粒子的重组质粒DNA包埋效率和载药量分别为91.21±2.54％和31.93±0.16％。载基因壳聚糖纳米粒子可以有效地保护重组质粒DNA,防止核酸酶对其的降解作用,并能良好的从纳米粒子中释放重组质粒DNA。CEF细胞体外转染实验表明：包裹后的纳米粒子对细胞基本无毒性,使携带的外源基因能在CEF细胞中正确表达,其转染效率约为阳离子脂质体转染试剂LipofectamineTM2000 Reagent的1/6。

关键词：壳聚糖纳米颗粒鸡γ-干扰素基因体外转染真核表达

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

H5N1亚型高致病性禽流感病毒NP基因在昆虫细胞中的表达及其表达产物的生物学活性

引用

中国兽医科学 2008年第5期38卷 380-385页

作者：万春和刘明刘春国杨涛刘大飞齐金龙陈浩杜金铃李洪涛中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

根据GenBank上登录的H5N1亚型高致病性禽流感病毒(HPAIV)核蛋白(NP)基因序列设计引物,通过PCR扩增出A/Goose/HLJ/QFY/04(H5N1)毒株的NP基因片段,将其克隆到pFastBacGP67B杆状病毒载体上,将筛选的阳性重组转座载体pFastBacGP67B-NP转化... 详细信息

根据GenBank上登录的H5N1亚型高致病性禽流感病毒(HPAIV)核蛋白(NP)基因序列设计引物,通过PCR扩增出A/Goose/HLJ/QFY/04(H5N1)毒株的NP基因片段,将其克隆到pFastBacGP67B杆状病毒载体上,将筛选的阳性重组转座载体pFastBacGP67B-NP转化至含有杆状病毒穿梭载体的DH10Bac感受态细胞,经蓝白斑筛选和PCR鉴定,构建了杆状病毒表达载体,获得了重组转座子(rBacmid-NP),在脂质体介导下转染对数生长期的Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒(rBv-NP)。SDS-PAGE分析、Western-blotting检测、免疫组化分析和ELISA试验结果表明,分子质量约为54 ku的重组核蛋白得到了高效表达,该表达蛋白具有良好的生物学活性。

关键词：禽流感病毒核蛋白基因昆虫细胞杆状病毒表达

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

H1N1亚型猪流感病毒广东分离株全基因克隆及其遗传演化分析

引用

病毒学报 2008年第5期24卷 358-363页

作者：刘大飞刘明刘春国杨涛刘大程中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001 莱阳市城厢兽医站山东莱阳265200

为了研究H1N1亚型SIV遗传演化与变异的特性,采用RT-PCR技术分别扩增A/Swine/Guangdong/LM/2004(H1N1)的8个基因片段,分别将其克隆到pMD18-T载体,进行全基因组序列测定。核苷酸序列测定结果显示:LM株SIV各基因片段均未发现核苷酸插入或... 详细信息

为了研究H1N1亚型SIV遗传演化与变异的特性,采用RT-PCR技术分别扩增A/Swine/Guangdong/LM/2004(H1N1)的8个基因片段,分别将其克隆到pMD18-T载体,进行全基因组序列测定。核苷酸序列测定结果显示:LM株SIV各基因片段均未发现核苷酸插入或缺失现象。HA切割位点处的氨基酸序列序列为IPSIQSR↓G,与高致病性SIV的H1N1亚型毒株的分子特征不符合。HA基因含有6个潜在的N-糖基化位点,4个在HA1的第11、23、87、和276位,增加2个分别在HA2的154和213位点;NA基因不仅在58、63、68、88和146位含有高度保守的N-糖基化位点,而且在44和235位增加2个潜在的N-糖基化位点,这可能是近期H1N1亚型SIV的一个分子特征。核苷酸同源性结果:HA基因与类人谱系的流感病毒分离株有很高的同源性(99%),而其他基因均与古典猪谱系的流感病毒分离株同源性较高(87%～98%)。从绘制的各个片段进化树和核苷酸同源性分析结果,可以推测该毒株HA基因可能来源于类人谱系的流感病毒;而其他基因来源于古典猪谱系的流感病毒。

关键词：猪流感病毒 RT-PCR 克隆遗传演化分析

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

H9亚型禽流感病毒SD96株HA蛋白特异性单抗的制备及鉴定

引用

中国预防兽医学报 2008年第2期30卷 149-152,160页

作者：李雪平邓国华田国斌陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

本研究用H9N2亚型禽流感病毒分离株A/Chicken/Shandong/6/1996(CK/SD/6/96)免疫6周龄BALB/c雌性小鼠,取免疫后小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合。采用血凝抑制(HI)和ELISA方法筛选阳性细胞克隆,连续多次克隆培养后获得3株能稳定分泌H9亚... 详细信息

本研究用H9N2亚型禽流感病毒分离株A/Chicken/Shandong/6/1996(CK/SD/6/96)免疫6周龄BALB/c雌性小鼠,取免疫后小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合。采用血凝抑制(HI)和ELISA方法筛选阳性细胞克隆,连续多次克隆培养后获得3株能稳定分泌H9亚型HA特异性单抗的细胞株1F4C4、9F12D1、2C5H12。3株阳性杂交瘤细胞的培养上清及腹水对CK/SD/6/96的HI效价分别为26、24、21和212、210、27。特异性试验表明该3株单抗均不与其他主要禽类病毒和其他14个HA亚型的禽流感病毒发生交叉反应。1F4C4和2C5H12抗体亚类为IgG2b,9F12D1为IgG2a。这3株单抗对H9亚型不同抗原群流感毒株有不同程度的中和作用,表现出单抗识别抗原位点的差异性,为进一步研究H9亚型流感病毒的抗原性差异以及抗原识别提供了物质基础和条件。

关键词：禽流感单抗 ELISA

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

检测流感病毒H5亚型抗体竞争ELISA方法的建立及初步应用

引用

中国预防兽医学报 2008年第9期30卷 716-720页

作者：李雪平邓国华高玉伟唐艳玲艾嘉亮葛叶陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

本研究采用灭活的H5亚型禽流感纯化病毒包被ELISA反应板,以辣根过氧化物酶标记的HA蛋白单克隆抗体作为竞争检测抗体,建立了检测H5亚型流感病毒抗体的竞争ELISA(C-ELISA)方法。实验结果表明:抗原最佳包被浓度为8.27μg/mL(1∶800),酶标... 详细信息

本研究采用灭活的H5亚型禽流感纯化病毒包被ELISA反应板,以辣根过氧化物酶标记的HA蛋白单克隆抗体作为竞争检测抗体,建立了检测H5亚型流感病毒抗体的竞争ELISA(C-ELISA)方法。实验结果表明:抗原最佳包被浓度为8.27μg/mL(1∶800),酶标抗体最佳稀释倍数为1∶800,待检血清最佳稀释倍数为1∶10。对已知阳性样品的检测结果表明,本研究中所建立的竞争ELISA方法的敏感性高于经典的血凝抑制方法(HI)。特异性试验表明该ELISA方法仅能检测H5亚型流感病毒抗体,具有良好的特异性。对临床样品检测表明C-ELISA与HI方法的符合率达到93%以上。该方法可以对不同种属动物血清H5亚型流感病毒抗体进行快速定量的检测,为H5亚型流感病毒流行病学调查与抗体的检测提供了一种快速、方便、敏感的方法。

关键词：禽流感单抗竞争ELISA

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

猪流感病毒血凝素基因原核表达及其在间接ELISA中的初步应用

引用

畜牧与兽医 2008年第11期40卷 10-13页

作者：陈艳乔传玲丁选亚杨焕良辛晓光韩庆功陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

利用RT-PCR方法扩增猪流感病毒A/Swine/Henan/11/2005(H1N1)血凝素(HA)基因,克隆于pMD18-T载体进行测序。以pMD18-HA为模板、利用带酶切位点的引物再次扩增HA基因的开放阅读框(ORF),克隆到表达载体pET32a中,经双酶切、测序及PCR鉴定得... 详细信息

利用RT-PCR方法扩增猪流感病毒A/Swine/Henan/11/2005(H1N1)血凝素(HA)基因,克隆于pMD18-T载体进行测序。以pMD18-HA为模板、利用带酶切位点的引物再次扩增HA基因的开放阅读框(ORF),克隆到表达载体pET32a中,经双酶切、测序及PCR鉴定得到阳性重组表达质粒pET-HA,将质粒转化到表达宿主菌BL21(DE3)中,经终浓度为1 mmol/L的IPTG诱导,SDS-PAGE结果显示,HA蛋白获得了高效表达,经Western-blot检测证实表达产物具有良好的免疫学活性,在间接ELISA中的初步应用表明具有良好的抗原反应性。本研究为以重组HA蛋白为抗原建立H1亚型猪流感抗体的ELISA检测方法奠定了基础。

关键词：猪流感病毒 HA基因原核表达

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

猪流感病毒M基因实时荧光定量PCR诊断方法的建立

引用

中国预防兽医学报 2008年第10期30卷 805-810页

作者：张春明乔传玲陈艳杨焕良辛晓光陈化兰冉多良中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001 新疆农业大学动物医学学院新疆乌鲁木齐830052

根据猪流感病毒(SIV)M基因的保守序列,设计并合成一对特异性引物和TaqManMGB探针,建立了SIVM基因实时荧光定量PCR检测方法。使用含有M基因的重组质粒pMD-M作为标准品绘制标准曲线,其相关系数为0.999,检测结果表明:该方法的敏感性可达到1... 详细信息

根据猪流感病毒(SIV)M基因的保守序列,设计并合成一对特异性引物和TaqManMGB探针,建立了SIVM基因实时荧光定量PCR检测方法。使用含有M基因的重组质粒pMD-M作为标准品绘制标准曲线,其相关系数为0.999,检测结果表明:该方法的敏感性可达到1个EID50,组间与组内重复试验变异系数分别为0.21%和0.65%,除SIV外,其他5种猪病病毒检测均为阴性,样品检测与病毒滴定及病毒分离结果的符合率均达到100%,该方法特异性强、重复性好,有望成为SIV的一种特异、敏感、快速的定量检测方法。

关键词： SIV Taq Man MGB探针实时荧光定量PCR

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

H5N1亚型高致病性禽流感病毒A/Duck/Guangxi/53/02株感染性克隆的构建

引用

中国兽医学报 2008年第5期28卷 536-538,552页

作者：温峰琴樊树芳胡永浩邓国华陈化兰甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室／兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

A/Duck/Guangxi/53/02(DKGX)是从我国南方健康鸭体内分离到的H5N1亚型禽流感病毒,该病毒对鸡具有高致病性,而且能感染哺乳动物模型Balb/c小鼠,但不致死小鼠(MLD50>106.5)。本试验根据GenBank上的序列DKGX/53/02设计了8对引物,建立了... 详细信息

A/Duck/Guangxi/53/02(DKGX)是从我国南方健康鸭体内分离到的H5N1亚型禽流感病毒,该病毒对鸡具有高致病性,而且能感染哺乳动物模型Balb/c小鼠,但不致死小鼠(MLD50>106.5)。本试验根据GenBank上的序列DKGX/53/02设计了8对引物,建立了对DKGX的8质粒反向遗传操作系统,并通过细胞转染技术成功拯救了R-DKGX。R-DKGX在对哺乳动物模型Balb/c小鼠的致病性方面保持了与亲本野生毒(W-DKGX,MLD50>106.5)一致的生物学特性,即106EID50鼻腔感染小鼠后3 d均只能在肺脏检测到病毒,病毒含量分别为(3.22±0.51)lgEID50/mL和(3.69±0.88)lgEID50/mL,MLD50>106.5。

关键词：禽流感病毒 H5N1 感染性克隆

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：